Штамм @ @ 36,используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов Советский патент 1984 года по МПК C02F3/34 B09C1/10 C12N1/20 C02F3/34 C02F101/32 C12N1/20 C12R1/40 

Изобретение относится к микробиоогической промышленности и касается танцла, используемого при биологической обработке воды от нефтепроуктов и почвы от остаточной замазуенности.

Известен штамм pseudomonas aeru- ginosa РАО, содержащий плазмидаз САМ/ ОСТ, NAH, SAL, контролирующие утилизацию углеводородов, используемый, ля микробиологической деградации нефти и нефтепродуктов l ;

Недостатком мультиплазмидного тамма Pseudomonas aeruginosa РАО является низкая скорость утилиаации неочищенной нефти.

Известен также штамм Pseudomonas aeruginosa 121, способный утилизировать октан 2 .

Недостатками данного штамма являются невысокая скорость утилизации и узкий спектр избирательного действия.

Наиболее близким по достигаемому результату к предлагаемому является тамм Pseudomonas aeruginosa 123, несущий ОСТ, САМ NAH плазмиды, используемый при биологической очистке воды от нефти и нефтепродуктов

ИНедостатком Известного штамма является узкий спектр избирательного действия; он осуществляет резорбцию только нефтяной пленкии., не способен осуществлять утилизацию остаточной замазученности почвы. Цель изобретения -. получение штамма, способного осуществлять деградацию нефти, остаточной замазуенности, который может быть использован при очистке воды и почвы от загрязнений нефтепродуктами.

Полученный штамм Pseudbmonas putida 36 выделен из отработанного бурового раствора на органической, основе (нефть), хранящегося в шламовсм амбаре открытого ткпа .(скважина 13100, куст 1030, Белозерское нефтяное месторождение Тюменской области, 13 октября 1980 г) и депонирован во ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2443.

Полученный штамм Pseudomonas pu- tida 36 (коллекция музея лаборатории микробиологии ЗапсибНИГНИ Мингео РСФСР) имеет следукяцую характеристику.

Морфологические и культуральные признаки. Величина клеток односуточной культуры 1,7-2,4x0,3-0,5 мкм. Преобладающая форма клеток - прямые, палочковидные. Грамотрицательные. . На мясопептонном агаре образуются колонии выпуклые, круглые, бесцветные. Рйзмер 3-7 мм.

Мясопептонный бульон - образуется муть с выделением газа. Картофель обильный рост, штрих выпуклый, сплошной, с образованием слизи. Желатину не разжижает. Молоко свертывает, подкисляет.

Физиологические признаки. Азроб. 5 Растет при 28-42®С, при 4°С не растет.

Отношение -к углеводам. Использует лактозу, глюкозу и мальтозу с выделением газа. Не усваивает арабинозу. 0 Отношение к углеводородам. Использует нафталин, камфору, октан, гекcaiH, бензол, толуол, ксилол, парафин, асфальтены. Парафинистые нефти ассимилируются активнее,чем ароматичес5 кие.

Отношение к источникам питания. Ассимилирует нитратный азот.

На чертеже приведен график, отображающий кривые прироста биомассы Q штаммов Р. putida 36 и Р. aeruginosa 123 на неочищенной нефти.

Пример. Штамм Pseudomonas putida 36 выращивают на минеральной среде следующего состава, г: 5 KjHPO,,10,0

КН РОц1,0

2,0

NH xNO, «2

1000,0

мл колбу вносят 50 мл мине- ральной среды, 2,5 мл источника углеводородного питания (неочищенная нефть) и 1,5-10 клеток. Культивирование производят на качалке при . Ежесуточно берут пробы, количество жизнеспособных клеток 5 определяют высевом разведений на среду MI1A. Подсчет колоний производят через 24 ч. Окислительную активность штамма определяют по количеству выделяемого углекислого газа. 0 На графике кривые окислительной активности штаммов Pseudomonas pu- tida 36 и Pseudcanonas aeruginosa 123 на неочищенной нефти демонстрируют различную .способность этих штам5 мов деградировать неочищенную нефть.

Кривая а показывает изменение плотности клеток.(количества бактеg риальных клеток в 1 мл среды штамма) штамма Pseudomonas aeruginosa 123 во времени при концентрации нефти до 5% в среде.

Кривая 5 показывает прирост биомассы штамма Р.putida Зб.Максималь-ную плотность (1,510 кл./мл) штамм Р, putida 36 достигает на 56 сут, а штамм Р„ aeruginosa 123 максимальную плотность 1,5 аокл./мл достигает на 2-4 сут.

Окислительная активность предлагаемого и известного штамМов на нефти представлена в таблице.

264,0 240,5 74,5 68,4

145,2 187,0 33,7 37,1

Как видно из таблицы, при практически равной скорости роста окислительная активность штамма P.putida 36 на неочищенной нефти значительно превосходит окислительную способность штамма Р. aeruginosa 123, Так, штамм Р. putida 36 выделяет

при окислении парафинистой и ароматической нефтей соответственно 264, и 240,5 COg мг на 100 г почвы, а штамм Р. aeruginoJsa 123-145,2 и 187,0 мг COgсоответственно.

Данные таблицы показывают, что за 30 сут количество нефти, утилизированной штаммом р. putida 36,

.достигает 68,4-74.5% от исходной, а штаммом Р. aeruginosa 123 33,737,1%.

Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма Р. putida 36 является способность расти даже на обедненной среде (можно использовать плacтoвsfю воду с минерализацией не выше 10%), способность утилизировать парафин, нафталин, октан гексан, бензол, толуол, ксилол, а:сфальтены, а также способность деградировать нефть и нефтепродукты с высокой скоростью при содержании нефти до 10% к объему загрязненного

субстрата (почвы, воды), что позволяет использовать его при биологической очистке воды от нефти и почв от остаточной замазученности.

Штамм Pseudomonas putida 36. (депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2443), используемый для очистки воды и почвы от -нефти и нефтепродуктов . (Л / S1 Од 4 4 да f 8 Время,ffH