Способ определения зоокумарина Советский патент 1988 года по МПК G01N21/64 

со

00 ел

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению зоокумарина (З-(а-атетонилбензил)- 4-оксикумарин) в субстанции, объектах биологического происх ождения и воздуха рабочей зоны. С целью повышения чувствительности и избирательности анализируемую пробу обрабатывают последовательно растворами йо да монохлорида, гидроксида калия в этиловом спирте и диметилформамидом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора. Чувствительность способа составляет 0,001 мкг/мл (известного способа - ни выше 1 мг/кл). 6 табл. с S (Л

00

со

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения зоокумарина (3-(а-атето- нилбёнзил)-4-оксикумарина) в субстан ции, объектах биологического происхождения и воздуха рабочей зоны.

Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности,способа,

Способ осуществляют следующим образом.. .

Исследуемую пробу растворяют в 96%-ном этиловом спирте и добавляют к полученному раствору 10%-ньш эта- нольный раствор йода монохлорида, 20%-ный этанольный .раствор гидрокси - да калия, диметилформамид. Интенсивность флуоресценции полученного раствора измеряют на флуориметре по от- ношению к стандартному с известным содержанием зоокумарина. Расчет содержания зоокумарина в анализируемой пробе проводят по калибровочному графику

Пример 1. Качественное определение зоокумарина в субстанции и биологических объектах.

К 1-2 мг субстанции или 0,1-0,2 мл экстракта и биологического материала прибавляют последовательно 1 мл 96%- ного этилового спирта. О,1 мл 10%- ного этанольного раствора йода монохлорида, 0,2 мл 20%-ного этанольнсэго раствора гидроксида калия, перемешивают и прибавляют 9 мл диметилформа- мида, перемешивают. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС-3 наблюдают яркую голубую флуоресценцию, что свидетельствует о присутствии в исследуемой пробе зоокумарина.

П р и м е р 2, Количественное определение зоокумарина в субстанции.

0,01 г (точная навеска) порошка зоокумарина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и прибавляют 70- 80 мл 96%-ного этилового спирта, перемешивают и доводят спиртом до метки. 0,5 мл полученного раствора мерной пипеткой переносят в пробирку и прибавляют 0,1 мл 10%-ного этанольного раствора йода монохлорида, 0,2 мл 20%-ного этанольного раствора гидроксида калия, 9,2 мл диметилформамида, переме шивают. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного, раствора по отношению к стандартному, содержащем 5 мкг/мл зоокумарина. Измерение про

0

5 0 5

0

j

5

0

5

0

водят на флуориметре модели Биан или ЭФ-3 МА. Содержание зоокумарина рассчитывают по калибровочному графику.

П р и м е р 3. Количественное определение зоокумарина в тканях отравленных животных и биологических жидкостях.

В фарфоровой ступке измельчают 10,0 г биоматериала с 50 мл 96%-ного этиловогр спирта. Полученную смесь переносят в склянку с притертой пробкой и через 30 мин фильтруют в делительную воронку.

При исследовании крови образец 5- 10 мл центрифугируют, прибавляют 50 мп 96%-ного этилового спирта, подкисленного соляной кислотой, и помещают в делительную воронку на ,100 мл. При исследовании мочи образец объемом 5- tO мл помещают в делительную воронку на 100 мд и прибавляют 50 мл 96%-ного подкисленного этиловрго спирта. Далее все операции проводят аналогично, как при определении в тканях.

К содержимому делительной воронки прибавляют 25 мл диэтилового эфира и встряхивают 1-2 мин, эфирную вытяжку сливают. Экстракцию повторяют дважды порциями эфира по 25 мл. Полученные эфирные вытяжки объединяют в выпарительной чашке и упаривают на водяной бане до сухого остатка. К полученному остатку после выпаривания прибавляют 1 мл 96%-ного этилового спирта, и полученный раствор переносят в пробирку, куда добавляют последовательно О,1 мл 10%-ного этанольного раствора йода Монохлорида, 0,2 мп 20%-ного этанольного раствора гидроксида калия и 8,7 мл диметилформамида. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному с известным содержанием зоокумарина. Расчет концентрации зоокумарина в анализируемой пробе проводят по калибровочному графику.

П р и м е р 4. Количественное определение зоокумарина в воздухе рабочей зоны. .

Исследуемьп воздух с объемным расходом 20 л/мин аспирируют через фильтр АФА в течение 15 мин. Для определения 1/2 ПДК следует отобрать 300 л воздуха. Вещество с фильтра смьгаают 1 мл 96%-ного этилового спирта в пробирку и к полученному раствору прибавляют 0,1 мл 10%-ного этанольного раствора

йода монохлорида, 0,2 мл 20%-ного раствора гидроксида калия в этаноле и 8,7 мл диметилформамида, перемешивают. Измеряют, интенсивность флуорес- ценции полученного раствора по отношению к стандартному, с известным содержанием зоокумарина. Расчет концентрации зоокумарина в воздухе рабочей зоны проводят (в мг/м ) по ка- либровочному графику или общепринятой формуле.

Способ имеет высокую избирательность: подобной реакции не дают кумарин, синкумар, нетрофарин, неоди- кумарин, фепромарон, фенолы, хромоны и ряд других близких по структуре соединений.

Данные о флуоресценции зоокумарина и близких по структуре соединений при определении по предлагаемому способу представлены в табл. 1.

Таблица 1

Вещество

Наличие флуоресценции

н

Яркая голубая

Нет

Нет

Нет

Нет

Нет

Нет

у

Бледно-фиолетог- вая, быстро затухающая

Нет Нет Нет Нет Слабая зеленая

В табл. 2 представлена зависимость интенсивности флуоресценции зоокумарина от количества 10%-ного этаноль- ного раствора йода монохлорида (С 5 мкг/мл).

Таблица 2

25

В табл. 3 представлены зависимости и интенсивности флуоресценции зоокумарина от количества 20%-ного эта- нольного раствора гидроксида калия (С 5 мкг/мл) и диметилформаГ Мда соответственно.

Таблица 3

40

45

50

55

Количества и концентрации реактивов выбраны исходя из максимг1льного значения интенсивности флуоресценции

51385039

Прямолинейная зависимость между

Продолжение табл.5

54 63 72 81 90

Предлагаемый способ определения 15 зоокумарина может быть использован для качественного и количественного определения его в субстанциях роденВ табл.,6 приведены результаты определения зоокумарина в субстанции

т -- W i -jf С1п1,плл

Чувствительнрсть способа составля- тицидных приманках на основе зоокует 0,001 мкг/мл, ранее известного - „ отравленных животньпс,

не вьпие 1 мг/кл. . биологических жидкостях и воздухе ра

Таблица 6 бочей зоны предприятий-изготовителей

Способ найдет широкое применение в контрольно-аналитических лабораториях, санитарно-гигиенических и ток- зрокумарина, 25 сикологических лабораториях при опре делении в объектах биологического происхождения.

10

Предлагаемый способ определения зоокумарина может быть использован для качественного и количественного определения его в субстанциях роден т -- W i -jf С1п1,плл

тицидных приманках на основе зооку30

Фор мул а изобретения

Способ определения зоокумарина, отличающийся тем, что, с целью повьшения чувствительности и избирательности, анализируемую про- бу обрабатывают последовательно растворами йода монохлорида, гидроксида калия в этиловом спирте и диметилфор- мамидом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученно- SQ раствора.