Способ получения тетразолилалкоксикарбостирилов Советский патент 1983 года по МПК C07D403/12 A61K31/4725 A61P1/04 A61P7/02 A61P9/12 A61P11/06 A61P25/28 

Изобретение относится к способу получения новых тетраэолилалкоксикарбостирилов, обладающих ценными фармакологическими свойствами, кот рые могут найти применение в медиц не. Известна реакция О-алкилировани фенолов алкилгалогекидами и их про изводными Цель изобретения - получение но вых тетразолилалкоксикарбостирилов обладающих ценными фармакологическ ми свойствгили. Поставленная цель достигается согласно способу получения тетразолилалкоксикарбостирилов общей фо мулы где R водород, С,,-С|,.-алкил, Cg-C алкенил, алканоил с 1-4 атомами углерода, фёнилапкил, где алкйл имеет C;,-Q бензоил или триметоксибензоил;водород, С; -С -апкил, или группа формулы Н--К/ J II -0-А,К где С -С -алкил, Cз-Cg-циклoaл кил(цнклоалкил)-алкил, где (циклоалкил)-алкил, где циклоалкил имеет Cj-Cgи C;f-C J -aлкил, незамещенный фенил или замещенный одним или двумя заместителями из числа галоид-,нит.рогруппа или С),-С -гшкил; или фенилалкил, где гшкил имеет С, -Сц и фенил может быть замещеа одним или дву мя заместителями из числа С -С -алкил, диалкиламин, где алкил имеет Cyj-C / или алкилендиоксигруппы; где алкилен имеет А - алкилен имеет Cj, пунктир означает возможную двойную связь в положении 3 и 4; и группа К-К. --V может занимать только одно из положений 4, 5, 6, 7 или 8, и когда R является такой группой, то положения 5, 6, 7 или 8 не могут 1меть этой группы, в котором оксикарбостирил общей формулы где R и пунктир имеют указанные знап чения; R - водород, С,.алкил, или оксигруппа и последняя может занимать только одно положений 4, 5, 6, 7 или и если оксигруппа занимает положение 4, то положение 5, 6, 7 или 8 имеют заместители, отличные от оксигруппы подвергают взаимодействию с производным тетразола общей формулы У где R и А имеют указанные выше зна чения; X - галоген, с последуюпщм выделением целевого продукта. Соединения (t), получаемые по Предлагаемому способу, ингибИруют агрегацию тромбоцитов крови, обладают противовоспалительной.-.активностью, противоязвенным, сосудорасширяющим действием, ингибирует фосфодиэстеразу и могут найти применение в качестве антитромбозны; средйтв,. улучшающих мозговой кровоток, противоязвенных, антигипертонических и антиастматических средств. Соединения показывают высокую эффективность при профилактике или лечении вышеуказанных заболеваний при длительном применении, обладают невысокой токсичностью и оказывают малое побочное действие на сердце, не вызывая тахикард и и миокардной недостаточности.. Способ можно проводить в присутствии акцептора галогеноводорода из числа неорганических оснований, таких как гидроокись натрия или калия, карбонат натрия или калия, кислый углекислый калий или натрий, или карбонат серебра; щелочные металлы, как натрий или калий; алкоголяты, такие как метилат или этилат натрия; и органических оснований, таких как триэтиламин, пиридин, Ы,Ы-диметиланилин, N-метилморфолин, 4-диметилПолучают 16,1 г 1-циклогёксил-5- хлорметилхетраэола в виде весцветмыхигольчатых кристаллов, .101103 С.

Справочные прим е- Р ы 4-13. Используя способ, аналогичный описанному в примере 3, получсцот следующие соединения;

