рагидрофуран (ТГФ), при (-5)-100°С, как правило, при 5-30 С, например при комнатной температуре. Взаимодействие клавулановой кислоты с диазосоединением представляет собой мягкий способ получения алкиловых, аралкиловых и аналогичны эфиров. Диазбтирование можно проводить в обычных условиях, например |при неэкстремальной температуре и в обычном раствори;геле. Такие реакции обычно протекают при (-5)-100С, как правило, при 5-3оС, например при комнатной темп ратуре. Подходящие растворители для этой реакции включают низшие алканолы, такие, как метанол и этанол, а также такие растворители, как ТГФ диоксан. Этанол наиболее пригоден для проведения этой реакции. Реакция клавулановой кислоты со спиртом в присутствии агента, промотирующего конденсацию, протекает, как правило, в инертном органическом растворителе с относительно выс коД диэлектрической постоянной, таком как ацетонитрил. Реакцию обычно проводят при комнатной температуре или при более низкой, например при (-10)-22с, как правило, при (-5)-18С, например реакцию начинают при О,с и затем постепенно нагре вают до 15°С. Агент, промотирующий конденсацию используется обычно как агент, способствующий удалению воды из реакционной смеси. Пригодные для этих целей агенты включают карбодиимиды, карбодиимидазолы или эквивалентные реагенты. ДициклогексилкарбодиимиД наиболее пригоден. Эту реакцию обыч но проводят в присутствии йначитель ного избытка спирта. Пример 1. Получение метилклавуланата. 19.,8 мг клавуланата натрия растворяют в 0,75 мл сухого ДМФА и обрабатывают 0,25 мл йодистого метила Вьщерживают 1,5 -ч при комнатной тем пературе в отсутствие влаги, раство рители удаляют в вакууме, остаток хроматографируют на силикагеле (Kie EgeE 60 F 254, Merck), элюируя этил ацетатом, и получают бесЬветное мас ло, RJ 0,38; красное пятно при опры скивании 2,3,5-трифенилтетразолийхл ридом (ТТХ). Найдено, %: С 50,49; Н 5,43; N 6,29, CgHii NOj. Вычислено, %: С 50,70; Н 5,20; N 6,57. УФ-спектр (метанол): абсорбции не наблюдается 215 нм. ИК-спектр (пленка), 3300.5600 (широкая полоса), 1800, 1750, 1695. Приблизительный первый порядок ЯМР-спектра (CDCe.) : 2,49 (широкая S, I, обмен с DjO); 3,05 (d, I, J 17,5 Гц); 3,Гз4 (dd, I, J 17,5 Гц, Jg 2,5 Гц); 3,84 (s, 3); 4,24 (d, 2, J 7 Гц); 4,93 (dt, I, J 7 Гц, Jj- 1,5 Гц); 5,07 (d, I, J 1,5 Гц); 5,72 (d, I, J 2,5 Гц), Молекулярный вес (масс-спектр) 213, 0638 (вычислено 213, 0537) , При тонкослойной хроматографии (тех) обнаружена только одна . В системе бутанол-зтанол-вода (4:1:5 по объему) R г. 0,75, в системе изопропанол-вода (7:3 по объему) Rj. 0,95, в системе этилацетат-этанол (8:2 по бъему) Нг 0,87, Эти зоны подвергат биоавтографии с использованием K&ibsieBEa aerogenes при добавлении бензилпенициллина (синергеТическая си стема) , Пример 2, Получение п-нитробензилклавуланата. Обработка клавуланата натрия п-нитробензилбромидом в сухом даФА дает после хроматографии бесцветное масло, которое кристаллизуется из смеси хлороформ-эфир в виде белых пушистых игл, т.пл, 111- 112с, после перекристаллизации т,пл. 117, 5-llB c, Пример 3. Получение бензилклавуланата, Загрязненную 3-( (б-гидроксиэтилидин) -7 -оксо-4.-окса-1 -азабицикло- 3.2.0 -гептан-2-карбоновую кислоту (клавуланат натрия, грубо 55 мг чистого вещества) в -0,64 г сухого ДМФА обрабатывают 0,18 мл бинзилбромида. Раствор выдерживают 3 ч при 1718°С в отсутствие влаги, хроматографируют на силикагеле, элюируя этилацетатом, и получают 63 мг практически чистого бензилового эфира. 