Способ получения (3,7-диметил-окта-2,6-диен-1,4-диол)-1-0- @ - @ -глюкопиранозида Советский патент 1985 года по МПК C07H15/08 A61K31/7032 A61P31/00 

11162813

И;зоОретсине относится к хг-гмии.i;

а конкрет1;с, к способам получения HOBiiix пряродньп--: био.чогиче ски а ггивкых вещестг i: rjiyiriib монотерпеиов.

I CH,01i

/L

HO H

5.--кЛ/оHO -K OH

H

li оСладашщеIo беркупосг ггичоскоЛ ак ТИРНОСТЫО . Пэвесте-ч способ получения MoioTepneHOBdix гликозилов, который o iключаьтся в том, чти водный эксграк листьея Betula alba извлекаю- - и-бут колом или мстано.лом, по.г че1{нь1Й экстракт xpoNtaTorpailnipyjoT ii;i сипгаса геле смесью хлорофо м - мечанол л да, о-: - 1ца1 Т фильтро.чшп-нм через cn-a алюмир;ия ti повторно хроматографг рую на силир;агеле смесью хлороформ | 1 метанол - вода LJJ,, Известмо природное соединегио группь) MOJiOTeprieHOB - лииалршацетат который и ко If цен т рад ми 500 мкг/мг и опытах in vitro обладает туберкулостатической актииностью 1,2,. Целью изобретения Является разработка способа получения нового природного соединения rpynnji :-сио терпенои, обладающего болсч- ВЬК:ОР:ОЙ противотуберку:;езной актионоетьк по сразненио г, 1- звестньг -1;1 соедкменн ЛМН этой ГрЗГПГ . Постаклеипая ь.ель дост51гаетг,л тем. что согласно способу из мельченные корневшца родио.т,г роэо1;ой (Rhodiola rosea L,, сек толсгянковых -CrassU 1 асеае)) экстрагируют низкомолер;улярным спиртоьг (С,. С, ) в соотношении сырье - экстрагент 1 : (5-6) сначала npf комнать;ой темпе ратуре , а затем при кипячении с последующим выделением целевого продукта упариванием растворителя в ва кууме и хроматографированием экстра тивных веществ на полиа гнде в соотношении 1:1,5 с использованием хлороформа в качестве элюента и с по след; тощей очисткой целевого продукт двухкратным хроматографированием на силикагеле с использованием в ка честве элюента смеси хлороформа с метанолом в соотнопшнии 93:7,

-;nim)

Cii.