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕТРАЗОЛИЛАЛКОКСИКАРБОСТИРИЛОВ общ ;й формулы N-N д;1, АЗ где R - водород; С;,-С -алкил С2-С алкекил С -С -алканоил, фенилалкил, где алкил имеет , бенэоил или триметоксибензоил; R2 - водород, С -С -алкил или группа формулы N-V II II, -0-А- „хМ W R3 Л I где R - Сц-С -алкил, С -Св-циклоалкил, (циклоалкил)-алкил, где циклоалкил имеет С ,,-С к .-алкил, незамещенный фенил или замещенный одним или двумя заместителями из числа галоид-, нитрогруппа или С;,-С алкил; или фенилалкил, где алкил имеет и фенил может быть заMentBH одним или двумя заместителями из числа Сц-С -алкил, где алкил имеет алкиленд:.иоксигруппы, где .алкилен имеет j А - алкилен имеет пунктир означает возможную двойцую связь в положении 3 и 4; и группа НN -а-дЛ . ,1 : может занимать только одной из положений 4, 5, 6, 7 или 8, и когда К является такой группой, то положения 6, 5, 7 или 8 не могут иметь этой группы, отличающийся тем что оксикарбостирил общей формулы л где Н и нунктир имеют указанные знаОд 4 чения; ,2 - водород, С -Cw-алкил или оксигруппа и последняя мо00 жет занимать только одно из ; положений 4, 5, 6, 7 или 8, сг и если оксигруппа занимает положение 00 4, то положения .5, ,6, 7 или 8 имеют эгшестители, отличные от оксигруппы, подвергают взаимодействию с производными тетраэола общей.формулы v-v -AJ. , . I, . где it и А имеют указанные выше значения; X - галоген, с посг.едующим выделением целевого продукта.

51-Фенил-5-у-хлорпропилтетразол

61-Иэопропил-5- -хлорпропилтетразол

1-Циклопентил-5-у-хлорпропилтвтра зол

1-Циклогексиметил-5-| Хлорпропилтетразол.

9 1-Циклооктил-5-«-хлорпропилтетразол

10 1-циклогексш1-5-(4-хлор6утилтетразол

12 1-(2-Хлор-4-нитрофенил)-5-хлорметилтетразол

| 1

т.кип. 205-210 НИР: : fCflC 3 (TMS)

1,55 (d, 6Я) . 2,3 (m, 2fl) (t, 2Н) 2,65 (d, 2Н) 4,7 (m, Ifl)

ЯМР « СДСвз (TMS)

есцветная идкость 1,5-2,7 (m, ЮН) ,

3,1 (t, 2ЯЬ ,

4,6-5,0 (л, 1Я) ЯМР: ЙЧ:ДСвз (TMS)

0,3-2,7 (т, 13Я) 3,5 (t, 2Я),

ЯМР: «ГСДСе, (TMS) : 1,35-2,65 (т, 1бЯ), 3,0 (t, 2Я)

3,67 (t, 2Н), 4,2-4,7 (т, 1Я) ЯМР: (Г-СДсёз (TMS)

I 0,3-2,3 {т, 14Я) 2,6-3,1 (т, 2Н) 3,35-3,77 (т, 2Я)

3,90-4,50 (т, 1Я)

ЯМР: с -СДСез (TMS)

4,67 (S, 2Я) 5,37 (S, 2Я),

7,1-7,6 (т, 5Я) ЯМР: (Г-СДСе (TMS)

елтоватая идкость

8,25-8,60 (т, 2Я) ЯМР: (СДСвз TMS)

есцветная идкость

1,3 (t, ЗЯ),

2,75 4q, 2Я)

.4,8 (S, 2fl),

65-/3-(1-Бензилтетразол-5-ил)проПОКСИ/-3,4-дигидрокарбЬстирил 75-/1-Цнклогексилтетразол-5-ил/метокси-3,4-дигидрокарбостирил.

