Способ приготовления гемолитической системы Советский патент 1983 года по МПК A61K35/16 

(Я

с

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГЕМОЖТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ для определения активности комплементсвязывающихг антител путем обработки бараньих эритроцитов гемолитической .сывороткой отличающийся тем, что, с целью повышений точности определения -активности комплементовязывающих антител, взвесь обработанных эритроцитов центрифугируют, к образовавшемуся осадку добавляют F ав фрагменты гемолитической сыворотки до первоначального объема и полученную смесь инкубируют при 35-37 С в течение 20-30 мин.

ьэ

00

00

со

СО; Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунодиагностике. Известен способ приготовления гемолитической системы для реакции связывания комплемента (РСК) путем обработки бараньих эритроцитов гемо литической сывороткой fl . Однако известный способ не обеспечивает точное определение активности комплементсвязывающих антител,. Целью изобретения является повышение точности определения .активнрс ти комплементсвязыва:ющих антител Указанная цель достигается тем, что согласно способу приготовления гемолитической системы путем обработки бараньих эритроцитов гемолити ческой сывороткой взвесь обработанн эритроцитов центрифугируют, к образовавшемуся осадку добавляют F ав фрагменты гемолитической сыворотки до первоначального объема и получен ;ную смесь инкубируют при 35-37°С в течение 20-30 мин. П р и м е р 1.5 мл гемолитической системы, предварительно прйгото Условия разработки ге системы препарата F ав Температура,с Дли

30

35

37

40

1:16-1:32 1:32-1:64 1:64 1:64 1:128 1:128 1:64 1 :128 1 :128 1:64 1:32 1:4 ленной по известному способу, центрифугируют в течение 10 мин при 1 тыс. об/мин. Затем отсасывают 4,75 мл надосадка. К осадку прибавляют 4,75 мл гемолитической сыворотки, обработанной пепсином в присутствии 0,03 М солянокислого цистеина для фрагментирования антиэритроцитарных антител, В качестве препаратов F ав фрагментов антизритроцитарных антител можно применять Р(ав) и Р(ав)2 чистых антител или глобулиновых фракций, выделенных из гемолитической сыворотки, а также фрагментированную перевариванием гемолитическую сыворотку, потерявшую литическую активность в отношенииэритроци ов в присутствии комплемента.Смесь выдерживают в течение 10, 20 и 30 мин при 30, 35, 37 и 40°С. С приготовленньами пробами гемолитической системы исследуют сыворотку крови больного клещевым энцефалитом, в которой предварительно обнаружены антитела к бараньим эритроцитам в тит- ре 1:64. Результаты опыта.приведены в табл.1. Т а j ической Титр РСК с антиентовгеном клещевого энцефалита ость, Как видно из табл. }, максималь ная чувствительность РСК достигнут в тех случаях, когда гемолитическу сыворотку обрабатывают препаратом F ав фрагментов антиэритроцитарных антител в течение 20-30 мин при 35-37-с (при других условиях обра|ботки титр РСК более низок) . Приме р2. 10 мл гемолитиче кой системы, предварительно приготовленной по известному способу, центрифугируют в течение 5 мин при 1,5 тыс. об/мин. После этого-отсасывают 9,5 мл надосадка. -К осадку прибавляют 9,5 мл гемолитической сыворотки, обработанной пепсином в присутствии 0,03 М солянокислого цистеина для фрагментирования анти эритроцитарных антител. Смесь выдерживают в течение 30 мин при ЗТ С приготовленными по описанному и известному способам гемолитическим системами исследуют пять сьшороток крови больных людей. Полученные результаты приведены в табл.2. -. т а б л и ц а Титр РСК с гемолити Исследуемая ческой системой, пр готовленной по спосыворотка, № -СОбу известно предлагаемомуму 1615/1 1616/1 1612/.2 1621/1 1632/2 Как видно из табл.2, использование гемолитической системы, приготовленной по предложенному способу, обеспечивает более полное выявление кЬмплементсвязывающих антител, чем при использовании гемолитической системы, приготовленной по известному способу. Так, по известному способу антитела были выявлены в 4 из 5 проб, а по предлагаемому - во всех 5 пробах; при этом но всех случаях титр антител, опредёляи «ый с гемолитической системой, приготовленной по предлагаемому способ-у, в 2-4 и более раз выше, чем с гемолитической системой, приготовленной по известному способу. Специфичность предлагаемого способа подтверйдается тем, что при постановке РСК с девятью различными антигенами в сыворотках крови больных выявляли антитела только к антигену возбудителя, вызвавшего данное заболевание, но не к другим антигенам . Использованный режим центрифугирования гемолитической системы (510 мин при 1-1,5 тыс.об/мин) определяется легкой повреждаемостью нативных эритроцитов при большой скорости центрифугирования и необходимой полнотой их осаждения. Достигаемой центрифугированием в течение 5-10 мин. Таким образом, способ позволяет повысить точность определения активности комплементсвязывакхцих антител.