СНз C--CO-C:|-L-CH-C €Н,

Pii Испол}.3( ииукомолех ля;|1члх ,pTOi; (м гга11ола КЧ) и зтзкол;: 96%) li Ka4ecTt e :.МчСграг;.м. лозьоляс.: с о;;ной гморошл отле.питг ue:: 3of: продукт от iio;iop.:iCTFOpHMJ;ix пp ; :t;ceй, которьх при} од;п- к ухуд1ген - 1о качества де:кп -го Г родукта. С пруго - CTopofib Нгмзысокие температурь: мспол;: зовя-глых спирто облегчают контроль за )ературой :,кстрак т:ти5 как при более высоки : Т мпературах мо1;отерпеновые г л н к о 3 и ф- г. од S е р г а;о т с}; Г а э л - же к ич: п Полинерняации. ГфОБедь ие дя -х сратиой экстра: -ции пРг: комна гной гемдерятуре позво.ляст изБ.течь 80% голевогч: (оед-П1е я, ; C:Taij iieeся к :: ачест..- и:и ;1скяхТ и;пя1:;;;м спиртом. образом, пронедениг экстракции сначала np-i кс мнлтчой мпяратуро., а затем п;;и :ид и-ям1ии и cnipTO позволяет из-г,дечь целевой гермостаб лыгь.й пролук с мини1 ал;;Ным термнче CKtnvc йоэ/:;ейетянем на i.ero, Г(рсведен е - -рехкрятргой экстракции только при ог натной температуре приводит к екоторому снижению выхот а целевого продукта -до 1,1% (пример 9) . Дли-елт-.ностъ стадии зкстгак11ИИ при 37ОМ (3 раза по 36 ч.) увеличи ае ся с /3 до t08 ч. Прозедение трехкратной экстраг:-:мч по 1 часу в условиях кипящего метг-гола пр ;воднт к снижении ц.елелого прод;я та (до ), кото-рое обусловленс тем. что в условиях жесткого температурного режима могут подвергаться деструкции как сам целевой продукт, так и некоторые балласткь е вещества, что в свою очередь затрудняет высвобождение роз1-фидина из растительной клетки. Для исчерпывающей экстракции растительного сырья низкомолекулярными спиртами (C-j-Cj) необходимо исполь3зоиать соотношение сырье - экстрагент 1:5 - 1:6. Уменьшение этого соотношения (1:4) не дает смачшзаемости сглрья и исчерпывазощая экстракция в этих условиях невозможна. Увеличение соот1 ошен 1я сырье - экстрагент до 1:7 не приводит к повышению выхода целевого продукта и поэтому оно нецелесообразно, так как при этом происходит неоправданное увеличение расхода растворителя и тзеличение времени упаривания экстрг-.ктов, Соот1 О1 1ение упаренного экстракта и полиамида 1:1,5, при котором получен целевой продукт с выходом 1,2%, является опти1-(альньм. При увеличении этого соотношения ДО 1 :2 также получен чистг,1Й целевой продукт с выходом 1,2% (npt-Eviep 11), однако адесь неоправданно увеличивается расход полиамида и поэтому использование этого соотнотепия нецеле сообразно. При уменьшении этого соотношения до 1:1 чистый целевой продукт пол чить не удается. Хроматографичеекая очистка экстра та л а полиам5-1де при элюированип хлороформом позволяет избирательно де сорби ровать Г1елевоГг продукт и практически полностью освободиться на этой стадии от дубильных веществ, сахароз, флавоноидных глйкозидов, салидрозида частично от флавоноидпьгх агликонов, тирозола, .глйкозидов кор5гчного спирта. Использование элюентной смеси хлороформ - метанол в соотношении 93:7 при Хроматографической очистке на силикагеле позволяет получить чистый целевой продукт с выходом В случае использования элюентной смеси клсроформ - метанол в соотноше нии 94:6 целевой продукт не десорбируется с силикагеля и, следовательно в этмх УСЛО73ИЯХ получение розирид1-1на невозможно. При использовании элюентной смеси хлороформ - метанол; в соотношении 92:8 нарушает ся избирательная десорбция целевого продукта, что г рт-шодит к загрязнению его розарином - гликозидом коричного спирта. Приведенные параметры процесса позтюляют получать розиридин с выходом 0,9-1,2% от веса сырья. И р и м е р 1. 0.5 кг измельченны ноздуишо-сухих корневша родиолы розо 134 р.;ч1 (Зостсчно-Казахстанская область, Катон-Карагайск о район, р. Арчитш ка, субальпшюкгш пояс) исчерпыиаюше зкстрагиругат метанолом в соотношении 1:6 (проводят две экстракции мацерацг;ей при 20 в течение 3 дней, третью экстракцию ведут при кипении метанола в течение 1 ч). Объединенные метанольные экстракты упар1{вают в вакууме при (в конце процесса упариваьия температуру поднимают до 60 С для удаления воды, извлеченной из растительного сырья). Получают сиропообразный остаток (вес 220 г), которы.й в подогретом виде разбавляют ме анолом до объема 250 мл, добав:1яют в него 25 г полиамида для уменьгаекил вязкости экстракта и полученную однорсдн тс суспензию хроматографт-плуют на колонке с 300 г полиам1ща ( 10 см, высота 20 см, заполнени.