81-Вензил-5-/1-циклогексилтетразол-5-ил/метокси-З,4-дигидрбкарбостирил

95-/3-(1-Циклогексилтетразрл-5 ил)ПРОПОКСИ/-3,4-дигидрокарбостирил

0 5-/3-(1-Циклопентилтетразол-5-ил)пропокси/-3,4-дигидрокарбо.стирил

247-249

172-172,5

219,5-221

156-157

220-221 5

199,5-200 ный остаток экстрагируют 300 .мл хлороформа, хлороформный слой промывают разбавленным раствором едкого натра и затем разбавленной соляной кнслотой. После сушки сульфатом натрия хлороформ отгоняют, полученный оо таток перекристаллизочывают кэ ацетона. Получают 4,8 г 1-метил-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирила в виде бесцветных игольчатых кристаллов, т.пл. 150151,5с. Пример 4. К 100 мл этанола добавляют 3,22 г 6-оксикарбостирила и 3,51 мл 1,5-диазобицикло (5,4,0)ундецена-5(ДВУ) и полученную смесь при перемешивании кипятят с обратным холодильником. Затем по каплям в течение 90 мин добавляют 100 мл этанола, содержащего 7 г 1-бензил-5-у-иодпропилтетразола. После завершения добавления реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч и затем концентрируют. Полученный остаток экстрагируют 300 мл хлороформа, хлороформный слой промывают разбавленным водным раствором едкого натра, рйзбавленной соляной кислотой и водой и сушат сульфатом натрия. После удаления растворителя полученный остаток перекристаллизовывают из водного Этанола. Получают 4 г б-/3-(1-бензИлтетраэол-5-ил)пропокси/карбостирила в виде бесцветных игольчатых кристаллов, т.пл. 152-154°С. Примеры 5 - 41. Аналогично получают следующие соединения:

116-/(1-Циклогексилтетразол-5-ил) метокси/карбостирил

126-/3-(1 Фенилтетраэолг5-ил)пропокси/карбостирил

4-Метил-6-/3-(1-циклогексилтетраэол-5-ил)пропокси/карбостирил

б-/1-Бензилтетразол-5-ил/метокси/карбостирил

6-/3-(1тЦиклогексилметилте1:раЭОЛ-5-ИЛ)пропокси/карбостирил

б-/3-(1-Циклооктилтетразол-5ил:) пропокси/карбостирил

6-/3-{1-Циклопентилтетразол-5ил)пропокси/карбостирил

6-/4-(1-циклогексилтетразол-5ил)бутокси/карбостирил

1-Бензил-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил

1-Аллил-6-/3-(1-циклогексилтетра зол-5-ил) пропокси/карбости|)ил

6-/3-(l-Циклoгeкcилтeтpaзoл-5ил) ПРОПОКСИ/-3 , 4-дигйдрокарбостирил

1-Ацехил-б-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/-3,4-дигидрокарбостирил

23 6-/3-(1-Бензилтетразол-5-ил) Бесцветные пропокси/-3,4-дигидрокарбости- игольчатые рилкристаллы

6-/3-(1-Фенилтетразол-5-ил)проПОКСИ/-3,4-дигидрокарбостирил

6-/3-(1-Циклогексилметилтетразол-5-ил)ПРОПОКСИ/-3,4-дигидрокарбостирил

6-/4-(1-Циклогексиятетразол-5ил) бутокси/-3,4-дигидрокарбостирил

Продолжение таблицы

278-281

173-174

226-228

233,5-235

175-175,5

220-220,5

196,5-197,5 177,5-178,5

139-140 1 2-103,5

154,5-155,5

/ 124-126,5

136,5-138

I.

159-160,5

« -

137-138

- -

148-150,5

1-ПропиЬнил-6-(1-бензилтетразол27-5-ил)метокси-3,4-ДИГидрокарбостирил

1-ЭТИЛ-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)ПРОПОКСИ/-3,4-дигидрокарбостирил

6-/1-(2-Хлор-4-нитрофенил)тетраэрл-5-ил/метокси-3,4-дигидрокарбостирил

6-/1-(4-этилфенил)тетраэол-5ил/метокси-3,4-дигидрокарбостирил)

1-(3,4,5-Триметоксибензоил)-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил) Пример 42. 3,2 г 6-/3-(.1-циклогексилтетразол-5-ил) пропок- 5

Продолжение таблицы

ЯМР: CDCP, (TMS) ; ость 2,3

3,25 (m, 6Н) 5,2 (S, 2Н) 5,65 (S, 2Н) 6,6-6,9 (т, 2Н) 7,0-7,5 {т, 6Н)

106,5-108,5

214,5-216 (разложение) ис149-149,5 си/-3,4-дигидрокарбостирила и 3,4 ; 90%-ного раствора ДБМ добавля18т к

100 мл диоксана, смесь кипятят 9,5 и эатем охлаждают. После завершения реакции растворитель отгоняют, полученный остаток растворяют в хлороформе, органический слой промываю водным насыщенным раствором бикарбоната натрия и водой, сушат сульфатом натрия, после чего обрабатывают активированным углем. После отгонки растворителя полученный остаток очищают хроматографированием на колонке с силикагелем (элюент: хлороформ-метанол 10:1 (объём-объем кристаллический продукт перекристаллизовывают из хлороформа.

