Изобретение относится к новому производному 1,2,4-триазино [6,5-b] индола, повышающему физическую выносливость, который может найти применение в качестве лечебного средства.
Известно использование для повышения физической выносливости стимулятора центральной нервной системы фенамина [1]
Известен гидрохлорид 3-(2-пиперидиноэтилтио)-1,2,4-триазино [5,6-b] индола, обладающий противовоспалительной активностью [2]
Известен гидрохлорид 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино [5,6-b] индола, повышающий устойчивость организма к гипоксии [3]
Известен гидрохлорид 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино [6,5-b] индола, обладающий противовоспалительной активностью и повышающий физическую выносливость и устойчивость организма к гипоксии [4]
Недостатком этого известного соединения является его низкая активность в качестве стимулятора физической выносливости в отставленные сроки через 48 и 72 час.
Цель изобретения новое производное 1,2,4-триазино [6,5-b] индола, обладающее более высокой активностью, в качестве стимулятора физической выносливости.
Поставленная цель достигается гидрохлоридом 3-(2-диметиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино [6,5-b] индола
повышающим физическую выносливость.
Способ получения соединения по изобретению основан на реакции алкилирования 2,3-дигидро-1,2,4-триазино [6,5-b] индолтиона-3 алкилгалогенидом [4] и включает взаимодействие 2,3-дигидро-9-метил-1,2,4-триазино [6,5-b] индолтиона-3 с гидрохлоридом 2-диметиламиноэтилхлорида в присутствии избытка щелочи; полученное основание действием хлористого водорода переводят в его гидрохлорид.
Пример. Смешивают растворы 5,06 г (23,4 ммоль) 2,3-дигидро-9-метил-1,2,4-триазино [6,5-b] индолтиона-3 в 700 мл 1 н. раствора едкого натра и 4,6 г (31,9 ммоль) гидрохлорида 2-диметиламиноэтилхлорида в 15 мл воды и нагревают на водяной бане при 45o С в течение 1 ч. Продукт реакции выделяется в виде желтых кристаллов или в виде коричневого масла. В случае образования масла его отделяют в делительной воронке, переносят в стакан и размешивают с 20 мл воды. При этом продукт реакции кристаллизуется. Полученную суспензию соединяют с реакционным раствором и выдерживают при 5oС в течение 2 ч. Фильтруют, осадок промывают ледяной водой (3х20 мл) сушат в вакууме над щелочью. Получают свободное основание 3-(2-диметиламино-этилтио)-9-метил-1,2,4-триазино [6,5-b] индола в виде желтых кристаллов; вес 3,5 г (52,1 от теор.); т. пл. 85oС. Вещество однородно по данным ТСХ. Условия ТСХ: адсорбент-окись алюминия; растворитель для нанесения ацетон; подвижный растворитель бензол-спирт (7,5:1); Rf 0,68.
2,8 г основания растворяют в 120 мл ацетона, фильтруют и насыщают фильтрат безводным хлористым водородом. Выпавший розовато-желтый осадок гидрохлорида отфильтровывают, промывают ацетоном (2х7,5 мл) и сушат в вакууме над хлористым кальцием. Выход гидрохлорида почти количественный. После перекристаллизации из спирта (9,43 мл/г) блестящие желтые призмы; т. пл. 249oС. Выход при перекристаллизации 89
Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии. Для его очистки достаточна двухкратная перекристаллизация.
Условия тонкослойной хроматографии. Адсорбент силуфол; растворитель для нанесения метиловый спирт; подвижный растворитель метиловый спирт 3 н. водный аммиак (10:1); Rf 0,33.
Вещество как в видимом, так и в УФ-свете не содеpжит примесей, в том числе исходных веществ.
Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования щелочью в водном растворе, а также УФ-спектром.
Найдено, С 51,58; Н 5,74; Сl 10,82; N 21,21, S 10,05. С14H18ClN5S. Вычислено, C 51,92; H 5,60; Cl 10,95; N 21,62; S 9,90.
УФ-спектр в воде, λмакс, нм (lg E): 270 (4.552), 336 (3.929), 428 (3.163).
