Способ определения количества лейкоцитов в молоке Советский патент 1984 года по МПК G01N33/04 

со а f Изобретение относится к способам исследования молока и мозюет быть ис пользовано для проверки его качеств при приемке на молочных предприятиях, а также дая проверки его на молочных фермах. Известен способ определения коли чества лейкоцитов в молоке, предусматривающий отбор проб молока, смешивание их с реактивом Фелинга и визуальное анализирование получен ной смеси J. Недостатками этого способа являются низкая чувствительность и пло хая воспроизводимость. Наиболее близким к изобретению является способ определения количества лейкоцитов в молоке, предусмат ривающий отбор проб молока, смешива ние их с аналитическим реагентом и анализирование полученной смеси. -При этом в качестве аналитического реагента используют щелочной раство фосфина 3R гидрохлорида 2. Недостатками известного способа являются низкдя чувствительность и высокая погрешность. Целью изобретения является повышение чувствительности и точности способа. . Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения количества лейкоцитов в молоке, предусматривающему отбор проб молореагентом и анализирование полученн смеси, в качестве аналитического реагента используют раствор флуорес цеиндиацетата с концентрацией м, полученную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30-50 мин, и затем измеряют интенси ность ее флуоресценции, а определение количества лейкоцитов осуществ1ляют по уровню интенсивности флуоресценции. Способ осуществляют следующим образом. Отбирают пробу молока и разбавляют ее буферным раствором (рН 7,5, ионная сила 0,15 М) . К пробе добавляют раствор флуоресцеиндиацетата и вьщерживают смесь в течение 30-50 мин, а затем на флуориметре определяют интенсивность флуорес- . ценции, по которой судят о количестве лейкоцитов в молоке. Интенсивность флуоресценции нормального молока принимают- за нулевую. С увеличением концентрации лейкоцитов в молоке интенсивность флуоресценции увеличивается . Пример. Отбирают пробу исследуемого молока в количестве 1 мл, смешивают ее с 2 мл фосфатного буфера (рН 7,5, /и. 0,15 М), приливают 20 мкл раствора флуоресцеиндиацетата с концентрацией 5-10 М и вьщерживают в течение 40 мин при 1820 0. По истечении этого времени 50 мкл смеси смешивают с 2 мл фосфатного буфера и определяют интен :ивность флуоресценции на флуориметре. При этом длину волны возбуждающего излучения устанавливают равной 470 нм, а длину волны анализируемого излучения (флуоресценции) - 530 нм. Для определения числа лейкоцитов строят график зависимости интенсивности флуоресценции от числа лейкоцитов, анализируя пробы молока с известным числом лейкоцитов (последнее определяют путем подсчета числа лейкоцитов под микроскопом). Результаты определения количества лейкоцитов путем подсчета под микроскопом по известному и предлагаемому способам приведены в таблице.

11096414

Продолжение таблицы

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ В МОЛОКЕ, предусматрива1ощий отбор проб молока, смешивание их с аналитическим реагентом и анализирование полученной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувстви - тельности, в качестве аналитического реагента используют раствор флуоресцеивдиацетата с концентрацией 10 -10 м, полученную смесь вьщерживают при комнатной температуре в течение 30-50 мин и затем измеряют интенсивность ее флуоресценции, a определение количества лейкоцитов осуществляют по уровню интенсивности флуоресценции. (Л с

Количество знаков + пропорционально концентрации суспензии в смеси пробы молока с аналитическим реагентом.

„Представленные данные показьгеают, способа в 2 раза, а точность в 3,5 что чувствительность предлагаемого раза вьппе, чем у известного способа.