3-( р-гидроксиэтилидин)-7-ОКСО-4-окса-1-азабицикло- 3,2.0 -гептан-2-карбоновой кислоты в виде бесцветного масла, ИК-спектр (пленка), см : 1800, 1745, 1695. ЯМР-спектр (СПСб): 2,25 (s,е, способна обмениваться с DgO) ; 3,05 (d, е, J 17 ГЦ); 3,51 (dd, I, J 17 Гц, J 2,5 Гц); 4,24 (d, 2, J 7,5 Гц); 4,92 (dt, I, J 7,5 Гц, Jj 1,5 Гц); 5,15 (d, I, J 1,5 Гц); 5,24 (s, 2); 5,71 (d, I, J 2,5 Гц); 7,45 (S, 5) , Пример 4. Получение бензилклавуланата из сырых экстрактов фильтратов культуры S, cEavuCigerus. 20 л фильтрата культуры выпаривают в вакууме в пленочном выпарном аппарате до объема 5 л и сушат на холоду с использован1 ем полочной сушилки Edwards EF6 (фирмы Edwards High vacuum Ltd). В 300 г полученного твердого вещества содержится 3 г клавуланата натрия (определено пробой на ингибирование энзима). Твердое вещество суспендируют в 900 мл сухого ДМФА и добавляют 150 мл бенэилбромида, Смесь перемеш вают 2 ч при комнатной температуре, разбавляют 1 л этилацетата. Фильтруют и фильтрат упаривают до минимально возможного объема. Маслянистый остаток экстрагируют 1 л этилацетата, экстракт фильтруют, фильтра упаривают и маслянистый остаток про пускают через колонку (7,5 х 35 см) |наполненную силикагелем (Biogee BiosiE А, 100 меш) в циклогекс ане. Элюируют циклогексаном для удаления бензилбромида и затем этилацетатом, собирая фракции по 20 мл. Присутствие бензилклавуланата определяют пу тем нанесения пробы на пластины из силикагеля (60 F 254, Merck) со сте лянной подложкой и опрыскивают ТТХ. Фракции, дающие интенсивные красные пятна, дополнительно иссЛедуют мето дом тех на силикагеле в системе хло роформ-зтилацетат (8:2) и проявленные пластины опрыскивают ТТХ. Для бензилклавуланата R 0,31 при . Фракции, содержащие целевой эфир объединяют и упаривают до объема 15 мл, хроматографируют на колонке (3,7 X 40 см), наполненной силикагелем (Н, тип 60, Merck), элюируя смесью хлороформ - этилацетат (8:2). Фракции по 15 мл собирают и испытывают на присутствие бензилклавуланата, как указано вьзшё. Фракции, содержащие целевой эфир упаривают до объема 8 мл и хроматографируют на колонке (2,5 х 40 см), наполненной силикагелем (н, тип 60, Merck) , элюиру i смесью этилацетат - циклогексан (8:2). Собранные фракции упаривают в вакууме и получают 160 м чистого масла. Пример 5. Получение бензилклавуланата. 3,3 кг высушенного распылением твердого вещества, содержаидего 69,4 клавулановой кислоты, суспендируют в 5,5 л ДМФА и добавляют 500 мл бензилбромида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч добавляют 12 л этилацетата, фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме, маслянистый остаток (212 г) пропускают через колонку (10 х. 32,5 см), наполненную силикагелем (Horkins and Wieeiams MFS) в циклогексане. Элюируют 12 л циклогексана для удаления избытка бензллбромида, затем этилацетатом и собирают фракции по 500 мл, в которых определяют присутствие бензилклавуланата, как в примере 4. С фракциями, дающими интенсивные красные пятна, поступают как в примере 4. Фракции 8-13, содержащие основное, количество целевого эфира, объединяют, упаривают в , остающееся масло (79,3 г) хроматографируют на колонке (10 х X 45 см), наполненной силикагелем 2 (Н, ТИП 60, Merck) элюируя смесью хлороформ - этилацетат (8:2). Фракции собирают, как указано выше, и получают 45,9 г масла чистотой 62% (по даннь м ЯМР-спектроскопии) . Полученное масло хроматографируют на колонке (6,9 х 45 см), наполненной сефадексом (Sephadex LH 20) в смеси циклогексан - хлороформ (Isl). Фракции упаривают и получают 27,6 г бесцветного масла чистотой 95% (по, данным ФМР-спектроскопии), Пример 6. Получение бензилклавуланата. 