Способ прямой экстракции витамина В12 из отходов антибиотической промышленности и других натуральных жидкостей Советский патент 1957 года по МПК C12P19/42 

Предметом изобретения является способ прямой экстракции витамипа В12 из отходов антибиотической промышленности и других натуральных жидкостей с применением цианидов.

Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет увеличить выхЬд целевого продукта и упростить процесс путем устранения наиболее затруднительных операций-адсорбции витамина активированным углем и последующей его десорбции.

Особенность способа заключается в том, что добавка цианидов производится перед экстракцией, которая ведется смесью, состоящей из трикрезола, керосина и бутанола, с последующей обработкой полученной жидкости известным образом путем перевода витамина Bi2 в воду, очистки его и кристаллизации.

В примепяемой для экстракции смеси трикрезол, керосин п бутанол содержатся в соотнощении 1 : 1 :0,1.

Способ осуществляется следующим образом.

К культуральной жидкости перед экстракцией добавляют 0,03-0,05% цианида натрия или цианида калия, доводят рН до 10 и выдерживают в течение 1 часаЭкстрагируют витамин смесью, содержащей трикрезол, керосин, бутанол в соотношении 1 : 1 : 0,1, взятый в количестве б-8% от общего объема экстрагируемой жидкости.

После разделения на сепараторе или отстаиванием к органической жидкости, содержащей витамин Bia, добавляют изопропиловый спирт (50% от объема жидкости), и витамин экстрагируют малыми порциями воды. Далее витамин поступает на очистку и кристаллизацию, которые проводятся одним из известных способов.

Пример получения витамина BIO из культуральной жидкости при производстве стрептомицина.

Имеет существенное значение чнстота поступающего па пе|)ераоотку маточника, поэтому принятую с прогревом до 80° первичную очистку культуральной жидкости при отделении мицелия проводят при рН около 4,5 (сиие - фиолетовый ио бромфенолблау). Это не Мешает получению стрептомицина и облегчает экстракцию витамина .Big.

Маточник нейтрализуется, к иему добавляется 0,05% цианистого натрия и рН доводится до 10 (синий по тимолфталеину), после чего он выдерживается 1 час. К маточнику добавляется 8% смесн трикрезолкеросин-бутанол 1 : 1 : 0,1, жидкости хорошо перемешиваются п иодаются на сепаратор для отделения органической смеси с витамином BI Выход смеси 75% от заданного количества. Маточник идет в отброс. При отсутствии сепаратора жидкости разделяются путем отстаивания в течение 3 час.

Выход смеси 65-70%.

Полученная смесь несколько раз промывается небольшими порциями воды {2-3 раза по 5% от объема смеси), затем к ней добгш.тяется ноловина объема изсиропи.тового илн бутилового спирта и витамин Bi2 экстрагируется 4-5 раз небольшими порциями воды. Обший объем водного экстракта составляет около 2/3 от объема добавляемого спирта (или 20 л1м маточника). Водный экстракт фильтруется от взвеси через нутч-фильтр, на полотно которого нанесен небольшой слой АьОз, а органическая смесь поступает на регенерацию (отгонку спирта) и возвращается на производство.

Фенол - бутанольная очистка. К профильтрованному водпом экстракту добавляется 0,25% цианида натрия и экстракт выдерживается 1 час. После этого он насыщается поваренной солью (пищевой) и витамин В|2 извлекается малыми порциями смеси фенол-бутанол 1 : 3, пока смесь не перестанет окрашиваться. Всего смеси расходуется 25% от объема водного экстракта (5 л/.и маточника). Смесь промывается насыщенным раствором поваренной соли до прекращения окрашивания промывных вод. Затем

к смеси добавляется 1 объем хлороформа и витамин Bi2 переводится в воду.

Выход водного экстракта около 50% от фенол-бутанольной смеси (2,5 л на 1 м маточника).

Фенол-хлороформениая очиетка. К водному экстракту небольши.ми порциями добавляется фенол-хлороформенная смесь 1 : 6. Первые 2- 3 порции, не захватывая витамина, удал5 ют примеси (окрашиваютея в желтый цвет без признаков розового оттенка) и отбрасываются, а последующие порции извлекают витамин Bi2 и собираются. Выход смеси около 60% от водного экстракта (1,5-2 на 1 м маточника).

Перевод витамина Bi2 в воду производится после добавления к смеси 2,5 объема хлороформа. Выход водного экстракта 45-50% от начальной смеси (0,7 л на 1 м маточника).

Трикрезол-СС1| очистка. Витамин из водного раствора извлекается малыми порциями смеси трнкрезол-ССЬ 1 : 1, а затем переводится в воду при добавлении к органической смеси ,3 объема CCl.i и 0,8 объема бутаиола. Конечный объем водного экстракта 0,4 л в расчете на 1 м маточника.

Д.тя зДалеиия из конечного воднсго экстракта остатка органических раетворителей он промывается 2-3 раза небольшими порциями серного эфира (наркозньш), остатки которого в свою очередь удаляются осторожным прогреванием экстракта на водяной бане.

Полученный конечный экстракт сгущается под вакуумом до содержания около 10 мг витамина Bi2 в 1 мл (до 40 мл на 1 ж маточника) и поступает на хроматографическую очистку на колонке с АЬОз и кристаллизацию.

Выход кристаллов, судя по 6 полупроизводственным загрузкам, составил 350-400 мг в расчете на 1 м маточника.

Предмет изобретения

1. Способ прямой экстракции витамина В|2 из отходов антибиотиче