Способ получения эритроцитарного диагностикума Советский патент 1984 года по МПК A61K35/18 G01N33/48 

1 |й

:д

Изобретение относится к вакцинно-сывороточному делу и может быть использовано в технологии получения эритроцитарных диагностикумов медицинского и ветеринарного назначения.

Известен способ получения эритроцитарных диагностикумов путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией l .

Недостатками известного способа являются низкая специфическая активность целевого продукта вплоть до получения искаженных результатов при обследовании сывороток здоровых и больных людей, а также трудоемкость проверки специфичности диагностикума, так как для этого необходимо предварительно отобрать 10-12 сывороток больных соответствующим заболеванием и столько же сывороток здоровых доноров .

Целью изобретения является повышение специфической активности целевого продукта.

Поставленная цель достигается согласно способу получения эритроцитарного диагностикума путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, в качестве целевого продукта используют сенсибилизированные эритроциты о зарядом 3,310 -1,81-10 Кл.

Способ осуществляется следующим образом.

После получения цельной крови (например, бараньей) эритроциты фиксируют 5)ормалином, сенсибилизируют необходимым сенситином, затем жидкий препарат замораживают и посл гиофильной .сушки получают сухой диагьзостикум, У жидкого или сухого препарата определяют заряд эритроцитов, а в качестве диагностикума используют эритроциты с зарядом 3,3-10 К - 1,81-10 Кл.

При технической реализации предлагаемого способа для повышения специфичности определенного эритроцитарного дукагностикума предв арительно устанавливают граничное значение величины заряда, при снижении которой у целевого продукта ведут выбраковку готового препарата. Граничные значения можно определить однократным определением заряда специфических и неспецифических серий целевого.продукта при параллельном их контроле с гипериммунными сыворотками животных и сыворотками здоровых доноров, т.е. путем градуировки, как проиллюстрировано в примере. Причем по. существующим техническим условиям Регламента произ водства дйагностикум считается специфичным если титр его с сывороткой

здоровых доноров в реакции РИГА меньше чем 1/100.

Пример. Контроль специфичности жидких и сухих эритроцитарных дизентерийных диагностикумов Зонне.

5 1 мл жидкого эритроцитарного диагностикума Зонне ( в случае контроля сухого препарата его предварительно в течение 1 сут вымачивают в дистиллированной воде) подвергают центри0 фугированию при «350 в течение 5 мин. Полученный осадок, содержащий эритроциты, сенсибилизированные дизентерийным антигеном Зонне, обрабатывают измерительной средой с па5 раметрами: ионная сила ги 0,02; рН 7,3; t 25С.

Концентрацию эритроцитов в пробе доводят разбавлением ее измерительной средой до .10 клеток на 1 мл. Величину поверхностного

0 зар5ща эритроцита рассчитывают по формуле « 3 V 10 IJ эе 05 (ЪКл, где измеряемой величиной является U - электрофоретическая подвижность

1 . MVM Р П пм П - nwQwnr-Ti,

(ЭФП) , мкм с В см; Ч - вязкость

5 (для используемых растворов равна 10 П) ; Ж - величина, обратная толщине двойного электрического слоя, которай для водных растворов одновалентных солей (концентрация,

0 См) равна Jt-fcM/i,06 ; S - плсядадь поверхности эритроцита, среднее значение которой 1,65-10 см

ЭФП измеряют методоммикроэлектрофореза.на приборе Пармоквант-2 ( Карл.Цейсс, Йена) в режиме

5 автоматическйго анализа подвижности 100 эритроцитарных клеток. Используемый измерительный прибор обеспечивает получение средних значений ЭФП.

В таблице приведены результаты

0 контроля производственных серий дизентерийного эритроцитарного диагностикума Зонне по ЭФП и в РИГА с донорской сь вороткой.

Из приведенной таблицы следует,

5 что и для жидких, и для сухих препаратов нижним граничным значением ЭФП, по которому следует браковать препарат, является ЭФП «1,10 (или 1,81-10 КЛ) , так как препараты,

0 ЭФП эритроцитов которых равен 1,10 и более ( серии 5-8) имеют титр в РИГА с донорской сывороткой ниже, чем 1/100, т.е. соответствуют техни ческим условиям. Препаратй с ЭФП

1,04 и ниже (заряд 1,71-10 Кл, серии 1-4) не соответствуют ническим условиям, так как имеют титры с донорскими сыворотками 1/150 и более.

0

Верхняя граница значений ЭФП используемых препаратов определяется природой поверхности фиксированных несенсибилизированных эритроцитов ;барана. Это значение оказалось рав5 ным 2 мкм или 3,3-ia Кл. Преиму1цества предлагаемого способа заключаются в повышении специфической активности диагностикума за счет отработки из готовых диагностикумов, препаратов с низкой специфической активностью. Кроме того, способ прост,так как отпала необходимость в донорских сыворотках,которые ранее было необходимо предварительна получать для постановки реакции РИГА.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, о т ли чаюц и и с я тем, что, с целью повниюния специфической активности продукта, в качестве целевого продукта иЪпользуют сенсибилизированные эритроциты с зарядом 3,3-Ю - 1,а1-10 Кл. 9