Устройство для проведения микроопераций на клетках и способ проведения микроопераций на клетках Советский патент 1985 года по МПК A61N1/04 

2. Способ проведения микроопераций НЭ клетках, . включающий закрепление пипетки микроприсоской, прокаливание мембраны микроинструментом/ отличающийся тем, что, с целью повышения точности и эффективности проведения микро-i операций, полость микроприсоски предварительно запЬлняют изотоническим раствором, а прокальгаание мембраны микроинструментом осуществляют в зоне ограниченной кромками микроприсоски.

1. Устройство для проденения микроопераций на клетка х, включающие основание, микроинст умент для прокалывания, механизм пе{ емёщения микроинструмента в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и микроприсоску с имеющим штуцер держателем, отличающееся тем, что, с целью повышения точности и эффективности проведения микроопераций, микроинструмент размещен соосно в полости микроприсоски, держатель микроприсоски выполнен в виде трои- ника с герметизированными отверстия- в ми на его противоположных торцах, в СП которых расположен микроинструмент,, причем устройство снабжено дополнительные механизмом продольного перемещения микроинструмента. « о ж эо

Изобретение относится к области биологии, в частности к способам проведения микроопераций на клетках для пересадки клеточных органел и может быть использовано в области микробиологии и цитологии.

Известно устройство для микроопераций с помощью микроприсоски и микроинструмента l , 2 .

Известно устройство для проведения микроопераций на клетках, вклю|Ча ощее основание, микpoинcтpsп fleнт для прокалывания, механизм перемещения микроинструмента в трех взаимноперпендикулярных плоскостях и микроприсоску с имеющим штуцердержателем з .

Указанный микроманипулятор не позволяет осуществлять внутриклеточные операции по указанному способу, что снижает производительность труда при операциях и делает более сложной микрооперацию и замедляет процесс мйкроманипулирования.

Известен способ проведениямикроопераций на клетках, заключающийся в закреплении клетки с помощью микроприсоски и раздельного введения внутрь клетки микроинструмента

. -И-Сз.

Указанный способ обладает существенными недостатками, а именно при такого рода .микрооперациях невозможно избежать значительны : деформаций клетки и ее повреждения, связанного с большими разрывами мембраны и потерями цитоплазмы, требует установки дополнительных микроманипуляторов .

Целью изобретения является повышние точности и эффективности проведения микроопераций.

Для достижения цели в устройстве для проведения микроопераций на клеках, включаквдем основание, микроинструмент для прокалывания, механизм перемЬщения микооинструмента в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и мйкрс Ьрисосюу с имеющим штуцер держателем, микроинструмент размеще соосно э плоскости микроприсоски, держатель микроприсоски выполнен в виде тройника с герметизированными

oтвepcтия ли на его противоположных торцах, в которых расположен микроинструмент, причем устройство снабжено допблнительным механизмом продольного перемещения микроинструмента.

Для достижения цели в способе проведения микроопераций на клетках, включающем закрепление пипетки микроприсоской, прокалывание мембраны микроинструментом, полость микроприсоски предварительно заполняют изотоническим раствором, а прокалывание мембраны микроинструментом осуществляют в зоне, ограниченной кромками микроприсоски.

На фиг.1-изображен механизм перемещений; на фиг.2 - общий вид устройства; на фиг.3 изображены А момент втягивания ядра, Б - началы ное и конечное положение микроинструментов при пересадке.

