Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам Советский патент 1984 года по МПК C12Q1/04 

ч.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к определению чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам.

Известна питательная среда МПБ - для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотэдкам и сульфамидным препаратам методом серийных разведенки lJ .

Известна также питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам, содержащая источник азота, глюкозу, хлористый натрий, феноловый красный и дистиллированную воду 2 .

Однако известные среды не обеспечивают ускоренного опредбления.

Целью изобретения является ускорение определения.

Эта цель достигается тем, что питательная среда для определения чувствительности в(Iфoopгзнизrмoв к химиотерапевтичесют препаратам, содержащая источник азота, глкясозу, хлористый нат|Я1й и днстШлировашук воду, дополнительно содержит тисгяйколевую кислоту, сернокиашй магний сернокислое железо, зшористЫй кальций и фосфорнокислый двузамев(енв|)1й калий, в качестве источника азота она содержит никотиновую кислоту при следующем- соотношении компонентов, мас.%

Тиогликолевая кислота0,0001-0,0002 . Никотиновая кислота0,0001-0 0003 Сернокислый магний0,01-0,015 Сернокислое железо 0,001-0,002 Хлористый кальций 0.00t-0,0015 Фосфорнокислый двузамеценный

калий0,05-0,06

Глюкоза0,15-0,2

Хлористый натрий 0,55-0,85 Дистиллированная водаОстальное

Питательную.среду используют слечдующим образом..

Пример 1. Для приготовления среды в дистиллированной воде растворяют исходные компоненты. Среду трехкратно дробно стерилизуют текучим паром на врдяной бане при

22696-2

10.0°С в течение 15 мин, разливают стерильно по 0,3-0,5 мл в пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками. Разлитая таким образом среда годна

5 к применению в течение 10--15 дн при условии хранения в холодильнике. Для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам у больного по обычным

0 правилам берут материал, подлежащий исследованию. Если для исследования взята ткань, ее измельчают и готовят 10-20%-ну суспензию. Затем в контрольный и опытный ряды проби5 рок, содержащих по 0,3-0,4 мл жидкой синтетической среды, вносят по 0,1 МП исследуемой суспензии. В опытга ряд, кроме того, вводят исотлтуемые хймиопрепараты в объеме

0. по 0,1 МП и количестве, обеспечивающем создание терапевтической концентрации.

Количество опытных рядов соответствует числу исгштуемых химио5 терапевтических препаратов.

nepBiiie пробирки контрольного и опытного рядов служат для определе няя исходного значения рН, вторые, , четвертью и пятые - для

0 вЕ(Явяения изменения рН. Рекомендуется измерять значение рН сразу же после посева и спустя 2, 3 и 4 ч инкубирования (4 измерения для каждого исследуемого хгавсотерапевтического препарата, т.е. 4 пробирки)

Замер рН через 1 ч производить нецелесообраэно, поскольку за .это время, как правило, сдвиг рН несуцественш. Поэтому при малой концентрация микроорганизмов в материале (менее 10 в 1 мл) и неубедительных данных, полученных спустя ,2-3 ч, могут потребоваться дополнительные измерения рН через 4-5 ч. т.е. действие кажяого взятого в опыт химиотерапевтического препарата проверяют не в трех, а в пяти пробирках (две резервнью).

Такой же набор пробирок используп 0 ется и в контрольном ряду, где вмес то химиотерапевтического препарата вводят по О,1 мл 4«зиологичёского раствора хлористого натрия.

Пробирки контрольного и опытно5 го рядов инкубируют при . По истечении срока наблюдения, т.е. через 2, 3, 4 и 5ч, содержимое контрольных, а затем опытных пробирок

последовательно переносят в микроканюли, входящие в комплект рНметра.

Электрод, служащий для измерения рН в микроканюле перед погружением в нее, обрабатывают 70 -ным спиртом трехкратно с послед-укщей тр«х1фатной промывкой стерильной дистиллированной водой и определяют рН среды.

