Штамм @ @ -65-продуцент @ -амилазы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/28 C12N15/00 C12R1/125 

О 90. СО

ас Изобретение относится к производству ферментов и представляет собой новый штамм BaciJJus subtij 65, используемый для биосинтеза ОС-амилазы. Как продуценты oi, -амилазы изве ны многие микроорганизмы. Фермент амилолитического комплекса, проду цируемые бактериями рода Bacillus имеют промышленную ценность. Так известен штамм BaciUus su tilis SK 52 - продуцент об -амила Активность продуцента в производс венных условиях составляет в сред нем 190 ед/мл АС, в колбах 26 ед/мл АС 1. Наиболее близким к предлагаемому является штамм и продуцент oL-амилазы Bacillus subtilis RA - обладаюпшй активностью в ферментер 401,2 ед-мл АС 2 . Недостатками штаммов BaciJIus subtilis SK-52 и Bacilfus subtiE RA является колониально-морфологическая изменчивость. Оба штамма вьпдепляют колониально-морфологичес кий вариант М, который вообще не синтезирует об -амилазу. Особенно высокой морфологической изменчивостью отличается штамм Bacillus subtifis RA в результате которой штаммов наблюдается снижение амило литической активности и вырождение штаммов, кроме того-колебание амилолитической активности отдельных особей в популяции. Коэффициен изменчивости штамма BaciJJus subtifis SK-52 составляет 38,5%, штамма BacilZus subtiZis НА 41,0%, тогда как штамма Bacillus subtilis-65 коэффициент изменчивости составляет 16%, что говорит о генетической стабильности штамма. Цель изобретения - получение штамма, обладающего высокой активностью в условиях глубинного культивирования. Культура BaciEIus subtilis-65 получена из штамма Вас. subtiJis SK-52 в результате ступенчатой селекции при действии 250 мкг/мл, N-мeтил-N-нитpo-N-нитpoзoгyaнидинa в фосфатном буфере рН 5,0. Штамм Bacillus subtiHs-65 хранится во Всесоюзной коллекции института ВНИИГенетика под номером ЦМ ПМ В-2387 и характеризуется 82 следующими морфологическими, культуральными и физиологическим приз-, наками. Морфологические признаки. Культура Bacilfus subtifis-65 является палочкой размером (1,7-3,0)х (4,0 0,6) мк, выращенная на богатой среде, имеет вид толстых, больших палочек, иногда расположенных в цепочках. Палочки подвижные с помощью перетрихиальньк жгутиков, граммположительные . Культура образует Цилиндрические или эллипсоидные споры, размером (1,0-1,5)х(0,6-0,9)мк. Культурально-физиологические. признаки. На мясо-пептонном агаре после 24 ч инкубации в термостате при 37 С культура образует плоски, сухие колонии плотной консистенции с характерно белым зернистым налетом, легко снимающиеся петлей с агара. Диаметр - 2-5 мм. Края почти ровные или слегка изрезаны. Других типов колоний не отмечено. На ломтике картофеля рост обильый в виде серовато-белой сухой толтой морш 1нистой пленки. На поерхности мясо-пептонного бульона ультура 65 образует тонкую пленку елтовато-белого цвета, бульон осается прозрачным. Штамм BacifJus subtiZis 65 строий аэроб с оптимальной темпераурой роста 37°С при рН 6,2-7,0. ультура усваивает глюкозу, сахаозу, фруктозу, арабинозу гидроизует крахмал, пентонизирует олоко, разжимает желатину, нитраты осстанавливает до нитритов, на реде .Кларка образует ацетилметиларбонил. Пример. Для выращивания штама В. subti Cis 65 продуцента об-амиазы используют производственную реДу средующего состава, г/л: Крахмал картофельный239Кукурузный экстракт12,43 Дрожжи пивные2,19 Лактоза2,87 Медь сернокислая0,0036 Аммоний фосфорнокислыйдвухзамещенный8,4 Натрий хлористый0,28 Магний сернокислый0,14 3 Калий сернокислый2,87 Кальций хлористый0,45 Стерильно приготовленная и засе нал штаммом Вас, -lus subtifis 65 инкубируется в термостате при 37 С на качалке при 180 об/мин, а также в полупроизводственных условиях в ферментерах емкостью 3 м Через 48 ч роста в культурально жидкости определяют амилазную акти ность по методу БЕР. Контрольными штаммами служат производственный 8ч штамм BaciFfus subtifis SK-52 и ВаcilJus subtifis RA. Результаты испытаний приведены в таблице. Как видно из таблицы Вас. subtilis 65 отличается амнполитической активностью. Амштолитическая активность в полупроизводственных условиях по сравнению со штаммом Вас. subtifiis SK-52 увеличивается на 18,3 и на 15% по сравнению с Bacillus subtiEis RA. Ожидаемый годовой эффект от внедрения Bacillus subtilis 65 составляет приблизительно ,30 руб.

ШТАММ BACILLUS SUBTILIS 65 (коллекция Центрального Музея промышпенньк микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-238 7) - ПРОДУЦЕНТ об-АМИЛАЗЫ.

Bacillus subtilis SK-52

В колбах Bacillus subtilis RA BacilJus subtifis 65

Bacillus subtilis SK-52

В ферментёре Bacillus subtiiis RA Bacillus subtilis 65

10

348,0 375,5 553,5

3033,2

10

3700

5562,5