Способ получения аналогов линкомицина и клиндамицина Советский патент 1985 года по МПК C07H5/08 A61K31/452 A61K31/7064 A61P31/04 C07H15/16 

11169 Изобретение otHocHTCH к способу получения новых соединений аналогов линкомицина и клиндамицина структурной формулы К 6 НС-С1 пI C-- fH-CH где R Et, Bu. 5 10 3 Цель изобретения - получение, основанное на известном методе, новых антибиотиков, обладающих более сильными бактериостатическими свойствами по сравнению с широкораспространенными аналогами линкомицином и клиндамицином. Пример 1. Амид-4-цис-этил-1-пипеколиновой кислоты 7-СвМТЛ НС(соединение V), где МТЛ - мeтил-1-тиo- о -линкосаминад. Часть 1 .

,

ftl хО -НСИ-Т-СГ-МТЯ

он

CH:i

Н-С-С1 ItH-CH

к oxлaждeннo ly до раствору 67 г (0,357 моль) аминокислоты НС (С.А 51,1643а, 1957) и 71,5 г (0,714 моль) триэтиламина в 2,5 л адетонитрила одной порцией добавля:ют 47,6 г (0,354 моль) изобутилхлор;формиата. Эту смесь (раствор) перемешивают при в течение 1 ч. Раствор Б приготовляют растворением 97,7 г (0,357 моль) 7Сг-МТЛ в теплой смеси 1500 мл ацетона и 1500 мл воды, охлаждают до и одной порцией добавляют к раствору А. Реакционную смесь перемешивают при 25°С в течение 18 ч, ацетон и

2Н5

HCl

C-bT-Cl-MTA

Смесь из 4,05 г (0,01 моль) исходного материала, 40 мл воды, 60 МП метанола, 1,0 мл 37%-ного хлористого водорода и 8,0 г катализатора на основе двуокиси платины восстанавливают в гидрогенизаторе Парра под давлением 3,4 кг/см в течение 3ч. Данные ТСХ реакционной смеси на снликагелевых пластинацетонитрил удаляют в вакууме. Вельй, мягкий остаток отфильтровывают и кристаллическое вещество собирают и высушивают с получением 95 г чистого продукта. Переработкой фильтрата путем хроматографии получают еще 10 г продукта. Общий выход составляет 73%.

Подсчитано: С 50,42; Н 6,22; N 6,92, S 7,92, CI 8,76.

C.HjjCINjOfS.

Найдено: С 50,67-, Н 6,40-, N 6,64; S 7,90i CI 8,70.

otJ CHCci : (С-1,0) + 293С

Часть II..

CjHsCHj

,

ОН

ках в системе СНСЕз метанол (6:1) показывают, что весь исходньй материал превращен в два более полярных вещества, находящихся в соотношении л 1:1. В целях отделения катализатора реакционную смесь отфильтровьгаают и фильтрат концентрируют в вакууме с получением белого мягкого кристаллического вещества, которое отфильтрбвьшают с сохранением получаемого фильтрата.

Белое твердое вещество, оказавшееся более полярным из двух полученных продуктов согласно ТСХ восстановленной смеси, перекристаллигзовывают из воды.с получением желаемого продукта V 57,930 с 222-224 0 и выходом 25-35%.

Подсчитано: С А5,63, Н 7,21; N 6,26; S 7,17; С 15,85.

Найдено: С 45,77; Н 7,44;

N 6,39; S 7,21; CI 16,17.

(о)р HjjO: (С-1,0), +176.

Абсолютная конфигурация и стере химия целевого продукта былк определены рентгено-структу ным анализом. Согласно примеру 1 получают соединение VA. Сохраненньй согласн части II примера 1 фильтрат конценрируют досуха в вакууме и остаток

V Эпимеризаа,ия

УА Эпимеризация Соединения У и УА можно также гидро- . лизовать с получением аминокислот .У и УЕ соответственно, которые затем можно эпимеризовать известными

.2«5

СХГидролиз

N Н VD

1695434 ,

превращают в свободное основание, хроматографируют на силикагеле с использованием в качестве растворителя CHCf : метанол (6:1). 5 Получают менее полярный из двух, упомянутых в части II, продуктов.

