Способ определения неспецифической иммунологической активности полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

4

00

СП

01 Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано при определении показателей неспецифического иммунитета пациентов. Целью изобретения является повышение точности определения. Изобретение выполняется следующим образом. Пример 1. Полиморфноядерные лейкоциты из периферической крови клинически здорового донора Б., 42 года, получали при помощи центрифугирования в прерывистых градиентах плотности фиколл-гипака (4,5). Концентрацию клеток доводили до 2,0x10 на 1 мл и суспензировали -в среде, представляющей собой 10°/о-ную гомологичную сыворотку на среде 199. В верхние подразделения каждой камеры помещается по 0,6 мл клеточной суспензии. Нижние подразделения обеих кам.ер содержат эквивалентный объем среды. Заполненные, таким образом, камеры помещаются в термостат при 37°С на 1 ч. По прошествии указанного времени мембраны извлекаются и обрабатываются по схеме: 1. Промывание в двух порциях изотонического раствора хлорида натрия. 2.Фиксация в метиловом спирте 15 мин. 3.Окраска метиленовым синим 15 мин в термостате при 37°С. 4.Промывание в двух порциях дистиллированной воды. 5.Высушивание. 6.Заключение в полиэтилен гликоль. Мембраны изучают методом световой микроскопии. Клетки, налипшие на обратные стороны мембран, подсчитывают в 10 произвольно выбранных полях зрения. Путем перемножения количества клеток в одном поле на общее их полей зрения количество на всей рабочей поверхности фильтра, получают абсолютное значение. По разнице между количеством полиморфноядерных лейкоцитов, налипших на обратную сторону мембраны с диаметром пор 3,0 ± ±0,6 мкм, и количеством полиморфноядерных лейкоцитов, налипших на обратную сторону мембраны с диаметром пор 5,0 ± ±1,0 мкм, определяют количество высокоадгезивных клеток в популяции, взятой для исследования, или в 1 мкл периферической крови (после пересчета). В наших исследованиях это значение в среднем равно 344±52 высокоадгезивных лейкоцитов 1 мкл периферической крови клинически здорового донора или 34 ±0,6% всей популяции клеток, способных к активной миграПример 2. Полиморфноядерные лейкоциты периферической крови больного С., 46 лет, получали при помоши центрифугирования в прерывистых градиентах плотности фиколл-гипака. Диагноз больного С. - абсцесс легкого. Комплектование камер, обработка мембран и учет результатов проводились описанным способом, исключение составляло лишь то, что в качестве среды была использована Ю /о-ная гомологичная сыворотка больного на среде 199. Больного С. обследовали в динамике 2 раза. Изменение уровня высокоадгезивных полиморфноядерных лейкоцитов коррелировало с общим клиническим состоянием. При поступлении состояние его было расценено как тяжелое - абсцесс размером 6x7 см на рентгенограмме, количество высокоадгезивных полиморфноядерных лейкоцитов в 1 мкл 142. На фоне проводимого лечения полость абсцесса уменьшилась до 3x3 см на рентгенограмме, больного выписали в состоянии клинического выздоровления, количество высокоадгезивных лейкоцитов в 1 мкл 301. Таким образом, предлагаемый способ позволяет расширить объем информации, которую может дать клиническая лаборатория лечащему врачу, и оценить функциональное состояние одной из важных группы фагоцитарных клеток - полиморфноядер ух лейкоцитов, а именно их миграционную и адгезивную активность.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ HEСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЛИМОРФНОЯДЕРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПУТЕМ пропускания клеток через микропористую мебрану диаметром пор 3,0 ±0,6 мкм с последующей оценкой миграционной активности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, лейкоциты дополнительно пропускают через мембрану диаметром пор 5,0 ± ±1,0 мкм, а оценку миграционной активности проводят путем подсчета разности между количеством клеток на обратной стороне первой и второй мембран.