Способ определения азафена Советский патент 1985 года по МПК A61K31/5383 

4;:

о:

4

оо

I 1

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения лекарственного препарата азафена,

Известен способ количественного определения азафена, заключающийся в растворении азафена в /-.кстиллированной воде с последующим измерением оптической плотности полученного раствора при длине волны.344 нм i

Недостатками этого способа являются невысокая чувствительность определения - 2 мкг/мл и низкая избирательность.

Известен также способ определения азафена путем измерения относительной интенсивности флюоресценции раствора 2J .

Недостатком известного способа является то,что чувствительность О,1 мкг/мл не всегда достаточна при определении азафена в биологических исследованиях и невысокая избирательность, так как собственной флюоресценцией обладает большое число органических соединений.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения азафена путем измерения интенсивности флюоресценции раствора, пробу -растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной серной кислотой в соотношении 1:0,20,4, облучают возбуждающим светом с длиной волны 360 нм, а интенсивность флюоресценции измеряют при длине волны 470 нм.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной серной кислотой в соотношении 1:0,2-0,4 г, после чего довЬдят объем раствора до 10 мл уксусным ингидридом, облучают возбуждающим светом с длиной волны 360 нм и измеряют относительную интенсивность флюоресценции полученного раствора при длине 470 нм.

Интенсивность флюоресценции не изменяется в течение 24 ч.

Пример 1. Качественное определение азафена.

К крупинке мелкоизмельченных ; т аблеток или порошка азафена прибавляю t мл уксусного ангидрида, встряхиваю т, затем к полученному раство60482

ру прибавляют 0,2 мл концентрированной серной кислоты, в результате чего.появляется при.облучении ультрафиолетовым светом с длиной волны 5 365 нм интенсивно флюоресцирующее голубым светом соединение, что говорит о наличии азафена в пробе.

Пример 2. Количественное определение азафена.

0 0,01 г (точная навеска) порошка азафена переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 10 мл муравьиной кислоты, встряхивают 10 мин, доводят объем уксусным ангидридом

5 до метки.

1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем уксусным ангидридом до метки.

0 К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,2 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и добавляют 8,8 мл уксусного ангидрида. Раствор тщательно перемешивают и

5 измеряют относительную интенсивность флюоресценции.

Пример 3. Определение азафена в моче.

К 1 мл мочи прибавляют 1 мл дис- тиллированный воды, перемешивают. На хроматографическую пластинку Silufol наносят 0,05 мл смеси небольшими порциями, высушивая пятно после нанесения каждой порции. Хроматографическую пластинку помещают в насыщенную парами хроматографическую камеру со смесью растворителей спирт этиловый:раствор аммиака 25%-ньш в соотношерши 9:1.

Пятна азафена с Rf 0,75 коли0 чественно переносят в центрифужную пробирку, прибавляют 1 мл уксусн.ого ангидрида, 0,2 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и добавляют 8,8 мл уксусного ангидрида.

5 . Раствор центрифугируют при

3000 об/мин в течение 10 мин, после чего прозрачный раствор сливают в кювету и измеряют относительную интенсивность флюоресценции.

, В качестве стандартного раствора берут раствор с одной из следующих концентраций: 0,001, 0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0 мкг/мл.

Полученные результаты определения

5 азафена в моче (искусственая смесь с 10 мкг/мл) приведены в табл. 2.

Параллельно проводят опыт со стандартным раствором азафена и

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗАФЕНА путем измерения интенсивности флюоресценции раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, пробу растворяют в уксусном ангидриде и обрабатывают концентрированной серной кислотой в соотношении 1:0,2 0,4, облучают возбужданядим светом с длиной волны 360 нм, а интенсивность флюоресценции измеряют при длине волны 470 нм.