Его превращают в хлористоводороднокислую соль и перекристаллизовывают из ацетона и воды. Этому изоме10 ,ру можно приписать структуру VA

СН:

|2Н5

Н-СС1 П

k-wxHtiCин-с-н

-иHoJ o

Н

0fi

VA

--r$-CH:

он

Получаемые эпимеризацией т(в1но/ изомеры УВ и УС вьщеляют обычными приемами кристаллизации или хроматографии

65

..О

,/

Н

V с-7-С1-МТЛ

VC

gaHs

Эпинеризацил J

r(f

N Н

vF

Н приемами в соединения VF и VG соответственно. Последние можно связать с любыми описанными линкосаминидами

СПОСОБ ГОЛУЧЕИМ АНАЛОГОВ ЛИНКОМИЦИНА И КЛИНДАМИЦИНА общей формулы Сн. Л I о (I с 1JH-CH N Н Wсн. ОН где R - этил или бутил, отличающийся-тем, что в присутствии катализатора гидрируют соединение общей формулы ,

2Н5

Гидролиз

W

VE Н

СзНд

,0 Зпимеразац,ал ОНV G Пример 2. Амид А-цмо-п-буС4Н9о - С-7-С1-МТЛ (Ci7H

Смесь 4,0 г (0,0093 моль) исходного материала, 40 мл воды, 40 мл метанола, 2 мл 37%-ного хлористого водорода и 8,0 г катализатора на основе двуокиси платины восстанавливают с помощью гидрогенизатора Парра при давлении 3,4 кг/см в течение 18 ч. В целях удаления катализатора отфильтровывают реакционную смесь и фильтрат концентрируют в вакууме с получением масла янтарного цвета. Последнее растворяют в 20 мл раствора CHClj и метанола (2:f) и в целях нейтрализации присутствующего хлористого водорода добавляют достаточное количество триэтиламина. Этот раствор хроматографируют на силикагеле с применением системы растворителей : метанол (2:1). Получают фракции двух главных продуктов. Фракции, содержащие быстрее продвигакмцийся. материал, собирают и выпаривают в вакууме с получением белой твердой фракции А.

4Н9

С4Н

6 Т | С-7-С1-МТЛ

(С17Н32С1 1Г205$-ХН2о)

Фракцию А из предьщущего опыта превращают в ее хлористоводороднокислую соль тем же образом, что и фракцию Б. Получают продукт с выходом 25-35%, который на основе данных ЯМР-спектра в основном сказы-,

Фракции,содержащие медленнее |йродвигающийся материал, собирают и вьшаривают в вакууме с получением белой твердой фракции Б, которые рас:творяют в незначительном количестве водь и добавляют достаточное количество 37%-ного хлористого водорода в целях доведения значения рН до 2. Затем проводят кристаллизацию. Твердый материал собирают и перекристаллизовывают из воды с получением белых кристаллов желаемого продукта ст. пл. 224-22бС и выходом 25-35%.

Подсчитано: С 47,99 Н 7,63-, N 5,89 S 6,75 С t4,92.

.

Найдено: С 47,97) Н 7,42; N 6,23i S 6,90, С 14,87.

oijjMeOH: + 178 (С-1,0). 5- Структура подтверждена данными анализа ЯМР-спектра.

П о и м е р 3. Ам1ад-4-цис-п-бу. тил-С-пипеколиновой кислоты,- Св-МТЛ.

СНз

VIA C-Cl

I

-сн,

вается идентичньи с продуктом из фракции Б.

Минимальная бактериостатическая концентрация (МБК) соединения V и клиндамицина относительно аэробных бактерий представлена в табл.1, тил-Ь-пипеколиновой кислоты /-СГМТЛ; --3 (0 Н-С-С1 -НС Tjf (-КН-С-Н (Х)Н20 н ноЛ-0 |фи . Ч--Г5-СНз 32CJl2K205 WH20)

Staphyjococcus aureus

Staphytococcus epidermidis

streptococcus faecatis streptococcus pyogenes Streptococcus viridans Diplococcus pneumoniae I Diplococcus jpneumoniae II Escherichia coli