Устройство состоит из двух микропипеток, одна из которых, наружная, является микроприсоской 1, вторая, внутренняя, микроинструментом 2 для инъекции. Микроприсоска 1 закреплен с помощью гайки 3 и уплотнителя 4 в полом корпусе держателя 5 со штуцером б, а микроинструмент 2 с помощью уплотнителя 7 и гайки 8 герметизируется с противоположной сторон корпуса держателя 5. Корпус держателя 5 ввернут в кронштейн 9, внутри которого расположен держатель для закрепления микроинструмента 2, состоящий из гайки 10, уплотнителя 11, штуцера 12 и корпуса 13 держателя со штуцером 14. Кронштейн 9 установлен неподвижно на втулке 15 переднего фланца 16. Внутри втулки 15 помещается толкатель 17, соединеный с гибкой гофрированной мембраной 18, а корпус 13 держателя закреплен неподвижно с толкателем 17. Задний фланец 19 со- штуцером 20 и втулкой 21 соединен с передним фланцем 16, а мембрана 18 и фланец 19 соединены между собой герметично и образуют мембранную коробку, которая закреплена втулкой 21 на микроманипуляторе 22.

Устройство работает следующим образом.

С помощью микроинструмента 22, обеспечивающего перемещение микроинструмента 2 и микроприсоски 1, устанавливают в поле зрения микроскопа около кдетки.

Далее, подавая разрежение от отдельного микроинъектора через штуцер б в полость корпуса держателя. 5 с помощью микроприсоски I прикрепляют клетку. Затем подают давление через штуцер 20 в полость мембранной коробки. При этом мембрдна 18 деформируется и перемещает толкатель li во втулке 15, корпус 13 держателя и с ним микроинструмент 2 для инъекций, который проходит через наружную мембрану клетки в участке/ ограниченном диаметром . кончика микроприсоски 1. Микроинъекция и микровсасывание через микроинструмент осуществляется при подаче давления или разрежения внутри держателя 13 по двум каналам с помощью штуцеров 12 и 14 (фиг,2). Подача раствора, снижакяцэго повреждакщий эффект нарушения целостности наружной мембраны клетки, осуществляют при помощи микроинъектора через штуцер б.

Данное устройство позволяет ускорить процесс микроманипуляционных работ, обеспечивает высокую сохранность биологического объекта и исключает применение 2 или 3 дополнительных микроманипуляторов. Все это и определяет положительный эффект от применения данного изобретения.

Пример.:

Клетка с ядром удерживается микроприсоской 1, в которой расположен микроинструмент 2 с двумя каналами и пересаживаемым ядром другой клетки.

Микроприсоска 1 удерживается в держателе 5 с уплотнением 4 для микроприсоски и уплотнителем 7 для микроинструмента 2.

Держатель имеет штуцер 6 для подключения микроинъектора, которым создается разрежение в полости микроприсоски 1 для удержания клетки. Микроинструмент 2 удерживается держателем 13 со штуцерами 12, 14 для подключения микроинъекторов, которыми осуществляется пересадка ядер и подача в зону повреждения необходимых растворов.

0

Держатели 5 и 13 установлены в кронштейне 9 механизма продольного перемещения микроманипулятора 22. Пересадка осуществляется следующим образом.

5

Мйкроприсоска 1 с введенным в нее микроинструментом 2 и ядром подводится под микроскоп к клетке с ядром с пом :эдью микроманипулятора

0 22. Микроинъектором через штуцер 6 создаются и поддерживаются для удержания клетки разрежения внутри полости микроприсоски 1. Затем.вводится микроинструмент 2 с помощью

5 механизма продольного перемещения микроманипулятора 22 (фиг.ЗА). Ядро клетки всасывается в полость микроинструмента 2 разрежением, создаваемым Микроинъектором через; шту0цер 12 корпуса 13 держателя, а пересаживаемое ядро выталкивается из второго канала давлением, создаваемым Микроинъектором через штуцер 14. После указанной опера5ции микройнструмент 2 с помощью мембраны 18 выводят из клетки (фиг.ЗБ). Далее клетка может быть перенесена для дальнейшего культивирования.

Таким образом, указанный способ

0проведения микроопераций значительно снижает повреждение клетки.за счет уменьшения ее деформации и позволяет из одного прокола проводить сложные микрооперации на клет5ке.

Фиг.г KUHb&fmpy 1 5

Фиг 3 (/лраИ емя