Способ получения антибиотика эндруцидина Советский патент 1978 года по МПК C12D9/00 

лактозу, сахарозу, декстрин, г.пицерин или просеянное желе. Б качестве источника азота можно использовать пентозу, соевую муку, кукурузную патоку, мясной экстракт, аммониевую соль, органические или неорганические соединения азота. В среду можно добавлять небольшие

тивный ингредиент.

Водный раствор экстрагируют н-бутанапом. Экстракцию водным раствором соляной киспоты и н-бутанолом повторяют несколько раз до получения бутанольного экстракта, содержащего большое количество активного ингредиента.

Воздушный мицелий обильный, белый, прозрачная среда, растворимый пигмент отсутствует.

Глицериново-бульонный агар. Вегетативный мицелий обильный, распространенный, бесцветный. Воздушный мицелий обилы1ый, порошкообразный; обратный - cepoB to-желтый (РЙЖXXX. 19 - i). Растворимый пигмент отсутствует

сорбозу, суорозу, раффинозу, ;)скулин. сукцинат натрия, цитрат натрия.

Проявляет антибиотическую активность в отношении грамм-положительных бактерий.

Штамм Streptomyces fungicidicus В-5477 (АТСС-21014) получен из штамма В-5477

(АТСС-21013) с noMniiihm УЛТ.тпягЬиппртпнпгп

633488

11 рают и в нем доводят рН до 8,0 4 н. раствором едкого натрия, затем сразу же добавляют 100 л н-Бутанола. Смесь перемешивают и дают отстояться до образования двух слоев. н-Бутанольный слой промывают 50 л дистиллированной воды, затем дважды экстрагируют по 15 л 1/200 н. раствором соляной кислоты. Солянокислые вытяжки соединяют и доводят их рН до 8,0 4 н. раствором едкого натрия, затем сразу же добавляют 10 л н-бутанола. Смесь пе ремешивают и дают отстояться до образования двух слоев. Бутанольный слой отбирают и дваж ды промывают дистиллированной водой по 1/3 объема бутанольного слоя. К промытому таким способом бутанольному слою добавляют дистиллидрованную воду в количестве 1/4 объема. Смесь упаривают под пониженным давлением при наружной температуре не выше 70° С. Концентрат подвергают такой же обработке как влажный мицелий по данному примеру, получают около 0,5 г сырца порошка с активностью 5000-7000 ед/мг против Staphylococcus aureus. Пример 4. }00л кислого раствора, содержащего активный ингредиент, полученный экстрагированием и-бутанолом аналогично примеру 3, пропускают через колонку, заполненную 1 кг активированного угля, причем колонка предварительно промывается соляной кислотой, и получают 70 л почти бесцветной фракции, содержащей активный ингредиент. Эту фракцию пропускают через колонку, заполненную 42,5 л Амберлита t)R с получением слабощелочного водного раствора. Этот раствор упаривают при сравнительно низкой температуре при пониженном давлении. К концентрату добавляют и-бутанол, омесь перемешивают для переноса активного ингредиента в бутанольный слой. К бутанольному слою добавляют эфир, не содержащий перекисей, при этом выпадает активный ингредиент; либо к бзгганольному слою добавляют 1 н. раствор соляной кислоты до рН 4,5, затем его упаривают или вымораживают. Соответствен но получают 1,8 г порошкообразного вещества с активностью 7500-10000 ед/мг против Staph. aureus или 1,9 г порошкообразного вещества с активностью 7500-10000 ед/мг. Пример 5. 1г сырого порошкообразного вещества, полученного по примерам 3 или 4, растворяют в смеси 500 мл метанола и 1 мл 1 н. раствора соляной кислоты. После пропускания раствора через колонку, заполненную 10 г активированного угля, обработанного смесыо 4 мл 0.1 н. г.ппяппй к игипты и 1ПП

633488 при охлаждении. Осадок отфильтровывают и. 1фомывают эфиром. Получают 500 мг гидрохлорида с активностью 15000 ед/мг против Staph. aureus. Порцию осадка (гидрохлорида) 100 мг растворяют в 100 мл 20%-ного водного метанола, затем этот раствор пропускают через колонку, содержащую 5 мл Амберлита R-4. Колонку элюируют метанолом, элюат упаривают, получают концентрат, который вымораживают, промывают ацетоном и эфиром. Получают 50 г белого порошка (свободная форма антибиотика) с активностью 1000015000 ед/мг против Staph. aureus. Пример 6. 16л бульона, полученного по примеру 1, фильтруют для отделения 4 кг влажного мицелия. Этот мицелий экстрагируют трехкратньп объемом 70%-ного раствора водного ацетона при перемешивании в течение 3-4 ч. К ацетоновой вытяжке добавляюг 280 г активированного угля (Сирахаси-А, Япония) и 280 г Гифло Супер Цел (Джонс Мэнилл Сейсл Корп., США), смесь перемешивают в течение 1 ч. После фильтрования уголь промывают десятикратным объемом ацетона, затем десятикратным объемом метанола по объему фильтрата. Обработанный таким образом уголь дважды экстрагируют двадцатикратным объемом (по объему угля) подкисленного водного ацетона при перемешивании в течение 3 ч. Экстракты соединяют и доводят рН до 5, затем растворитель выпаривают и .оставляют 1,5 л водного раствора. Этот раствор пропускают через колонку с 200 мл Амберлита 3R-45 (Н), затем перегоняют под пониженным давлением для удаления растворителя. После добавления 5 л воды рН доводят до 8,5 и трижды экстрагируют н-бутанолом в количестве 1/3 объема раствора. Бутанольный экстракт промывают водой и упаривают под пониженным давлением до остатка в 500 мл водного бутанола. К последнему добавляют 5 л эфира и получают осадок, который отфильтровывают и сушат с получением 4 г порошкос разного сьфца зндурацидина с активностью 10000 ед/мг против Staph. aureus. Пример 7. В две колбы на 2 л вливают 500 мл среды, содержащей,%: 2 глюкозы, 3,5 кукурузной патоки, 1,5 углекислого кальция и воду. В среду вносят мутанг Str. funni -if iniic ГАТГГ Т1П1Л .. «. 1363.М мала, 1 кукурузной патоки, 1 соевой муки, 0,3 хлористого натрия, 0,5 пептона, 0,5 углекислого кальция и воду (рН 7,0), в которую виосят посевной материал. Инкубирование ведут при 28°С при перемешивании и скорости азрации 30 л/мин. Максимальная активность культуральной жидкости наблюдается после 78-90 ч инкубации при рН среды 7,84 и равна 1500 ед/мл.10 Редактор Н. Потапова Техред О. Андрейко Корректор С. Шекмар

Заказ 6417/50Тираж 525Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5

Составитель Г. Смирнова

по делам изобретений и открытий 88И Формула изобретения Способ получения антибиотика эидурацидина, отличающийся тем, что штамм Streptomyces fungicidicus В-5477 (АТСС 21013) или штамм Streptomyces fungicidicus В-5477 (АТСС-21014) выращивают в аэробных условиях на питательной среде, соде{)жащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим вьщелением целевого продукта и, при необходимости переводят антибиотик в соль.

Date : 13/07/2001

Number of pages : 2

Previous document : SU 633488

Next document : SU 633490