Способ оценки токсичности сточных вод Советский патент 1984 года по МПК C12Q1/02 C02F3/34 C12Q1/02 C12R1/865 

СО

(UD iCik Изобретение относится к области использования микробиологических объектов для контроля за загрязнением окружающей среды я может найти применение в токсикогенетике и водной токсикологии. Известен микробиологический метод для оценки токсичности промстоков по изменению нормы дыхания дрожжевых клеток С 13. Недостатком метода является то, что предлагается не лабораторный штамм, а кoм v epчecкий препарат дрождей Saccharomyces cerevisiae, не обладающий достаточной стабильностью и однородностью по физиологическим и генетическим свойствам. Кроме того метод не позволяет оценивать генетические эффекты испытуемых загрязнителей. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ выявления химических веществ, повреждающих генетический материал клетки путем выращивания диплоидного и тетраплоидного штаммов дрожжей S. cere visiae, контрастных по цвету 2. Однако данный метод не дает информация о токсических эффектах и не позволяет получить количественную характеристику мутагенной активности тестируемого соединения. Цель изобретения - повышение точности, определения за счет оценки то сикогенетических показателей. Поставленная цель достигается .тем, что согласно способу оценки ток сичности сточных вод с помощью микро организмов используют штамм Saccharomyces cerevisiae 15В-П4, фиксируют токсичное действие на него по цитостатическому и летальному показателям, а мутагенное действие - по увеличению количества мутантов. Пример. Клетки двухсуточн культуры 15В-П4, находящиеся в конце логарифмической фазы роста, обра батываются раствором исследуемого вещества 30-180 мин. Затем проводят посев на полную твердую среду и инк бируют. . Учет результатов на 4-5-е сут. Токсичное действие оценивается по цитостатическому и летальному де ствию. Последнее приравнивается про центу гибели клеток /5.j,-Son/, где i 55 100%; Sgj, «/f{ 100% {ft- среднее количаство колоний на чашку в опыте . М - среднее количество колоний на чашку в контроле. Цитостатическое дейст вие оценивается по задержке ро ста колоний и опыте по сравнению с контролем, выражейное в часах или сутках. Мутагенное действие оценивается по увеличению процента аукострофных |и дыхательных ядерных мутантов и дыхательных цитоплазматических (миТохондриальных мутантов. Процент мутантов / /У определяется по формуле Л-гМ/М 100%, где М- количество мутантных колоний определенного типа, Я - количество мутантных и немутантных колрний. Ауксотрофные мутанты выявляются как неспособные к росту на минимальной среде, дыхательные - как нерастущие на среде со спиртом вместо глюкозы. Для идентификации ядерных и митохондриальных дыхательных мутантов используется гибридологический метод, основанный на скрещиваемости (для ядерныхJH нескрещиваемости (для митохондриальных) мутантов с р тестерами. Для определения концентраций, рекомендуемых в качестве генетически безопасных ПДК и ПДС, оцениваются концентрационные зависимости токсических и мутагенных эффектов в диапазоне концентраций CZj -Ctj- и ниже. В качестве ЦЦК могут быть рекомендованы такие концентрации, которые не обладают токсичностью: не обладают цйтостатическим действием, не снижают достоверно выживаемость; не увеличивают мутирование (/У-) более, чем в 2-2,5 раза. Увеличение мутирования рассчитывается как отношение процента или частоты мутантов, выявленных в опыте, к величине мутантов, выявленных -в контроле (возникающих спонтанно J. . . в примерах 2-5 показано использование штамма S.cerevisiae 15В-П4 в токсикогенетических исследованиях. П р и м е р 2. Токсические и генетические эффекты действия фенолов: фенола (табл. ij и о-крезола табл. . В данном случае лиглитйрующиМ показателем при определении ЦЦК является летальное действие: концентрации фенола и о-крезОла 1 мг/л незначительно увеличивают мутагенность, не обладают цитостатическимтТбйСТ&йем, но вызывают гибель около 15% клеток. Примерз. Результаты токсических и генетических эффектов действия красителей основного ярко-зеленого (ОЯЗ) и основного фиолетового К СОФК) приведены в табл. 3 и 4. Даже концентрации ОЯЗ иОФК 1, О и 0,1, не обладающие цйтостатическим и летальным действием, не могут быть взяты как ЦЦК, поскольку обладают мутагенным действием - увеличивают более, чем в 2,5 раза возникновение ядерных мутантов. П р и м е р 4. Результаты токсических и генетических эффектов дей- . ствяя метилсернистых соединений диметилсульфоксида и диметилсульфида приведены в табл. 5 и 6.

Лимитирующим показателем при определении ПДК диметилсульфоксида является токсичность, а диметилсульфида - мутагенность.

П р и м е р 5, Результаты токсических и генетических эффектов промстоков БЦБК в зависимости от степени разбавления приведены в табл. 7.

Промстоки БЦБК, разбавленные в 100 и более раз, не обладают токсичным действием, незначительно увеличивают мутирование.

Использование изо{{ретения позволяет получать количественные характеристики одновременно токсических и генетических эффектов и определять концентрации веществ, рекомендуемые ;В качестве ПДК, безопасные по токси когенетическим показателям.

Предлагаемый способ может быть использован дпя определения минимальных разбавлений промстоков,безопасных в токсикогенетическбм и генетическом отношении.

Таблица

Таблица 4

Т а б л и Ц а 7

СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ СТОЧНЫХ ВОД С помощью микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения за счет оценки токсикогенетических показателей, используют штамм Saccharomyces cerevisiae 15В-П4, фиксируют токсичное действие на него по цитостатическому и летальному показателям, а мутагенное действие - по увеличению количества мутантов.

43,6 36,8

15,9

9,9

О

О

О

ь

11

230

0,023 700

0,070

9,6

5,4

0,00

0,00

4,9

1,8

0,00

0,00

1,6

0,00