Способ выделения триозида @ (25 @ )-фурост-5-ен-3 @ ,22 @ ,26 триола @ -26-0- @ - @ -глюкопиранозида Советский патент 1985 года по МПК C07J71/00 

Изобретение относится к способу получения нового природного гликозида - триозида (25К)-фурост-5-енBhai

OiC-0

-3, 22о,26 тpиoлaJ-26-0- -D-глюкoпиранозида, обладающего антиоксидатными свойствами, общей формулы

(Яс

СПОСОБ ВЬЩЕЛЁНИЯ ТРИОЗИДА

где Glc - глюкоза, Rha - рамноза. Цель изобретения - способ выделения нового природного стероидного гликозида - триозида (25R)-фypocт-5-ен-3/},22о,26 триодаJ-26-O- -D-глюкопиранрзида, обладающего более выраженньми антиоксидантными свойствами в процессе перекисного окисления липидов при консервации семени хряков-производителей, Цель достигается тем, что согласно способу семена баклажанов (Solanum melangena L.) подвергают экстракции смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1 с последующей хроматографией экстракта дистиллированной водой на сефадексе G-50. Выделенный целевой продукт контро лируют в тонком слое силикагеля ТХС в системе хлороформ-метанол-вода 65:35:10 нижний слой Rf 0,26. Полученное вещество - порошок белого цвета с т.пл. 179-180°С, з°Д) Растворим в воде, метаноле, пиридине, нерастворим в серном эфире, хлороформе, ацетоне. Препарат не гигроскопичен, устойчив при хранении. В ИКспектре присутствуют полосы поглощения 3400 см широкая полоса, 900 см широкая полоса. Строение вещества формулы I доказано методами полного и частичного гидролиза, ферментативного расщепления, перйодатного окисления, метилирования и изучения полученных продуктов с помощью БХ-, тех-, ГЖХ-, ИК-спектроскопии и массспектрометрии. При полном кислотном гвдролизе вьщелен и идентифицирован стероидный агликон - диосгенин с t пл. 206-/ 208°С, UJc- 120°(с 1,0, СНС1з). ИК-спёктр 3400, 980, 920, 890, 680 см- М 414 у.е., Rf 0,45 в системе хлористый метипен-ацетон 49:1 ТСХ со свидетелем. В олигосахаридной части после гидролиза в виде производных ацетатов альдононитрилов методом гах обнаруживают смесь D-глюкозы и L-рамнозы в соотнощении 3:1. Ферментативное расщепление 1-глю- козидазой проводит к триозиду диосгенина, состоящему из- D-глюкозы и L-рамнозы (2:1). Последовательность присоединения моносахаридных остатков определяют с помощью частичного кислотного гидролиза 1%-ной в метаноле, получая при этом три прогенина. При гидролизе монозида в моносахаридной части обнаружена одна молекула D-глюкозы, в биозрзде - дёе молекулы D-глюкозы, а углеводная цепь триозида состоит из смеси D-глюкозы и L-рамнозы в соотношении 2:1. После метипирования прогенинов и последующего метанолиза полученных перметильных производных метилгликозиды идентифицируют с помощью ГЖХ. Обнаружены и идентифицированы следующие моносахарвдные производные: для монозида - о и -метил-2,3,4,6-тeтpa-0-мeтил-D-глюкoпиpaнозид, биозида - о/ и /з метш1-2,3,4,6 -тетра-О-метил-и-глюкопиранозид и d и /з метил-3,4,6-три-О-метил-глюкопиранозид, триозида - yL к /i-метил-2,3,4-три-0-метил-Ь-рамнопиранозид, oi, /з-метил-2,3,4, б-тетра-О-метил-D-глюкопиранозид и а,/5-метил-4,6-ди-, -О-метил-В-глюкопиранозид (1:1:1). При метилировании и метанолизе соединения формулы I также обнаружены о,|д-метил-2,3,4-три-0-метил-Ь-рамнопиранозид, ci ; /з-метил-2,3,4,6-тетра-О-метил-В-глюкопйранозид ио,/з-м.етил-4,6-ди-0-метил-В-глюкопиранозид (1:2:1). . Дополнительное подтверждение результатов метилирования получают по ле перйодатного окисления гликозида формулы 1 и последующего кислотн го гидролиза. При этом в гидролизате обнаружена только глюкоза. Конфи гурацию гликозидных центров опреде ляют по разности молекулярных враще ний гликозида и его прогенинов. Пример. 1 кг воздушно-сухих семян баклажанов (Solanum melangena L.) измельчают и экстрагируют смесью хлороформа и метанола в соот ношении 2:1. Экстракт разбавляют водой, водно-метанольный слой отделяют в делительной воронке, концент рируют в вакууме, получая 36 г сухого остатка. 18 г сухого остатка наносят на колонку с сефадексом G-50, элюируют водой. Вьзделение целе вого продукта контролируют в системе хлороформ-метанол-вода 65:35:10. В результате трехкратного хроматографирования получают 2 г вещества формулы I, что составляет 0,4% от веса исходного сырья. Об интенсивности развития перекисного окисления липидов (ПОЛ) судя по количеству продукта - малонового диальдегида (МДА), который выражают в ммолях на 1 кг белка семени хряка, с использованием молярного коэф- фициента экстинции, равного 1,56-10 М с , и определяют по методу 2. В качестве основной среды для разбавления и замораживания се74мени хряков-производителей используют синтетическую среду по прописи Кононова Гз). Соединение формулыJ в составе указанной среды испытывается в концентрациях 0,001, 0,002 и 0,004%. Оптимальная концентрация 0,002%. В таблице приведены результаты действия триозида (25К)-фурост-5-ен-3/3,220,26 триола -26-0- -В-глюкопиранозида в концентрации 0,002% на ПОЛ в семени хряка в сравнении со структурным аналогом - 3-0{- -D-ксилопиранозил (1 )-0-Сб-0-натрийсульфонато-р-В-галактопиранозил()-0-6-0-натрийсульфоната- -В-глюкопиранозил (1 2) -0-6-0-натрийсульфонато-/5-В-глюкопиранозил(1 )-0-6-0-натрийсульфонато- -В-галактопиранозид 1 -25К-спиростан-2в,3/, 15 -триолом в оптимальной концентрации 0,002%. Как видно из таблицы, при разбавлении семени хряка защитными средами, содержащими соединение формулы , наблюдается снижение урозня МДА, по сравнению с контрольной группой и со структурным аналогом во всех стадиях технологической обработки, особенно после замЬраживания оттаивания, что указывает на выра- женную антиоксвдантную активность соединения общей формулы (J). Таким образом, предлагаемым способом получают новое химическое соединение, присутствие которого в разбавлякнцей среде способствует ингибированмо процесса перекисного окисления липидов при криоконсервации семени хряков-производителей.