Способ выделения простагландинсинтетазы Советский патент 1984 года по МПК C12N9/00 

со о: ю Изобретение относится к биотехно логии, в частности к способам вьщеления простагландинсинтетазы - фермента, используемого для промьпплемк го синтеза простагландионов. Известен способ вьщеления простагландинсинтетазы из везикулярных желез 1 барана путем гомогенизации же лез в растворе, отделения ферментсо держащего экстракта, фильтрования о жира и осаждения лимонной кислотой при рН 4,8-5,0 с последующим отделением осадка фермента С1 3 Однако полученные таким образом препараты простагландинсинетазы в условиях ферментативного синтеза простагландинов имеют довольно высо кую неспеци.фическую окислительную способность, что приводит к образованию побочных продуктов окисления субстрата и не позволяет получать простагландины с высоким выходом. Известен способ выделения простагландинсинтетазы из везикулярных желез барана путем гомогенизации же лез в буферном растворе, отделении ферментсодержащего. экстракта, фильт ровании от жира и осаждения фермент из фильтрата высокоскоростным центр фугированием (105000-130000 в тече ние 60-90 мин) 2 . Этот способ позволяет получать фермент более высокого качества, выход простагландина Е, до 67%. Недостатком способа является необходимость использования мощных высокоскоростных центрифуг, что делает способ дорогостоящим и низкопро изводительным, а следовательно практически не пригодным для синтеза простагландинов в промьшленных условиях. Цель изобретения - упрощение процесса. Указанная цепь достигается тем, что согласно способу вьщеления простагландинсинтетазы из везикулярных желез барана путем гомогенизации желез в буферном растворе, отделения ферментсодержащего экстракта, фильтрования от жира и осаждения фермент из фильтрата осатвдение фермента осу ществляют с помощью смеси солей хлористого кальция и хлористого магния в концентрации каждая 5-10 t. Полученный осадок обычно отделяют центрифугированием и суспендируют в буфере, используемом для синтеза простагландинов. Полученные описываемым способом препараты простагландинсинтетазы характеризуются высоким содержанием белка, определяемого по Лоури, и удельной оксигеназной активностью, определяемой полярографически по поглощению кислорода в реакционной смеси с использованием в качестве субстрата арахидоновой кислоты. Пример 1, Исходное сырье (100 г везикулярных желез барана) гомогенизируют в буфере с рН 8 (200 мл 50 мМ трис-НС1) и центрифугируют при 10000-13000 15 мин. К супернатанту, тщательно фильтрованному через 3-Д слоя марли от жира, прибавля1 т при 1 л раствора хлористого кальция (8 мМ) и хлористого магния (5 мМ). Смесь перемешивают 30 мин при 4 С. Выпадающий за это время осадок микросом отделяют центрифугированием при 10000-13 000 §;. Осадок суспендируют 680 мл трис-НС1 буфера. Содержание белка (по Лоури) 2 г. Полученный препарат имеет удельную активность 0,24 мкмоль арахидоновой кислоты/мг белка в мин, т.е. его удельная активность сравнима с препаратами микросом, получаемыми способом дифференциального центрифугирования, а выход по белку в 1,52 раза выше. Сравнительная характеристика препаратов простагландинсинтетазы, полученных известными и предлагаемым способами из везикулярных желез барана ( в расчете на 100 г исходных желез), представлены в таблице. Таким образом, предлагаемый способ вляется более простым, более технологичным и обеспечивает получение целевого продукта с высокой активностью.

2,0

Осаждение солями

Дифференциальное

480

0,24

СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ ПРОСТАГЛАНДИНСИНТЕТАЗЫ из везикулярных желез барана путем гомогенизации желез в буферном растворе, отделения ферментсодержащего экстракта, фильтрования от жира и осаждения фермента из фильтрата, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, осаждение фермента осуп1ествляют с помощью смеси солей - хлористого кальция и хлористого магния в концентрации каждая 5-10 мМ. О) с