После каждого определеиия в кон рольной, азатем опытной гфобирках) электроды обрабатьюают указанным образом. Учет результатов проводят путем установления разницы р) в одает ном и контрольном радах. При чувствительности ь01Кроогрганйз:нов к исследуемому химиотеракевтическся у нреп арату средняя величина paaim i в показаниях рН между исходным и последуищим зиаченияьо его в ошдгист ряду составляет менее .

По сравнению с; контролем эта разиица, как правило, более 0,t, причем t 2. В случае устойчяэости микрофлоры HSMeRetput рН в контрольном и опытном рядах ОДНОтипна а различие значения рВ в и контроле статистически недостоверно (менее 0,05 рЯ, t 2).

Пример 2. Готовят три серии питательной среды.

Первый состав содержит, мас.%: Глюкоза 0,15 Никотиновая

кислота 0,0001 Тиогликолевая

кислота 0,0001 . Хлористый

кальций 0,001

Сернокислый магний 0,01 Сернокислое железо 0,001 Фосфорнокислый

двузамещенный калий 0,05 Хлористый натрий0,55 Дистиллированная вода Остальное рН 7,4, темпераtypa437°C. Второй состав содержит, мас.%: Глюкоза 0,17 Тиогликолевая кислота 0,00015 Никотиновая кислота 0,0002

Хлористый кальций0,0012 Сернокислый магний 0,012 Сернокислое железо 0,0015 Фосфорнокислый двузамещенный калий 0,055 Хлористый натрий 0,7 Дистиллированная вода Остальное Третий состав, мас.%: Глкасоза 0,2 Никотиновая

кислота 0,0003 Тиогликолевая кислота 0,0002 Хлористый кальций0,0015 Сернокислый магний0,015 Сернокислое железо 0,002

Фосфорнокислый двузамещенный

калий0,06

Хлористый натрий 0,85

Дистиллированная

водаОстальное

рН 7,28, температура437°С.

В качестве исследуемого материала используют биоптаты из раны болного, определяют чувствительность микроорганизмов &1оптатов к пеницилину и гентаьяцину..

Контрольный и опытные ряды, сое Стоящие из пяти пробирок , заполняют 0,3 мл среды и 0,1 мл суспензии инфицированной ткани в разведении 1:20.

В О1ШТНЫЙ ряд вносят 0,1 мл расвора антибиотика, в контрольный ряд - 0,1 мл физиологического раствора. Инкубируют 3-4 ч и учитывают результаты с помощью рН-метра.

В случае устойчивых культур рН среды в контрольном и опытном psj дах кислый, при этом накопление ки лых продуктов жизнедеятельности микроорганизмов достоверно определяется через 2 ч инкубирования.

При чувствительности микрофлоры к исследуемому препарату средняя величина разницы между исходным и последующими значениями рН среды в.

511226966

опьРге менее 0,05 в то же время поИспользование предложенной среды

сравнению с контролем, где увеличи-позволяет ускорить определение,

вается накопление кислых продуктовповысить его точность за счет учежизнедеятельности микроорганизмов,та результатов с помощью рН-метра,

более 0,1. 5 а также уни(| 1цировать способы опРезультаты определения чувстви-да пригодна для определения чувсттельности микроорганизмов с исцоль-витеяьности микроорганизмов к ширрзованием известной среды получают;кому кругу химиотерапевткческих пре

через 5 ч, с использованием npiewio-О .царатов и не требует вьщеления чис

«енной среды - через 2-3 ч.той культуры. ределения, так как питательная ере

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К ХИМИРТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ, содержащая источник азота, глюкозу, хлористый натрий и дистиллированную воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью ускорения определения, она дополнительно содержит тиогликолёвую кислоту, сернокис1П Ей магний, серкокислое железо, хлористый кальций фосфорнокислый двузамещенный калий, в качестве источника она содержит никотиновую кислоту при следующем соотношении компонентов, мас.%: Тиогликолезая 0,0001-0,0002 кислота Никотиновая 0,00014), 0003 кислота Сернокислый 0,01-0,015 магний Сернокислое О,001 -0,002 железо СП Хлористый 0,001-0,0015 кальций Фосфор но кислый двузамещенный 0,05-0,06 калий 0,15-0,2 Глюкоза Хлористый нат0,55-0,85 рий 0 ДистиллированN9 9) Остальное ная вода ;О