Способ получения бактериальных амилаз Советский патент 1984 года по МПК C12N9/28 C12N1/20 

vj

4;: со о to

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к технологии получения бактериального ферментного препарата амилосубтилина.

Известны микробиологические способы получения амилолитических ферментов , которые осуществляются путем глубинного культивирования продуцентов на различных питательных средах, содержащих источники углерода, азота, фосфора, магния, натрия ,кальция,микроэлементы и источни необходимых рОстовых факторов fl. Наиболее близким по технической сущности является способ получения бактериальных амилаз, предусматривающий глубинное культивирование бактерий Bacillus subtilis SK-52 в жидкой питательной среде, содержщей кремле источников углерода, азота, необходимых факторов роста, минеральных солей и воды неорганический восстановитель в количестве 0,001-0,05% С21.

К недостаткам этого способа относится Мсшый выход фермента при высокой концентрации крахмала в среде

Целью изобретения является увеличение концентрации фермента в среде.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения бактериальных амилаз путем глубинного культивирования бактерий Bacillus subtilis SK-52 в жидкой питательной среде, содержащей кроме источников углерода азота, необходимых факторов роста, минеральных солей и воды неорганический восстановитель в количестве 0,001-0,05%, в ферментационную среду после 34-44 ч культивирования вносят неорганические окислители - ферроцианид калия или перманганат калия в количестве 0,0005-0,001 мас.%. Способ осуществляют следующим образом.

В качестве продуцента оС-амилаз используют промьпиленный продуцент Bacillus subtilis SK-52. Культивирование продуцента проводят в условиях аэрации на производственной питательной среде, с добавлением восстановителя в начале ферментации. Через 34-44 ч культивирования в ферментационную среду дополнительно вносят окислитель, например KjFe(CN) в количестве 0,001 мас.%. Выращивание проводят в колбах на качалке при 32°С в течение 56 ч.

Добавление окислителей повышает окислительно-восстановительный потенциал на 23-28 мВ.

Пример. Односуточную культуру Bacillus subtilis SK-52,

5 выращенную на картофельных столбиках, пересевают жидкую ферментационную среду указанного состава, внося с посевным материалом 0,005% восстановителя K4Fe(CN), понижаю0 щего f-h среды на 20 мВ, и через 34 ч ферментации в ферментационную среду вносят дополнительно 0,001% окислителя KgFeCCN) повышающего Eh среды на 23 мВ.

5 Через 56 ч выход амилаз в условиях регулируемого h среды, т.е. сначала понижаемого восстановителем, а через 34 ч повышаемого окислителем, превышает выход амилаз в контQ рольных условиях, т.е. без регулирования ti на 48% (710 и 480 ед/мл соответственно).

Пример 2. При выращивании Bacillus subtilis SK-52 в условиях

г примера 1, но отличающихся тем, что 0,001% окислителя KjFe(CN) добавляют через 44 ч ферментации. Через 56 ч выход амилаз в условиях опыта увеличивается на 60% по.сравнению с выходом фермента в контроле (768 и 480 ед/мл соответственно).

Пример 3. При выращивании Bacillus subtilis SK-52 в условиях примера 1, но отличающихся тем, что 0,0005% окислителя КМп04 добавляют через 40 ч ферментации. Через 56 ч выход амилаз в условиях опыта увеличивается на 51% по сравнению с выходом фермента в контроле (725 и 480 ед/мл соответственно).

Контроль

Опыт: 0,005% (СЫ)ь + -f 0,001% КзРе(СЫ)

0,005% K4Fe(CN)6 + + 0,001% K3Fe(CN)

Опыт: 0,005% K4Fe(CN)j . + 0,0005% ШпО.

. ... . -

148

160

151

310749024

Согласно предлагаемому способув ферментационной среде повышается

увеличивается ваход амилаз на 48- еь среды на 23-28 мВ, что позволяет

60%, который достигается добавлени-продуцентам лучше использовать субем неорганических окислителейстрат (крахмал). (KjFeCCN), КМпШ . Благодаря