с колонки полиамидом в виде суспег ззш в хлороформе). Целевой продукт-розиридин элюируют 3 л хлороформа, при этом отбрасывают первые 200 мл элюатов, остальные элюаты объединяют и упаривают. Иолучен.мыи продукт содержит следующие (тех в системе хлороформ метанол - вода 26:14:3, Силуфол УФ 254): /5-ситостерин (0„91), коричный спирт (0,87), трицин (0,82), розир1эдол (0,76), тирсзол (0,70), даукостерин (0,60), розик (0,54), розарии (0,41), розавин (0,34). Остаток после упаривания (70 г) хроматографируют на колонке, заполненной силикагелем (диаметр 6 см, высота 20 см, вес силикагеля 400 г). Колонку промывают 1 л хлороформа п 3 л смеси хлороформ - метанол 95:5. Целевой продукт вы foшaют 3 л смеси хлороформ - метанол 93:7 (остаток поеле отгонки растворителей 15 г). Ход хроматографирования на силикагеле (1 очистка): 1 фракщ-ш 1 л (хлороформные элюаты); 2-7 фракции по 0,5 (хлороформ - метанол 95:5); 8-13 фракции по 0,1 л (хлороформ метанол 93:7); 15-23 фракции по 0,2л (хлороформ - метанол 93:7); 24-28 фракции по 0,1 л (хлороформ метанол 93:7). Целевой продукт вымывается в 1225 фра.кции, все они объединяются упариваются, Полученньсй на этой ;к:1,Ч)ииа. С-чО:ч;лтольную очистку провялят ;.а CHjniivarone тех же условлях ГзОО г силлклгеля, см, хло|п):Ьо:)ма 1 Л, 5Х-ного метано;;а 2 л, 7: -но;о :етамола 2 л) „ Выход ро:лП) 6,0 г или 1 , Z от зеса иизлу;11-;о сухого сырья. КМ грсль за ходом элюирсаали ; (X:yi;u: с Л .алкт методом ТСХ -га плас - ;;xa;-L ,;y:|)Oj; УФ 254, в системе ;..lOpoфop - метанол - BOj(a 26:14:3, xpocNKTpc хроматеграмкЦ) в УФ-Г;Ч;л (л 234 им) коричный спирт л глглчозидь; (розин, розавил, гЬлуоресцируют в vivis пл Г1.Л5 (;)ЛплО оиО О цвета. ojicajoc соед}шение проявляется лрл iia Г() с С Л;ртоиым |)ао1лк)ром ЛйСЕд в /лше голубого с 1ь:,л ГЧИ11ой И . ,. Примеси ф.гаионоидон в этих условиях И1)оянля отся н виде желтых лятея, Зачоы хроматограмму проявляю лиазотлроналло 1 сульфаниловой Л(олол ;л ) и об} аружипают Bi)3MO/rHb:tлрл:чоси ,льлых ссМдиленИА, ь г:аст 1л.пм1; глрозола и слли;1роз 1ля5 и liHЛ - оралжелоЛ-: лятел. 1осл(,лчу иЦь иро л1Л;е;Л1а 2()л-лым раствором серлол лрл :Л1Лревалли (1 |0(;) лезно.ллог в :1;-л л1Ь возможные приМС:л с.|Х:люл л лРОЛУктоБ .1еризллии. . I . лоз:лл1ллл ;л5едста.лялт сооой Оеецветл::.л сиролоосразлое яепюство с ллллп лол удельного пра1Гелия 32j7)c 1,1; ацетол), :;апбо.лее obiCTpbiNi, ,:1Остул1П);л и лулствительлым методом оле}ПчЛ калеслла лелезого г родукта -ся ьл/то,л тех ла лласти};ках Силу.Ьол УФ 25V в системе хлорофор:ч - мета1и).л - во/Л 26:14:3. После пpoc: 0rpл хроматограмм:, в УФ-свете и лос;1еду:п- 1,е го лроявлелия ее хлористым адюмилием, лек и 20%-нол серной кислотой ла хроматограмме должно бьпл только одно иятно с величиной R около 0,50 го;г/бая окраска которого иостепенно темнеет, Пример 2. 0,5 кг измельченного растительного сырья (пример 1) исчерпывающе экстрагируют этиловым спиртом в соот {ошении 1:6. Объединел ые экстракты упаривают под ваку тчом, горячи сиропообразный остаток 1 3о (190 Г ) 5язоан.1Я:от мета}1олом до 0(31,ома 250 мл Лп.ЬИРИ;;;йЯ ОПрс:(1ка :.;;;or Гlita п})1г:.0;)- 1, ne;ii иого ч. а , чО состаалкег 0. от пота гитз.ау;;|; О-сухого сьа-т я. И р и м а у 3, О, хг лзме:;,:, iiO3;i ;ii-;c-сухлт :oj);;tMi)iiu ро;а:ол;; розои;.-й ;м(:тра гирукг; НОл-лмм ;ди.нолоГ а c:o(.)nic; ;a li лл 1:6 аналоги - но лри:.н,ру I. ;аль 1 ;Ллгу 0 оОраалчку аналглично лрл:-:;:;;у глт co;:;т}.;л;тucllл : обаом }КоОхсл;с. рлс иорл длял- л ь 1Л;1а1; стхо алсарОси i . :i „ По: -1клп ь:л лро;.о.;лг иг.Л:ст корил11(;Л1уг, о ч;;а-аку, сслор/к лсолук1Ъ1 лол1; xMiЧЛ1;, :;: УЛЛ.Л--ЛЛ, il р л i с л кл плрьл :з ,;с:-ра ().- этанолом в ссо но:л:;Л;л 1:6 а );.) 1. Лальу:яу; в. Л атлх с,ло)лях Л1кгг;,л ле сной Hpojiy лолули;л- и-., улаотся. л р ч (; о р 5, Сл лл ;Лр;;Я э-стра лллло; QO/-..i м;,; галс;;им (л с:опт: .::D,:мил ;6} ;:ллло1лчвл л;л-;-лф i ., Д,:;:;1:ол;; ;1о oopaoo;i:y алагю ;11л и: прглллрлл I л 3. Лолуленяьй Л1о,дукт с;ч;v;c; -;oi«niiuxj ю О1 раску. со,:ллл:;лл , ло-ЛИлеллзалил л лрилесл ;;ахазо;. : э 1Их С1ЮВ1Гях лиет-ьи клл1ли)л про;;уь; ло,лу--Л; ь ;п-; л ается, Н тл():. i лредсаллелы лалкь;е сл1ек :1ол П-Яг-Л ;)оз р ;лила и его )МОЛ Знодлых (.заачелля d л м.д., . л Лц, лл.Лхлллл ета}:ларт ТЖЛ, i-О МП;), з р л :л е р 6. 0,2 xi измелвчелньн-; ;л-заугило-е )ллх .Л)рлев1ЕД родиолк 1-о-.ч-.-л;: ;:.л: 1аалл,;уг; мегалолом в :о.