Способ получения 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина Советский патент 1985 года по МПК C07D473/18 

Изобретение относится к способу получения 9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил) гуанина-, основанному на известном методе и его солей, щелоч ных металлов, обладающих противавир ной активностью HN-Y А,/-N J- N г ..N о I HO-VX Целью изобретения является получение нового соединения 9-(1,3-диок сиг2-пропоксиметил)гуанина, обладаю щего преимуществами в противовирусной активности по сравнению со структурными аналогами того же действия.. Пример I. (А) Получение N -ацетил-9-(1,3-дибензилокси-2-пропо симетил)гуанина, N 9-диацетилгуанин (15,61 г, 66 ммоль), 2-0-ацетоксиметил-1,3-ди бензилглицерин (19 г, 55 ммоль) и. бис- (п-нитрофенил)фосфат (0,5 г) перемешивают вместе со 150 мл диэтилового эфира. Растворитель отгоняют и остаток нагревают при 175 С масляной бане в течение 1,5 ч в ток азота.Хроматография в колонке приэлю ировании метанолом/метиленхлоридом (1:9) и последующая перекристаллизация; из этилацетата дают 4,76 г N -адетил-9-(1,З-дибензилокси-2-про поксиметил)гуанина, т.пл. 145-14бс (Б) Получение N -ацетил-9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина. К раствору N -ацетш1-9-(1,3-дибензилокси-2-пропоксиметил)гуанина (4,62 г, 9,67 ммоль) в 150 мл метан .ла плис 40 мл воды добавляют 20%-ную гидроокись палладия на угле в виде суспензии в 10 мл воды. Смесь гидрируют в гидрогенизагоре. Парра при давлении водорода 4,2 кг/см в тече ние 38 ч затем фильтруют через дели и концентрируют до белого твердого вещества. Перекристаллизация из метанола/ этилацетата дает 1,4 г N -аце тил-9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил) гуанина, т.пл, 205-208с. Матсшый раствор затем восстанавливают П% палладия на угле (1 г) в 150 мл метанола плюс 50 мл воды при 60 фунт/кв, дюйм (4,2 кг/см) в течение 47 ч. Общий выход N -адетил-9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил)гуанина составляет 2,11 г, (в) Получение 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина. N -ацетил-9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанин (721,9 мг, 2,4 ммоля) перемешивают с 50 мл метанольного раствора аммиака (метанол, насьщенный аммиаком при О С) в течение 17 ч, при 21°С. Раствор концентрирутот до белого твердого вещества, а остаток перекристаллизовывают из метанола с получением 582,3 мг 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина, т.пл, 250 С (с разложением), И р и м е р . 2. 9-(1 3-диокси-2-пропоксиметил)гуанин растворяют в водном растворе, содержащем один моль-эквивалент гидроокиси натрия. Раствор затем лиофилиэуют с получением натриевой соли 9-(1,3-диoкcи-2-пpoпoкcимeтил) гуанина в виде белого порошка: УФ:71 д. 265 мм; 1 11400. Пример 3. Натриевую соль 9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил)гуанина растворяют в минимальном количестве воды и добавляют разбавленную хлористоводородную кислоту для доведения рН до 7, Из раствора кристаллизуют 9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил)гуанин. т.пл,. , Пример 4, В раствор натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина (0,83 г, 3 ммоль) в воде (10 мл) добавляют хлористый аммоний (0,48 г, 9 ммоль) и полученный раствор охлаждают до .ОС. Полученные кристаллы отфильтровывают и сушат. Затем их растворяют в 100 мл воды, содержащей КОН (О,17 г, 3 ммоль). Полученный раствор вымораживают и-затем лиофилизуют для получения калиевой соли 9-(1,3-дигидрЬкси-2-пропоксиметил)гуанина. Пример 5, К раствору натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина (0,83 г, 3 ммоль) в воде (10 мл) добавляют хлористый аммоний (0,48 г, 9 ммоль) и полученный раствор рхлаждают до О С. Кристаллы вьщеляют фильтрацией, вакуумной сушкой и затем концентрируют из N N-диметилформамида (10 мл) остаток подвергают взаимодействию с гексаметилдисиланом- (5 мл) в К Н-диметил3формамиде (10 мл) в течение 5 ч с п следующим добавлением пиридина (10 м и изобутилангидрида (10 мл). Полученный раствор перемешивают 18 ч. Затем добавляют метанол (20 мл Раствор упаривают до объема приб лизительно 15 мл- и продукт осаждают добавлением в соотношении 1:1 раств ра диэтилового эфира гексана (50 мл Осадок перекристаллизовывают из смеси 2:1 метанол/сода, получая 9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил)гуанина.. 2 Пример 6. Раствор N -ацетил-9-(1,З-диокси-2-пропоксиметил) гуанина (0,89 г, 3 ммоль) в метанол (40 мл) прибавляют в концентрирован ный раствор гидроокиси аммония (10 мл), перемешивают 24 ч при комнатной температуре, затем концентри руют и осадок подвергают вакуумной сушке. Остаток затем растворяют в воде (100 мл), содержащий NaOH (0,12 г, 3 ммоль), Полученный раствор вымора живают и амофилизуют с получением натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина. Пример. Исключительная противовирусная активность соединения согласно изобретению иллю.стриру ется следующими данными. В клеточных культурах, НЕр-2 подготавливают вирус Негре х sineplex штамм 6 для инфицирования. Вирус ад сорбируют 1 ч, на клетки помещают свежую среду и все.это инкубируют при 35°С до тех пор, пока не будут инфицированы все клетки. Суспензию клеток замораживают при (-70 С от таивают и центрифугируют для удаления клеточных обломков..Кадосадочную жидкость сливают и хранят в за414мороженном состоянии при (-70)С до употребления, 1.0 разведёни е надосадочной жидкости дает 50%-ную инфицирующую дозу 50%-ной клеточной культуры (CCIDEQ) в клетках НЕр-2 а 10 разведение дает 50%-ный летальный : ИСХОД ( С JQ) на мьш1ах. Группы по 20 мьшей самок Swiss Webstev О 5-1 7 г/ заражают : внутрибрюшинно с использованием 0,2 мл ЕМЕМ, содержащего вирус в количестве 10 с D- мышь, Мьшгей заражают количеством вируса в 10 раз больше меньше, чем доза 10,Dj(, служащая в качестве контроля вирулентности, что сделано для обеспечения работоспособности модели. Лечение испытуемыми соединениями начинают через 6 ч после заражения. Мьш1ам, поделенным на группы по 20 особей, вводят соединения в солевом растворе в количестве 5 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг. Одна группа из 20 особей используется как контроль и получает солевой физиологический раствор. Печение повторяют спустя 24, 48, 72 и 96 ч после заражения.Испытуемые соединения: соединение согласно изобретению и три соединения, описанныев патенте-США., № 4199574, имеющие частичное структурное сходство с соединением согласно изобретению (таблица). Приведенные результаты наглядно демонстрируют сравнение между числом выживших животных, получавших соединение согласно изобретению, и числом выживших животных, получавших три известных соединения, что дает ясное представление об исключительно высокой противовирусной активности описываемого соединения.

Контроль/(без лечения) О-(I,З-Дибензокси-2-пропок.0

U. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 9-