Получают 1,1 г 6/-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирила в виде бесцветных игольчатых кристаллов, т.пл. 211-212°С.

Пример 43. В 500 мл метанола вносят 2,5 г 6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирила, добавляют 0,1 г палладиевого iкатализатора и гидрируют при 2,5 ат при 50°С в течение 8 ч. После завершения реакции катализатор отделяют фильтрацией и фильтрат концентрируют досуха. Остаток перекристаллизовывают из смеси хлороформ-петролейный эфир.

Получают 1,5 г 6-/3-{1-циклоге| силтетразол-5-ил)пропокси/-3,4-дигидрокарбостирила в виде бесцветных

1-/3,4,5-Триметоксибензоил-6-/3-/(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/3,4-дигидрокарбостирил

1-Пропионил-6-/(1-бензилтетразол-5-ил)метокси/-3,4-дигидрокарбостирил

Пример .8. В 50 мл диметиЛформамида растворяют 1,8 г 6-/3-(1.-цйклогексилтетразол-5-ил)пропокси/ карбостирила и затем при перемешивании и внешнем охлаждении реакционного сосуда льдом добавляют 0,15 г гидрида натрия в течение 30 мин. В

игольчатых кристаллов, т.пл. 154,5155,.

Пример 44. В 30 мл диметилформамида растворяют 1,8 г 6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/3,4-дигидрокарбостирила и добавляют 0,14 г гидрида натрия. При перемешивании и внешнем охлаждении реакционной смеси льдом в течение 1 ч по каплям добавляют 0,41 мл хлористого ацетила. После завершения прибавления реакционную смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь экстрагируют хлороформом (трижды, порциями по 100 мл). Хлороформный слой промывают насыщенным /раствором хлористого натрия и сушат сульфатом натрия. После отгонки хлороформа полученный остаток очищают хроматографированием на колонке с силикагелем (злюент: этилацетат). Выходящие фракции собирают и концентрируют остаток перекристаллизовывают из смеси хлороформ-петролейный эфир.

Получают 1,1 г 1-ацетил-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)проПОКСИ/-3,4-дигидрокарбостирила в виде бесцветных игольчатых кристаллов, т.пл. 124-126,. ...Примеры 45-47. Используя способ, аналогичный примеру 44, получают следующие соединения:

57-59

ЯМР: rfCDCBj (TMS):1,2

(t, ЗН) 2,35, 3,25 (т, 6Н) 5,2 (S, 2Н) 5,65 (S, 2Н) 6,6-6,9 (т, 2Н) 7,0-7,5 (т, 6Н)

реакционную смесь по каплям и при перемешивании при комнатной температуре в течение 2 ч добавляют 0,52 мл бромистого аллила. Реакционную смесь концентрируют, остаток экстрагируют хлороформом, промывают водой и сушат сульфатом натрия. После удаления осушающего агента фильтрацией фильтрат концентрируют и остаток растворяют в хлороформе. Хлороформный раствор промывают водой и затем концентрируют. Полученный остаток очищают на колонке с силикагелем (элюент: хлороформ-метанол 50:1). фракции собирают и концентрируют, остаток перекристаллизонывают

.1

1-Бензил-6-/3-(1-циклогекйилтетраэол-5-ил)пропокси/карбостирил

1-Этил-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/-3,4-дигидрокарбостирил

П р и м е ры 52 - 54. Используя метод примера 4, подучают следующие соединения:

6-{3-/1-Хр-3,4-Диметоксифе- . Бесцветные нетил)тетразол-5-ил/пропокси кар- листочки бостйрил

,-

6-{3-/1-(р-3,4-Метилендиоксифе- Бесцветные нетил)тетразол-5-ил/пропокси) пластинки карбостирил