150 л фильтрата культур-л (рН 7,0), содержащего 16,2 г клавуланата натрия (определено пробой на ингибирование энзима), перемешивают с 5 кг анионообменной смолы (AmberCyst А 26 в хлоридной форме) в течение 1 ч при комнатной температура, фильтруют, фильтрат анализируют и устанавливают, что удале15о 6,4 г клавулановой кислоты. Смолу промывают 20 л деисЛизированной воды, затем 20 л ацетона и 10 л даФА, фильтруюхт суспендируют смолу в 2,3 л ДМФА (0,2 MNa3). К этой смеси добавляют 200 мл бензилбромида и тщательно перемешивают. Вьщерживгаот 16 ч при комнатной температуре, добавляют этилацетат (2 л), смолу отфильтровывают, промывают этилацетатом, объединяют промывки с фильтратом, упаривают до небольшого объема и хроматографируют на колонке (7,5 X 45 см) с силикагелем (Н, тип 60, Merck), элюируя смесью этилацатат - циклогексан (8j2). Фракции, содержащие бензилклавуланат (присутствие эфира определяют, как в примере 4) , упаривают до объема 20 мл и хроматографируют на колонке (3,7 х 45 см), наполненной силикагелем (Н, тип 60, Merck), элюируя смесью хлороформ - этилацетат (8:2). Отобранные фракции объединяют и выпаривают, получая 440 мг бесцветного масла чистотой 90% (по-данным ЯМРспектроскопии) . П р и м е р 7. Получение бензил-клавуланата из сырых экстрактов фильтрата культуры S. CCavuEigerus. Аликвотную часть водного обратного экстракта бутанольного экстракта фильтрата культуры сушат на холоду (см. пример 4). Полученное твердое вещество (24 г, из них 0,96 г клавуланата натрия, что установлено пробой на ингибирование энзима), суспендируют в 75 мл бензилбромида, перемешивают 2 ч при комнатной температуре, разбавляют 500 ът этилацетата и фильтруют. Фильтрат упаривают до получения маслянистого остатка в вакууме на роторном испарителе. Остаток пропускают Через колонку (5 х 35 см), наполненную силикагелем (Biogeg Bio.sie А. 100 меш) в циклогексане. Удаляют бензилбромид, затем элюир тот этилацетатом фракции 10 мл. Фракций содержащие целевой эфир, обрабатывают по методике примера 4 и получают 200 мг чистого продукта. Пример 8 Фталимидометил клавуланат. 1,95 г фталимрщометилхлорида. добавляют при перемешивании к раствору 221 мг клавуланата натрия в 2 мл, сухого ДМФА, выдерживают 4 ч при комнатной температуре. Раствор обрабатьтают этилацетатом, циклогексаном и водой, тщательно встряхивают..Неводный слой отделяют и упаривают в вакууме, остаток кристаллизуют из смеси этилацетат - петролейный эфир (ТоКип. 40-60 С) и получают 130 мг продукта, Топл. . ИК-спектр (хлороформ), см ; 340 (ОН) 1805 ( 15-лактам, ) ; 1785, 1760 и 1735 (фталимидил , сложный эфир ). ЯМР-спектр 1,7 (1Н, S, ОН);. 3,0 (1Н, d, J 17 Гц, ); 3,56 (1 dd, J 17 Гц, .J- 2,5 Гц, 6 () 4,25 (2Н, d, J 7,0 Гц, СНСН5); 4,95 (1Н, dt, J 7,5 Гц, J 1 Гц, СНСН2); 5,11 (1Н, d, J 1 Гц, 5,75 (1Н, d, J 2,5 Гц, ); 5,8 (2Н,з; СН,-фталимидил); 7,75-8,2 . (4Н, га, фталимидил). П р и. м е р 9 , . Бензгидрилклаву ланат. , 1 112 мг дифенилдиазометана в петр лейном эфире (т.