Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR 80 - источник умеренного фага ХП серотипа Х гетероиммунной категории Советский патент 1991 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к лабораторной диагностике.

Цель изобретения - дикий лизоген- ный неэпидемический штамм 80 Vibrio cholerae eltor несущий новый фаг X гетероиммунной категории 80, используемый в системе тест-культур фаго- типирования холерных вибрионов классического и эльтор биотипа.

Культуралько-морфологические признаки.

Подвижные слегка изогнутые палочки 1,1-2,6 мкм в длину и 0,2-0,4 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образуют грамотрицательны.

На твердых, питательных средах (агар Мартена, агар Хотингера рН 6iO,2) образуют через 18 ч выращивания при 37+1°С круглые диаметром

3,0±0,3. мм полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотнелным центром. На жидких питательных средах (бульон Мартена, 1%-ная пептонная вода, бульон Хотингера, рН 7,8±0,2) через 6 ч выращивания при 374;1°С образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности „

Физиологические признаки Тест на оксидазу положителен. Штамм разлагает до кислоты без газа маннозу, глюкозу, сахарозу, маннит, не разлагает арабинозу, инозит, лак- торух ферментирует и окисляет глюкозу на среде Хыо-Дейфсона, ферментирует крахмал и желатину, не образует дигидролазу аргинина, образует декар- бокснлазы лизина и орнитина, не растет при повышенной (7-10%) концентрации хлорида натрия, гемолизирует эриО

оо

-vj

00

троциты барана по Грейгу, агглютинирует куриные эритроциты, не чувствителен к полимиксину.

Серологические свойства.

Штамм агглютинируется до титра холерными сыворотками РО и Инаба.

Исследования умеренного фага 80 под электронным микроскопом показывают, что он относится к II морфо- логической группе по классификации А.С.Тиохоненко, по серологическим свойствам принадлежит к XII серотипу холерных фагов. На газоне индикаторного штамма Vibrio cholerae eltor- 570 образует очень меткие неправильной формы мутные колонии 1,OiO,2 мм в диаметре.

Штамм 80, депонирован в музее живых культур Всесоюзного научно-иссле- довательского противочумного института Микроб под номером КМ-24 (80).

Пример. Для получения специфической тест-культуры 570-80 готовят фильтрат (фильтрацией через бактерио- логические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37°С штамма 80 и в количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста индикаторного штамма 570 и 5,0 мл 0.7%-ного агара Мартена (расплавленного и охлажденного до 45°) перемешивают и выливают на 2%-ну агаровую пластинку в чашке Петри, дают застыть и инкубируют 18 ч при 37 С

При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в центр негатив

Q

5 „

5

ной колонии забирают фагорезистентные вибрионы и переносят в пробирку с 0,1 мл бульона, из которого готовят десятикратные разведения в бульоне. Из каждого разведения высевают на агаровые пластинки в чашках Петри по 0,1 мл и распределяют шпателем по поверхности агара. Через 18 ч инкубирования при 37°С на поверхности агара обнаруживают изолированные колонии лизогенных по фагу 80 клонов штамма 570, отбор которых ведут по методу Н.Н.Жукова-Вережникова и А.С.Пехова.

Лизогенный клон 570/80 принимают в4 качестве тест-культуры в системе других тест-культур 485/41, 570/70, 485/222Н, 485/132, 485/98,х, 570/611, 570/893, 570/К901, несущих умеренные фаги других девяти гетероиммунных категорий. Для определения типа иммунитета умеренных фагов вибрионов эльтор различной эпидемической значимости. I

Результаты испытаний представлены

в таблице.

Результат проверки на наличие умеренного фаша штамма V.eltor 80 методом капли и Грациа на индикаторном штамме V.eltor 570: Грациа - сливной лизис, каплей - много колоний.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor KM-24 (80) - источник умеренного фага XII серотина X гетероиммун- ной категории.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к лабораторной диагностике холерных вибрионов. Цель изобретения - новый лизогенный неэпидемический штамм 80 Vibrio cholerae eltor, несущий фаг X гетероиммунной категории 80. Цтамм 80..обладает типичными для вида культурально-морфо- логическими и физиологическими признаками, относится серологически к серовару Огава. Фаг 80 относится к XII серототипу холерных фагов II морфологической группе по систематике А.С.Тихоненко. При лизогенизации реципиентного штамма Vibrio cholerae 570 фаг 80 создает специфический иммунитет. Субкультуру 570/80 используют для прямого фаготипирования холерных вибрионов Эльтор. 1 табл. с S

Характеристика типа иммунитета умеренного фага штамма V.eltor 80