25

25

20

. 0.5 0,25

20

25 0,5

25

78

0,25

20 -10

20 25 25

05

78 25 25 -10 -39

10 0,5

39

39 0,5

10 0,5

0,5

20

78

20

39

10

20

10

20

25

6,25

0,12 0,12 rO,12 0.5 rO,12 0,12 -:0,12 :0,12 50

50

Продолжение табл.I

11 Указанные испытания проводят следующим образом. Приготовляют серию разведений соответствующего антибиотика в отношении 1:2 в бульоне Шедпёра (по 1,0 мл), а затем добавляют 9,0 мл

11695АЗ

.12 . Продолжение табл. 2 р.асплавленной при агаровой среды Вуилкенса Чалгрэна. После смешивания с антибиотиком агаровую среду выливают на чаопси Петри (100 мл 0 мм) и перед засевом последние вццерживают в течение ночи. Культуры засеивают штрихом на чашки с агаром Вуилкенса-Чалгрэна и. выращивают их в течение 48 ч при . Собирают газон микробов и готовят суспензию клеток в бульоне Шедлера до мутности 0,5 Mafarland Standard (10 клеток/мл). Полученную суспензию пипеткой переносят в резервуары аппарата Steers replicator и из него около 1-2 мкл наносят на поверхность агаровых.пластинок. После высыхания посеянной суспецзии в течение нескольких минут пластинки помещают в сосуд (85% N, 10% Н, 5% СО) и инкубируют при 37 с в течение 72 ч. МБК означает минимальную концентрацию действующего начала, задерживающую рост бактерий, причем очень тонкая пленка бактерий, т.е. менее 3 колоний, считается отрицательным результатом.

Агаровая среда Вуилкенса-Чалгрэна.

Растворитель - следующие компоненты, г, в 1000 мл дистиллированной воды (рН 7,0, 7,2):

Триптиказа 10

Гелисат10

Дрожжевой экстракт 5

глюкоза1

NaCI5 12,3(8,8 + 17,3) Указанные испытания проводят еледукщим образом. Группы по 10 обычных лабораторных мьш1ей штамма CF-1 весом 18-20 г внутрибрюшинным путем заражают приСвободный от аргинина

Натриевая соль пировиноградной кислотыАгар

Добавляют растворы гема и витамина К с- получением окончательной концентрации 5 мкг/мл гемина и витамина К,,. Вьщерживают автоклав при 121с в течение 15 мин в аэробных

условиях. Основной раствор гема: 0,5 г гемина + 10 мл 1 н. NaOH + + 990 мл Hj. Вьадерживают автоклав при в течение 12 мин. Добавляют 10 мл основного раствора на литр среды. Основной раствор витамина 0,05 мл раствора витамина К + .20 мл 95%-ного этанола. Стерилиззтот фильтры. Добавляют 0,2 мл основного раствора на литр среды. Среднее значение ЛД„ (внутрибрюшино у мьшей) соединения У из двух идентичных определений составляет 592 мг/кг,что приблизительно в два раза превьппает ЛД клиндамицина нее, т.е. ос1:рая внутрибрюшинная токсичность соединения V приблизительно в два раза меньше, чем у клиндамицина ,НСР.

Испытания на защиту мьш1ей. Методика приведена в табл. 3. .

Таблица 3

5,7(4,2 + 7,8)

Л/Ю 2,3(1,6+3,3)

3,3(2,6 + 4,2) 12,3(10,2+14,8)

4,2

320 55 близительно 100 дозами ЛД нормированных суспензий клеток бактерий, которые предварительно замораживали при , а затем быстро размораживали и должным образом разбавляли. Сразу-же начинают лечение и продолжают его в течение 4 сут (препат рат вводят раз в день, первый суточный период равен единице. Группы необработанных зараженных мьшей служат в качестве вирулентного контроля культуры.

Через 7 дн. после начала лечения выживших животных умерщвляют и вычисляют среднюю ЭД антибиотика и его 95%-ный доверительный интервал в пересчете на смертность среды обработанных животных согласно Спэрмена и Карбера с помощью ЦВМ 360. Р-Цис-изомер УА при испытании с рассмотренным в связи с табл. 1 бульоном из мозга и серд-. ца оказывает антибактериальное действие. Результаты испытаний представлены в табл. 4.

Таблица 4

Значения МБК, мкг/мл, VI у раз-личных бактерий представлено в табл. 5.

Таблица