хглолелли 1 ; з а:гл:л}гллно , лилл1е:11гую .чрлУ лгку iipO3o;jj;,T так;ле ала.лолллло лрл-.иуп I, уменьшив cooiвз чтвор ас ле(5бход}с-а)х раство ;ителе;1 и количество адсорбентов. Выход ii.:Xieiioro продукта 2,2 г, что составляет 1,1% от веса воздуг;ло-сухого сырля. П Р i л е Р / 0,2 кг сырья экстрагируюг метано.лом в соопюшеиии 1:/ аналогично примеру 1. Дальнейното обработку проьолят аналогично лршчерам 1 и 6, Выход целеЕ01о продукта 2,,4 г, что составляет 1,2% от веса воздушно-сухого сырья, II р и м е р 8. 0,2 кг сырья экст гируют метанолом в соотношении 1:4 аналогично примеру I . Дальнейаппо об ботку ведут аналогично приг-шрам 1 и 6, Выход целевого продукта 1,6 г, что составляет 0,8% от веса воздлтпно-сухого сырья. Пример 9. 0,2 кг сырья экстр гируют метанолом з соотношении 1;6 три раза по 36 ч при комнатной температуре. Дальнейшую обработку проводят аналогично npi-a-iepaM 1 г; 6, Выход целевого продукта 2,2 г, что составляет 1,1% от веса возд ппносухого сырья. Пример 10. 0,2 кг сьфья экстрагируют п условиях кипягцего метанола в соотношении 1:5 три раза по 1 ч. Дальнейшую обработку проводят аналогично примера.- 1 и 6, Выход целевого продукта 2,0 г. что составляет 1,0% от веса воздушно-сухого сырья, П р и м е р 11. О, кг сырья экстрагируют аналогично примеру 1. Упаренный метанольный экстракт (40 г) хроматографируют на колонке полиамида (80 г ) аналогично примеру 1, элюируя целевой продукт 1 л хлороформа, Дальнейш тз обработку проводят аналогично примеру 1, уменьшив соответственно количество силикагеля и объем элюентной смеси. Выход целевого продукта 1,2 г, что составляет 1,2% от веса воздушно-сухого СЬфЬЯ. П р и м е р 12. 0,1 кг измельчен ных воздуип-ю-сухих корневищ родиолы розовой экстрагируют аналогично при паренный лметанольныи экстракт (40 г) хрог.(атографир ют на колонке полиамида (40 г) аналогично примеру 1 , э.поируя целе;зой продукт 0,6 л хлороформа. Дальнейшую обрабо ку проводят аналогично примерам 1 и 1 1 , По.пуче1г в этих условиях сильн загрязненной продукт. Приме р 13, 0,1 кг корневищ обрабатывают до стадии хроматографи ческой очистки на силикагеле аналогично примеру 1. Полученньй продукт хроматографируют на силикагеле при элюировании розиридина смесью хлоро форм - Ь етанол 94:6. В этих условия целевой продукт не десорбируется и получить его невозможно. П р им с р 14, Oj1 кг корнев йц обра5а1ъ:вают до стад1Л1 хроматографичЕской очистки на снликагеле аналогично npJiMepy 1 , Полученный при 5 О--1 иелеиой продукт хроматографифуют на силикагеле при элюировактп розир;щина смесью хлорофор - метанол 92:8, Полученный целезой продукт с выходом 1,25% содер;кит npiwecb розарина. Исследование туберкулостатической активности проведено в опытах in vitro reтoдoм cepiniHHX разведений ::ре 1арата D К11дкой питательной среде Сетона в отношеки - Mycobacterium tuberculosis, гатам ; Н-37 RvB. 1сследован1ш показали, что розир-1Л1}; в данн-х условиях ингиб1;ро: ал пост Mycobacteriuni tuberculo- ip, П-37 RvB концентрации 62„5 гк/мл (табл, 3). По.тгуч.-мгные данные свидетельствуют о том, что туберкулостатический sippeKT розир;1л -на почти в 10 раз прев1;;11ает соот етствук щую актив ость линалилацетата, относяпегося к соедмнеTiDHN; группы монотерпено токс;г-:1 ость розирг дина нсследуют на 36 белых aJПlIax. В опытах исиользуют беспородные .иши, массой 18-20 г. Препарат :31.;одят однократно Бнутрибрюгпинмо ПС Os5 мл в доза.х от 1300 50 мг/кг 3 виде водных растворов, Е разул;.Тате исследования установлено, чтс- при внсдении розидина Дёигсе в бо;:ьи;1Гл дозах 1 300 :внутри{брюшиннони одно животное ке погибло. Рознртщин по показателям острой токсичности от)1осится к малотоксичныг.; соеднлекиям. Выход и чистота розир1-ш,1тна в зазкси: ;ости от значений параметров процесса представлены.в табл. 2, Данкь е табл. 3 показыБ:г1оТ; что наиболее близкое по Х 1мическому строенюо вещество;. оти-игчаюцееся от предлагаемого соединен15я ,1еньшим числом метилып-;х групп, И-1ЫМ расположение -) двойных связей и гидрокс1шьных групп, обладает друг№; вгдом биологл-гче ской активности - мочегонной, а вещество, близкое по акт1таности„ - л11 -;алилацетат, отл -5чается по химаческой структуре отсутствием углаводкого остатка, наличием только одной гидре КС группы, этерикдз.рованкой уксусной кислотой, и ииьпм. распс ло;5ен1-;ем двоЙ1{ых связей, Т a б л и ц а 1