6- {з-/1-{р-4-Диметиламино.фенетил)тетразол-5-ил/пропокси карбостирилИнгибирование агрегации тромбоцитов крови. Ингибирование агрегации тромбоцитов соединениями, получаемыми по предлагаемому способу, изучаши с использованием агрегометра А-11. Для исследования брали пробу,пред ставляющую смесь (1:9 по объему) ЦИт рата натрия и крови кролика. Пробу Центрифугировали 10 мин со скоростью 1000 об/мин, получали плазму, обогащенную тромбоцитами (PRP), которую отделяли. Оставшуюся часть крови дополнительно центрифугировали 15 мин со скоростью 3000 об/мин и получали плазму с дефицитом тромбоцитов (РРР) Число тромбоцитов в PRP рассчитывали методом Бречера-Клонкайта, и фракцию PRP разбавляли фракцией РРР

из смеси хлороформ-петролейный

эфир.

Получают 1,2 г 1-аллил-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/ карбостирила в виде бесцветных игольчатых кристаллов, т.пл. 102г103,.

Примеры 49-51. Используя способ, аналогичный примеру 48, получают следующие, соединения: I

139-140

106,5-108,5

206-208

195-197

14Г-143 до получения образца PRP с концентрацией тромбоцитов /v3000 в 1 мл для испытания на агрегацию, индуцированную аденозиндифосфатом (АДФ). Получали так же образец, содержащий тромбоцитов в 1 мл, для .испытания на агрегацию, индуцируемую коллагеном. Указанный образец PRP в количестве 0,6 мл добавляли к 0,01 мл раствора испытуемого соединения и полученную смесь помешали в термостат с температурой 37 С на 1 мин. Затем к смеси добавляли 0,07 мл раствора АДФ или коллагена. Определяли коэффициент пропускания полученной сме:си, изменение прозрачности записывали с использованием агрегометра при скорости перемешивания 1100 об/ Для получения растворов АДФ или коллагена использовали буфер АуреиБероналя с рН 7,35. Концентрация АДФ в этих растворах составляла 7,5-10 М, а раствор коллагена готовили путем обработки 100 мг колла гена 5 мл указанного буфера, надосадочную жидкость использовали в ка честве индукторов.агрегации тромбоцитов . Аденозин и ацетилсалициловую кислоту применяли в ка естве контрольных веществ при испытании на агрегацию АДФ или коллагеном. Эффек ингибирования агрегации тромбоцитов определяли в процентах, как отношение скорости агрегации в присутст вии испытуемого соединения по отношению к скорости агрегации той же смеси в отсутствии антиагреганта. Скорость агрегации t „1 х 100, где а - прозрачность PRP, Ь - прозрачность PRP; содержаще го испытуемого соединение и индуктор агрегации; с - прозрачность РРР. I Испытывали .следующие вещества. Предлагаемые соединения: 1.6-/3-(1-Циклогексилтетраэол-5-ил)пропокси/карбостирил 2.6-/3-(1-Изопропилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил 3.6-/3- (1-Циклогексилтетразол-5-ил)ПРОПОКСИ/-З,4-дигидрЬкарбостирил4.6-/3-(1-Бензилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил5.6-/3-(1-Циклогексилметилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил 6.6-уз-(1-Циклооктилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил 7.6-/4-(1-Циклогексилтетразол-5-ил пропокси/карбостирил8.1-Метил-6-/3-{1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил 9.6-/3-{1-Фенилтетразол-5-ил)прр покси/карбостирил 10.4-Метил-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/карбостирил 11.5-/3-(l-Циклoгeкcилтeтpaзoл-5-ил)пpoпoкcи/-3, 4-дигидрокарбостирил12.1-Бензил-6-/3-(1-циклогексилгетразол-5-ил) пропокси/карбостирил 13.1-Аллил-6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил) пропокси/карбостирил 14.1-Ацетил-б-/2- (1-циклогексилтетразол-5-ил)пропокси/-3,4-дигидрокарбостирил15.6-/1-(4-Этилфенилтетразал-5-ил)метокси/-3,4-дигидрокарбостирил 16.1-(3, 4,5-Триметоксибензоил)-г -6-/3-(1-циклогексилтетразол-5-ил)ПРОПОКСИ/-3,4-дигидрокарбостирил Известные соединения: 17.йспирин (контрольное соединение)18.6-/3-(5-Метилтиотетразол-1)пропокси/-3,4-карбостирил 19.6-/3-(5-Метилтиотетразол-2)пропокси/-3,4-дигидрокарбости20.6-/3-{Тетразол-1-ил)пропок-3,4-дигидрокарбостирил 21.5-/2-ПиперидинС1ЭТОКси/-3,4гидрокарбостйрил22.5-/2-Морфолиноэтокси/-3,4гидрокарбостирил23.5-/3-Пиперидинопропокси/4-дигидрокарбостирил24.6-/2-Морфолиноэтокси/-3,4гидрркарбостирил25.7-/3-Пиперидинопропокси/дигидрокарбостирил6.8-/2-Пиперидинопропокси/-3,4идрокарбостирилтабл. 1 отражен эффект ингибиния карбостирильными производнындуцированной коллагеном агрегатромбоцитов крови кролика. Таблица

