Способ получения сорбента для разделения олигонуклеотидов Советский патент 1985 года по МПК B01J20/10 B01D15/08 G01N30/48 

ел

со со

О) Изобретение относится к материал для жидкостной хроматографин и може быть использовано в цинтезе сорбентов для разделения и анализа олигонуклеотидов. Цель изобретения - повышение селективности и разрешаюо ей способнос ти сорбента. Сущность предложенного способа заключается в следующем. Высушенный в вакууме силикагель обрабатывают раствором полиэтиленим на в этиловом спирте, перемешивают, дегазируют,фильтруют, отмывают этиловым спиртом. Полученную композицию сущат и обрабатывают раствором эпоксидной смолы или дибромэтана в диоксане. После следующей промывки сорбента и сушки на него воздейству избытком йодистого метила в ацетони риле, дегазируют и кипятят реакцион ную смесь, промывают ацетонктрнпом окончательно высушивают. Пример 1. Синтез сорбента. 2 г силохрома С-80 с удельной поверх ностью 80 , предварительно высушенного в вакууме при 190°С в течение 3 ч, помещают в круглодонную кол обу на 100 мл и заливают 20 мл 10%ного раствора полизтиленимина (молекулярная масса 35 тыс.) в этиловом спирте. Хорошо перемешивают на встряхивателе 3 мин, дегазируют, оставляют на 40 мин и повторяют встряхивание. Затем силикагель на фильтрующей воронке промывают этиловым спиртом (6 X 30 мл) и сушат при 90С в вакууме в течение 2ч, переносят в круглодонную колбу на tOO мл добавляют 20 мл 10%-ного раствора . эпоксидной смолы ДЭГ-1 в диоксане, встряхивают 2 мин, дегазируют, остав ляют на 12 ч. После этого носитель промывают последовательно диоксаном (Эх 30 мл), спиртом (3 X 30 мл), ацетонитрилом (3 х 30 мл), спиртом (2 X 30 мл), сушат в вакууме при в течение 2 ч. Переносят в круг лодонную колбу на 100 мл, добавляют 50 мл 50%-ного раствора йодистого метила в ацетонитриле, перемешивают на встряхивателе 3 мин, дегазируют, кипятят 2 ч и оставляют на 12 ч при комнатной температуре. Промывают сорбент ацетонитрилом (3 х 30 мл), этиловым спиртом (3 X 30 мл), сушат в течение 2 6 Содержание азота в полученном сорбенте по элементному анализу составляет 1,4%, что соответствует емкости 1,0 мг-экв/1. Пример 2. Синтез сорбента. Синтез проводят аналогично примеру 1, но вместо раствора эпоксидной смолы берут 10%-ный раствор 1,2-дибромэтана в диоксане. После обработки йодистым метилом и сушки, сорбент заливают 50 мл смеси диметилбензиламина и ацетокитрила (1:1), встряхивают 2-3 мин, дегазируют и оставляют на 10 ч. После этого носитель промывают на воронке с фильтрующим дном ацетонитрилом (3 х 30мл), этиловым спиртом (3 X 30 мл), водой (3 X 30 мл), сушат при ЮОС 2 ч. Содержание азота в полученном сорбенте по элементному анализу составляет 1,4%, что соответствует 1,0 мг-экв/г. Полученный сорбент испытывали на жидкостном хроматографе высокого давления модели 332 фирмы Альтекс (США). В качестве элюита использовали 0,1 М KHjPO, рН 6,5; 30% MeCN, скорость потока 0,5 мл/мин. Использовали сорбенты с размером частиц 10 мкм, колонки 3,2 х 250 мм. Селективность сорбента определяют по известной формуле tx 3 to , коэффициент селективности; олигодезоксинуклеотид; d (CAAGCCTCCA); d (CTCTTACCCAA); d (AAAAACGCTTACAA); d (GAAAGGTGAATAA); время удерживания декадезоксинуклеотида;время удерживания х-го олигодезоксинуклеотида; время выхода неудерживаемого на колонке вещества. Коэффициенты селективности предлагаемого, известного и фирменного сорбента Partisil SAX приведены в табл.1, Partisil SAX - сорбент фирмы Whatman (США), представляющий собой сильный анионообменник, наиболее часто используемый для выделения олигонуклеотидов. Коэффициент разрешающей способное ти сорбента вычисляют по формуле R V. 2 , 1 .W W где R,j коэффициент разрешающей способности; Ц - время удерживания у-го олигодезоксннуклеотида;t - время удерживания декадезок синуклеотида;ными, w - ширина пика декадезоксинук- ния и леотида;дов. видно, сто самая высокая степень разделения олигонуклеотидов достигается на предложенном сорбенте, что делает возможным полное разделение всех четырех олигонуклеотидов в отличие от известных сорбентов. Таким образом, предложенный способ получения сорбента позволяет повысить селективность и раэт ешающую способность сорбента по сравнение с известчто повышает качество разделеанализа смесей олигонуклеоти

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, включаю ций обработку кремнезема подиэтиленимином и раствором эпоксидной смолы или дибромэтана в диоксане, отличающийся тем, что, с целью повьшения селективности и разрешающей способности сорбента дополнительно осуществляют обработку йодистым метилом в ацетонитриле. (Л