Способ определения активности пероксидазы Советский патент 1985 года по МПК G01N33/53 

СЛ

11

Изобретение относится к биохимии, в частности к способу определения активности пероксидазы, и может быть использовано для решения различных задач, возникающих при иммунологических исследованиях, например для количественного определения антигена или антител в пробе биологической жидкости.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Пример 1 . К девяти стандартным пробам пероксидазы, растворенным в 0,5 МП 0,01 М фосфатного буфера рН 6,0, добавляют по 2 мп субстратной смеси, содержащей 11 нМ хромогена З-амргносалициловой кислоты и 6 нМ перекиси водорода в фосфатном буфере рН 6,0.. Каждую реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин. при 20 С, а затем останавливают реакцию путем добавления в реакционную смесь 1 МП ацетона. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофотометре СФ-26 в видимой

I

022

области спектра при длине волны 460 НМ.

Пример 2. К девяти стандартным пробам пероксидазы, растворенным в О,5 мл О,01 М фосфатного буфера рН 6,0, добавляют по 2 мл субстратной смеси, содержащей 11 нМ хромогена 5-аминосалицш1овой кислоты и 6 нМ перекиси водорода в фосфатном

буфере рН 6,0. Каждую реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин при 20С, а затем останавливают реакцию путем добавления в реакционную смесь 1 мл этилового спирта. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофотометре СФ-26 в видимой области спектра при длине волны 460 НМ.

Примеры иллюстрируются таблицей, в которой представлены сравнительные данные по измерению оптической плотности при определении активности пероксидазы предлагаемым и известным способами.

3 11675024

Из таблицы видно, что коэффициентдает повышенной точностью и достовариаций измерений оптической плот-верностью определения по сравнению

кости во всем интервале концентра-с известным.

ций пероксидазы, полученных извест-Применение предлагаемого способа

ным способом, выше коэффициентов5 определения активности пероксидазы

вариаций измерений, полученныхпри построении калибровочной кривой

предлагаемым способом. Это говорит позволит повысить точность иммунотом что предлагаемый способ обла-ферментного анализа в 2,5 раза.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ путем добавления к пробам, содержащим пероксидазу, перекиси водорода и 5-аминосалициловой кислоты, инкубации реакционной смеси и спектрофотометрирования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, после инкубации в реакционную смесь добавляют этанол или ацетон в количестве 32-48 об.%.