Спектр снят на приборе СФ-20. Он сходен со спектром 3-метилтио-1,2,4-триазино [6,5-b] индола, положение полос поглощения характерно для производных 1,2,4-триазино [6,5-b] индола с ароматическим строением триазинового ядра.
1. Первичный скрининг проводился на мышах с целью определения влияния вещества на физическую выносливость животных.
Регистрировалась продолжительность плавания мышей в контроле (физиологический раствор) и в опыте (на фоне соединения по изобретению, введенного внутрибрюшинно за час до плавания в дозах 20, 60, 90 мг/кг). Животные плавали с грузом, равным 5% массы тела, температура воды в ванне поддерживалась в пределах 25-26oС.
Предварительное введение этого соединения вызывает умеренное повышение длительности плавания мышей. Так, длительность плавания мышей в по отношению к контролю была при дозах:
20 мг/кг 86 (P ≅ 0,05)
60 мг/кг 60 (Р ≅ 0,05)
90 мг/кг 85 (Р ≅ 0,05)
Предварительные опыты на мышах показали, что препарат вызывает умеренный прирост длительности плавания.
2. Определяли влияние препарата на физическую выносливость крыс при предварительном введении.
Вещество вводилось внутрибрюшинно в дозе 20 мг/кг однократно. Крысы выполняли бег на третбане до отказа, т.е. до отказа выполнять бег, несмотря на электростимуляцию. В течение трех суток животные отдыхали, затем им вводился препарат и они вновь совершали бег на третбане через разные промежутки времени 1,2,24 час после введения препарата. Одновременно регистрировалось время пробега контрольных крыс, которым вводился физиологический раствор. Сравнивалась продолжительность бега до и на фоне введения препарата, а также продолжительность времени пробега контрольных крыс.
Обнаружено, что продолжительность пробега опытных крыс составляет по отношению ко времени первого пробега, принятого за 100 через
1 ч 20 (P ≅ 0,4);
2 ч 60-70 (P ≅ 0,1);
24 ч 50 (P ≅ 0,1).
Эффект изучаемого соединения сравнивался с фенамином.
Оптимальная доза фенамина 4 мг/кг веса при внутрибрюшинном введении за 1-2 ч до выполнения истощающей нагрузки увеличивает время пробега до 200-300
У контрольных животных время пробега после введения физиологического раствора составляло по отношению к первому пробегу (100) через исследованные промежутки времени 90-100
3. Определяли влияние соединения по изобретению на процессы восстановления после истощающих нагрузок.
Крысы совершали бег на третбане до отказа, после чего им вводилось соединение внутрибрюшинно в дозе 20 мг/кг. Другой группе вводился физиологический раствор. Обе группы животных совершали повторно бег до отказа через 1, 2, 24, 48, 72 ч.
В контрольной группе восстановление физической выносливости через 1-2 ч составляло 50 через 24 ч 100
На фоне введения соединения восстановление "работоспособности" следующее:
через 1 ч 80 (P ≅ 0,05)
через 2 ч 70 (P ≅ 0,05)
через 24 ч до 200 (P ≅ 0,001)
через 48 ч 200 (P ≅ 0,05)
через 72 ч 160 (P ≅ 0,05)
При введении фенамина (4 мг/кг) длительность повторного пробега через 1-2 час составляла 30-35 исходной, полное восстановление без явлений суперкомпенсации отмечено лишь через 48 ч.
При введении известного структурного аналога гидрохлорида 3-(2-диметиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино [6,5-b] индола в той же самой дозе, что и соединения по изобретению (20 мг/кг), прироста работоспособности в периоде восстановления через 48-72 ч не было.
Острая токсичность определялась на мышах. Вещество вводилось внутрибрюшинно в виде 1 водного раствора. ЛД50 составляет 150 мг/кг.
Проведенные исследования показывают, что соединение по изобретению обладает умеренным стимулирующим действием на физическую "работоспособность" животных при предварительном введении и четким стимулирующим действием в периоде восстановления "работоспособности" после истощающих нагрузок, особенно отставленные сроки через 48 и 72 ч.
Гидрохлорид-3-(2-диметиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино[6,5-в] индола
повышающий физическую выносливость.
Гидрохлорид-3-(2-диметиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино(6,5-b) индола
повышающий физическую выносливость.