4,0-4,4

4,3-3,9 м, 4Н м, 4Н

(2Н-1, 2Н-6 )

3,34 м, 1Н (Н-5 )

а s

4) к

о а о & я:

к Ч

р

А о.

о t; t.

и

о, ia w о - t, о

о

-

у

Ef mОх;

о 0) .р,Н

13, Я

СПОСОБ ПОЛЗ ЧЕИИЯ

о d

.-S Ч

5

г d

о

Н

« I I к

g5 5 & о

5

к,«о.

ос;иоа

Ьв)ои

ФННкX

XЛ)чPI

сXXкж

исоип

иоа«I

I

нкX

Её

п г.

|2

и

E

о

f о;

j

с

о I

о я я

1

п и л&

Оога

41 П5 h . -N

рUь

О, О Ч& К

О РОК

U.U

з: О UJ

н g о f-H

Uи,

h о

Qj S; н

aijiсг

(И о

э-s;о

(Ч .я п;

п

Jщо.

к о

й3с о о. Ч)

Ч О2

К Р, S о

к S

и о

Xо.

S

S ГГ ГС

а к с о

I

си ч I

ФОМ

я о.

е.

с;Я)

о о(-.

X с.X о

m q

3 О,

К

с V

г-1 Z

IО

gSг.

SS

fljоfJ

S(Uf2: T QJ

nj0S

в«S

IоS

f-Sо r

о(-©

ОяО ГО(UО С

S

tcI

uS

г§

Sи

leni

ex1C

gS

rtb

Zt; V

SX t, p- 0) ««: О «

OO ГЧ

v