кип. 40-бО С) добав . ляют к раствору 138 мг клавулановой кислоты в 4.мл ТГФ. Полученный раст вор перемешибают в течение ночи при комнатной температуре, удаляют раст ворид-ель в вакууме, маслообразный о vTaTOK хроматографируют на силИкагел элюируя смесью этилацетат - гексан. Вьвсод 135 мг. / ЙК-спектр (хлороформ), см : 340 (ОН) : 1805 ( р-лакмат ) 1755 (сложный эфир ) ; .1700 () . ЯМР-спектр (CDCSg); 2,05 (1Н, s, ОН); 3,03 (1Н-, d, J 17 Гц, ) 3,53 {1Н, dd, J 17 Гц, J, 2,5 Гц 6сзС.СН)| 4,22 (2Н, d, J Т Гц, CHCHg); 4,94 (1Н, t, J « 7 Гц, .НС1Г2) ; 5,27 (1Н, s, ) 5,76 llH,d, J 2,5 ГЦ, ) ,- 7,03 (1Н S, СН(СдН.)оЬ 7,46 (10Я, S, арома-б 5гтические протоны;. Пример 10. 2 Амино-2-меток сикарбонилэтилклавуланат. 2 Бензилоксикарбониламино-2-метоксикарбонилэтилклавуланат в ТГФ гидрируют, над 10%-ным палладием на угле (1/3 от веса эфира). Через 1 ч по данным тех при использовании этилацетата образуется целевой продукт .наряду с некоторым количеством исходного эфира. Катализатор отфильтровывают и фильтрат упаривают. Маслообразный остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя смесью этилацетат гексан, Данные ИК- и ЯМР-спектроскопии свидетельствуют о сохранении (В-лактамного кольца и исчезновении бензильной группы. Л р и м е р 11, 2 Бензилокси- карбонилс1Мино-2-метоксикарбонилэтилклавуланат. 500 мг метилового эфира бензилрксикарбонил-Ь-серина и 11,3 мг дициклогексилкарбодиимида добавляют к охлажденному до и перемешиваемому раствору 138 мг клавулановой кислоты в 4 мл ТГФ. Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Затем обрабатывают обнчньм образом и удаляют растворитель в. вакууме, остаток хроматографируют на. силикагеле, элюируя смесью этилацетат - гексан. Получают 103 мг смолообразной массы. ИК-спектр (хлороформ), см.: 3630, 3400 (широкая ОН и NH)., 1805 (fi-лактам ) , 1760 и 1725 () 1700 (). ЯМР-спектр (CDCBj): 2,42 (14, fe,. ОН) ; 3,08 (1Н, d, J 17 Гц, 6 ) ; 3,58 (IH, d, J 17 Гц, J 2;5 Гц, ); 3,88 (3H, S, COgCHa); 3,985,15 (6H, m, :HCH и CO CHgCH) ; (IH, m, ); 5,25 (2H, s, ); 5,73 CIH, d, J - 2,5 Гц); 1 (IH, m, NH); 7,35 (5H, s, apo;G,UI UH, m, матические протоны) П р и м е р 12. 2-(2-Фенилсульфонил)-этилклавуланат. Раствор 199 мг клавулановой кислоты в 8 мл ТГФ охлаждают до и обрабатывают 306 мг дициклогексилкарбамида, .79 мг пиридина и 1,0 г 5 -(фенилсульфонил)-этанола. Перемешиваемому раствору дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают при этой температуре в течение ночи, фильт.руют, фильтрат. упаривают в вакууме, остаток хроматографийу т на силикагеле, элюируя смесью этилацетат - гексан, и получают 155 мг маслообразного продукта. J ИК-спектр (хлороформ), см ; 3400 (широкая, ОН) ; 1800 ( fi-лактам ) ; 1750 (сложный эфир ); 1695 () , 1310 и 1150 (S02). ЯМР-спектр (СОСЕз): 2,18 UH, s, Oil); 3,08 (IH, d, J 17 Гц, ) : 3,52 (IH, dd, J 17 Гц, J 2,5 Гц, б ) ; 3,59 (2H, t, J 6 Гц, CH CH-SO); 4,25 (2H, d, J 7,5 Гц, СНСН„); 4,57 (2Н, t, J 6 Гц, CH2CH,j,S02) ; 4,7-5,01 (2H, m, .CHCH и ) ; 5,7 (IH, -d, J. 2 ,5 Гц, ); 7,5-8,2 (5H, ). Пример 13. 2-Метилтиоэтилклавуланат. Раствор 199 мг клавулановой кислоты в 8 мл ТГФ охлаждают до и обрабатывают 200 мг дициклогексилкарбодиимида и 860 мг ((метилтио)-этанола. Поступают далее, как в при