191064868

-Продолжение табл. 1

В табл. 2 отражен эффект ингибирования карбостирильными производными индуцированной АДФ агрегации тромбоцитов крови кролика.

Таблица 2

20

Продолжение табл. 2

Ингибирование активности циклической АМФ фосфодиэстеразы. Для определения ингибирующей активности 10 мл раствора полученного путем.добавления 1.-ммоль хлорида магния к 50 ммоль трис-буфера с р9 7,4, добавляли к тромбоцитам, полученным дополнительным центрифугированием, описанной выше фракции РРР при скорости 3000 об/мин в течение 10 мКн, и суспендированные тромбоциты измельчали в тефлоново-керамическом гомогенизаторе. После этого проводили двухкратное замораживание и оттаивание и измельчение с помощью ультразвука от генератора мощностью в 200 В в течение 300 с. После дополнительного 60-минутного центрифугирования под действием силы в . 100000 г верхний слой отбирали в качестве неочищенного энзимного раствора.10 мл такого буферного раствора пропускали через колонку размерами 1, см с ДЕАЕ-целлюлозой, которую

предварительно обрабатывали 50 ммоль

трис-ацетатного буфера (рН 6,0), после чего проводили промывание и элюирование 30 мл 50 ммольного трисацетатного буфера и полученный элюат подвергали линейному градиентному элюированию с помощью ацетат натрия-трисацетатного буфера в интервале концентраций 0-1 ммоль. Линейная скорость составила 0,5 мл/ми при этом отбирали по 5 мл каждой фракции. В результате такой операции получали фракцию., которая имела активность менее 2 п моль/мл/мин пр высокой (100 ммоль) концентрации циклического АМФ субстрата, а также фракцию с высокой активностью поряд ка 100 р моль/мл/мин при низкой (0,4 ммоль) концентрации циклического АМФ субстрата. Эту фракцию использовали в качестве циклической АМФ фосфодиэстеразы.

0,1 мл водного раствора каждого испытуемого соединения смешивали с 40 ммолями трис-буфера (рН 8,0 содержащего 50 мг аЛьбумина коровьей сыворотки и 4 ммоля хлористого магния) , содержащего 0,4 ммолй циклической АМФ (тритий циклическая АМФ) и 0,2 мл такого раствора использовали в качестве субстрата.

0,2 мл приготовленной выше циклической АМФ фосфодиэстеразы с установленной концентрацией добавляли ,к указанному субстратному раствору осуществляли реакцию при в течние 20 мин, в результате чего получали -тритий 5.-АМФ из тритий циклиIческой АМФ.

