Способ дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу ящура Советский патент 1984 года по МПК A61K39/12 G01N33/54 

Од

со

00 Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при ускоренной серодиагностике ящура. Специфические противоящурные антитела в сыворотке крови животных выявляют с помощью реакций угнетения связывания комплемента, нейтрализации и серозащиты. В последнее время для этой же цели используют тест ингибиции бляшек, реакции радиальной иммунодиффузии, диффузионной преципитации и др 1. Однако указанные способы не позволяют дифференцировать антитела, появивщиеся в сыворотке в результате инфекции, от антител, индуцированных инактивированной вакциной против ящура. Известен способ дифференциации постинфекционных и поствакциналкных антител к вирусу ящура, включающий постановку реакции диффузионной преципитации испытуемой сыворотки с via-антигеном. По обнаружению антител к via-антигену дифференцируют постинфекционные антитела от поствакцинальных 2. Однако известный способ является недостаточно точным,- поскольку антитела к viaантигену могут появляться в сыворотках крови не только при переболевании животных ящуром. Но и при вакцинации и даже при отсутствии контакта их с вирусом 3. Цель изобретения - повышение достоверности способа дифференциации антител к вирусу ящура, индуцированных инфекцией, от антител, связанных с вакцинацией. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциации постинфекционных и поствакцина чьных антител к вирусу ящура, включающему постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой, в качестве серологической реакции используют непрямую реакцию им.мунофлюоресценции,,испытуемую сыворотку берут в разведениях 1:16-2048, причем постийфекционные антитела определяют по наличию специфического свечения, а поствакцинальные - по его отсутствию. Пример. Для приготовления препаратов (антигенов) для непрямой реакции иммунофлюоресценции используют однослойную культуру клеток, выращенную в матрицах РУ или «Клинских, Ее инфицируют вирусом ящура (любой штамм) так, чтобы 10-30% клеток монослоя было поражено через 8- 18 ч. Затем клетки диспергируют 0,25%-ным раствором трипсина или 0,02°/о-ным раствором версена при 37°С и готовят суспензию с концентрацией 1-5x10 клеток/мл на растворе Хенкса (без индикатора). По 3-4 капли этой суспензии наносят на предметное стекло и высушивают путем выпаривания жидкости при 37°С. Затем клетки фи ксируют аце тоном при 4°С в течение 20-30.мни и. полученные препараты хранят до использоваг НИИ в сухой банке при 4°С. Каждую партию препаратов проверяют с по.мощью реакции иммунофлюоресценции на наличие в них достаточного количества (т.е. 10-30%) антигеносодержащих клеток, а также на степень яркости специфического свечения. Постинфекционные антитела- в сыворотках обнаруживают в период с 5-7 дня болезни до 6 мес после переболевания животных ящуро.м. Перед исследованием сыворотки инактивируют при 56°С в течение 30 мин и разводят физиологическим раствором с рН 7,2-7,4 в соотношении 1:16,1:32-2048. Постановка реакции заключается в нанесении на нрепараты (антигены) на 1-м ее этапе последовательных разведений исследуемой сыворотки в количестве 0,05-0,1 мл на препарат. После 30 .мин инкубации при 37°С и двукратного промывания в течение 20 мин в охлажденном до 4°С буферном физиологическом растворе на эти же препараты (на 2-м этапе реакции) наносят аналогичный объем смеси рабочих разведений гомологической антивидовой люминесцирующей сыворотки и бычьего альбумина, меченого родамином. После 30 мин инкубации при 37°С и трехкратного в течение 30 мин про.мывания в буферном физиологическом растворе, охлажденном до 4°С, препараты высушивают на воздухе и просматривают под микросокопом любой марки при объективе х40 и окуляре х4 или х5. Микроскопически о наличии постинфекционных антител в испытуемой сыворотке судят по ее активности в реакции иммунофлюоресценции, т.е. при наличии в этой сыворотке постинфекционных антител они вступают в соединение с известным антигеном, содержащимся в инфицированной культуре клеток, а образуюпхийся комплекс «антиген-антитело выявляется антивидовой люминесцирующей сывороткой, придающей антигеносодержащим клетка.м зеленое свечение, являющееся специфическим. По отсутствии специфического свечения определяют поствакцинальные антитела. В результате проведенной апробации способа установлено, что сыворотки животных, болеющих ящуром в острой стадии, айтивны в реакции иммунофлюоресценции в разведениях 1:16-64, сыворотки животных-реконвалесцентов активны в разведениях 1:16- 2048 и более, сыворотки же животных, привитых одно- и двукратно ипактивированной МОНО-, би- и трехвалентной вакциной, в этой реакции оказались неактивными, т.е. они не давали специфической люминесценции с известным антигено.м, что свидетельствует об отсутствии в них постинфекционных антител. Предлагаемый способ дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу ящура позволяет с высокой 34

степенью достоверности выявлять болеющих технологичностью, быстротой получения дии переболевших ящуром животных среди агностического результата и высокой провакцийированной популяции, отличается изводительностью.

1069817

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПОСТИНФЕКЦИОННЫХ И. ПОСТВАКЦИ НАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЯЩУРА включающий постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности способа, в качестве серологической реакции используют непрямую реакцию иммунофлюоресценции, испытуемую сыворотку берут в р.азведениях 1:16-2048, причемпостинфекционные антитела определяют по наличию специфического свечения, a поствакциональные - по его отсутствию.