Питательная среда для выращивания @ @ @ -38-продуцента ЭЗКО- @ - @ -ацетилглюкозаминидазы Советский патент 1985 года по МПК C12N1/20 C12N9/24 C12R1/25 

СП

со со СП Изобретение относится к микробиологичес кой промышленности, в частности к получению питательных сред для выращивания продуцентов ЭКЗО- -N-ацетилглюкозаминидазы. Целью изобретения является повышение ЭКЗО- р N-ацетилглюкозаминййазной активнос ти и увеличение выхода готового продукта. Для приготовления питательной среды в качестве источника глюкоф используют крахмал, который осахаривйот при помощи бактериальной л -амилазы до образования эритродекстранов (красное окрашение с йодом). После этого доводят рН до 4,7 с помощью ортофосфорной кислот, пощшмаю температуру до 60 С и добавляют глюкоами зу из расчета 4 ед. активности на 1 г крах мала. Осахарение проводят 6 ч. В конечном итоге образуется около 0,92 г глюкозы из 1 г сухих веществ суспензии крахмала. Другие компоненты питательной среды растворяют в воде,. объединяют с осахаренны крахмалом, общий объем доводят до 1000 м Устанавливают рН 6,5 с помощью 20%-ной NaOH. Среду разливают по 100 мл в колбы емкостью 750 мл и стерилизуют 30 М1ш при . Пример 1. Выращивание продуцент ЭКЗО-р -N-ацетилглюкозаминидазы в колбах. Для выращивания Bacillussubtil is G-38 готовят питательную среду следующего соста Осахарённый крахмал70,0 Гидролизат дрожжей20,0 Натрий фосфорнокислый14,0 Калий фосфорнокислый однозамещенный2,7 Аммо1шй хлористый3,5 Магний сернокислый0,062 Марганец сернокислый0,008 Тиамин пирофосфат0,05 Вода До 1 л Питательную среду разливают по 100 мл в колбы емкостью по 750 мл и стерилизуют при 30 мин. Питательную среду с рН 6,5 засевают Bacillus Subtil is G-38, выращенным на ломтиках картофеля. Выращивание продуцента проводят на качалках (180 качаний/мин) при 37 °С 8-12 ч. На 8-12 часу роста продуцента в культуральной жидкости определяют ЭКЗО- - N- ацетилглюкозаминидазную активность, которая составляет 27 мед/мл. Активность определяют калориметрическим методом, по интенсивности окраски образовавшегося п-нитрофенила при знзиматическом .расщепленщ синтетического субстрата п-нитрофенил- -Ы-ацетилглюкозамиршд. Пример 2. Выращивание Bacillus subtil is G-38 проводят аналогично примеру 1, но на среде следующего состава, г/л: Осахарённый крахмал80,0 Гидролизат дрожжей25,0 Натрий фосфорнокислый16,0. Калий фосфорнокислый однозамещенный2,9 Аммоний хлористый 3,7 Магний сернокислый 0,0065 Марганец сернокислый0,009 Тиамин пирофосфат 0,07 Вода До 1 л ЭКЗО-р - N-ацетилглюкозаминидазная активнОч;ть составляет 27 мед/мл. Пример 3. Выращивание Bacillus subtil is G-38 проводят в бродильных установках типа Биолофит, которые по своим технологическим параметрам и условиям биосинтеза соответствуют производственным ферментам. Среда аналогична примеру 1, которую стерилизуют при ИбС 30 мин, Затем питательную среду с рН 6,5-6,7 охлаждают .до 37с и засевают продуцентом. Выращивание проводят при 37 С, аэрации 4-5 л, размешивании 300-400 об/мин. Максимальную активность определяют на 8-12 часу роста прод)щента, которая составляет 27. 27 мед /мл.

ПИТАТ ЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ BAblLLUS SUBTILIS G-38 ПЮДУЦЕНТА ЭКЗО- N-АЦЕТИЛГЛЮКОЗАМИНИДАЗЫ, включающая источник углерода, источник азота и минеральные соли в виде магния сернокислого и марганца сернокислого и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения ЭКЗО- 0-Ы-ацетилглюкозаминидазной активности и увеличения выхода готового продукта, она в качестве источника углерода содержит осахаренный крахмал и гидролизат дрожжей, источника aaota - хлористый аммоний, дополнительно вводят тиамин пирофосфат и минеральные , соли в виде натрия фосфорнокислого, калия фосфорнокислого однозамещенного при следующем соотношении компонентов, г/л: Осахаренный крахмал70,0-80,0 Гидролизат дрожжей20,0-25,0 Натрий фосфорнокислый14,0-16,0 Калий фосфорнокислый однозамещенный однозамещенный2,7-2,9 Хлористый аммоний3,5-3,7 сл Магний сернокислый0,062-0,065 Марганец сернокислый0,008-0,009 Тиамин пирофосфат0,05-0, ВодаДо 1 л