Затем реакционную систему погружгши в кипящую воду на 2 мин для остановки реакции, после этого реакционныйраствор охлаждали в ледяной воде с целью превращения полученной тритий в тритий-аденозин, в полученный раствор добавляли 0,05 5 -нуклеотидазы змеиного яда и проводили реакцию при в течение 10 мин. Реакционные растворы затем пропускали через катионо-обменную смолу (A650bW-4 200-400 меш выпускаемой фирмой Bio-Pad, размер колон ки 0,5-1,5 см), полученный тритийаденозин собиргши, промывали 6 мл дистиллированной волы и элюировгши .1,5 мл 3 N аммиачной воды. Весь злюент загружали в сцинтиллятор емкостью 10 мл и устанавливали количество полученного тритий-аденозин с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика, которое определяло анткфосфодиэстеразную активность.

Таким образом, определяли зна-. чение фосфодиэстеразной активации (Уд) иcпыtyeмoгo соединения для каждой концентрации, а скорость ингибирования фосфодиэстеразы .(%) определяли из указанного значения активации (Уд) и контрольного значения (У), полученного для воды, несодержащей испытуемого соединения, по следующей формуле:

Скорость ингибирования -- --«100

с фосфодизстеразы (%)

В качестве контрольных соединений применяли папаверин и 1-метил-З-изобутилксантин.

В табл. 3 представлена скорость ингибирования фосфодиэстеразы (%). Т а б л и ц а 3

Стимуляция кровёснабжения мозговых полушарий.

Эффект стимуляции тока кррви через мозг измеряли по описанной методике. Собаку (самец весом-12-26 кг) фиксировали в лежачем положении и анестезировали пентобарбиталом натри (20 мл/кг), форсированное дыхание поддерживали на частоте равной 20 раз/мин. Затем обнажали череп и удёшяли поверхностную кость до появления венозного синуса и делали вывод венозной крови через канюлю. Количество венозной крови измеряли с использованием электромагнитного измерителя потока крови и дальнейшее измерение проводили с помощью счетчика капель путем измерения числа капель крови в 10 с.

Эффект увеличения потока крови через мозг рассчитывали путем сравнения числа капель крови за 30 с при максимальном увеличении, которое имело место до и после применения испытуемого соединения. Каждое из испытуемых сочинений растворяли в дим&тилформеидиде, разбавляли физио логическим раствором и вводили чер канюлю в основиой бедренной вене. В качестве контрольного соедин ния применяли папаверин. Полученные результаты представл ны в табл. 4. , . . . IТ а б л и ц а ПапаревинГипотензивное действие. Гипоте зивное действие соединений опреде ли путем определения максимальног давления крови у испытуемых живот согласно описанной методике. Для экспериментов использовали животных двух типов. Для первого па самцов крыс линии Gold Blatt весом 160-180 г анестезировали эфиром, и левую почечную артерию перекрывали серебряным зажимом,имеющим внутренний диаметр 0,2 мм, тогда как правую почечную артерию оставляли без всяких изменений. Через четыре недели после операции отбирали крыс, имеющих максимальное кровяное давление выше 150 мм рт.столба, и их использовали в качестве испытуемых животных,, этих животных не кормили в течениеночи. Вторую группу животных составляли крысы с увеличенным давлением крови, вызванным введением дезоксикортикостеронацетата (ДОСА) в физиологическом растворе (ДНР). Для этого самцов крыс линии Wistar весом 150-170 г анестезировали эфиром и ВЕ лущивали левую почку. Через неделю после операции подкожно вводили однократно 10 мг/кг ДОСА и в качестве питья давали 1%-ный водный раствор хлористого натрия. Через пять недель после операции отбирали крыс, имёкнцих максимальное давление крови выше 150 мм рт.столба, и их использбвёши в качестве испытуемых животных, оставляя н:: ночьбез еды. I Все испытуемые соединения применяли орально, кровяное давление измеряли перед применением и через 1,2,4,6 и 8 ч после применения. Давление крови измеряли с использованием Рекордера (Rectihoriz-type 85, San-ei Inst) и электростигманометра РЕ-300 (Macro Bio-sy5tems, Houston,Тех).. Полученные результаты представле- ны в табл.5. бпределение острой токсичности. Предлагаемые соединения применяли . орально на мышах и определяли LD мг/кг соединений, получаемых по предлагаемому способу. , Полученные результаты представле- 5 . ны. в табл. 6 . Таблица 6 LDjp мг/кг Продолжение табл. 6 Dyo мг/кг