Способ получения производных пуринов или их солей Советский патент 1990 года по МПК C07D473/02 A61K31/522 A61P31/22 C07D473/18 

Изобретение относится к способам получения производых пуринов - новых биологически активных соединений, которые могут быть применены в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых производных пурина практически нетоксичных, обладающих более высокой противовирусной активностью и растворимостью в плазме.

Пример 1. ,3-Диацетил- окси-2-пропоксиметил)гуанин.

Смесь 3,00 г 9(1,3 Диокси-2-про- поксиметил)гуанина, 300 мг 4-димети- ламинопиридина и 100 мл ангидрида уксусной кислоты интенсивно перемешивают в течение 3 сут при комнатной температуре. Ангидрид уксусной кислоты затем удаляют выпариванием при пониженном давлением, а остаток пере- кристаллизовыеают из метанола, получают 3,62 г (выход 9U) 9-0,3-Ди- ацетилокси-2-пропоксиметил)гуанина,, т.пл. 237-239°С.

Пример 2. 9-(1,3-(2,2-Ди- метилпропаноилокси)-2-пропоксиме- тил)гуанин.

Смесь 1,306 г 9(1,3 Диокси-2-про- поксиметил)гуанина, 150 мг -диме- тиламинопиридина, 50 мл ангидрида 2,2-диметилпропановой кислоты и 75 мл сухого ДМФ интенсивно перемешивают

ел со vj

Ео

00

см

315

в течение 2 сут. ДМФ затем удаляют выпариванием при пониженном давлении, а к остатку добавляют 200 мл этилового эфира. После охлаждения смеси до 0°С отфильтровывают осадок, который перекристаллизовывают из метанола. Получают 1,83 г (выход 8W 9(1,3- ди-(2,2-диметилпропаноилокси)-2-про- поксиметил)гуанина, т.пл. 230-232°С.

Аналогично при использовании ада- мантанкарбоновой кислоты получают 2-амино-Э 0,(1-адамантилкарбок- си)-2-пропоксиметил -пурин, т.пл. 283-285°С.

Пример 3. 9(1 ,3-ди-п-гекса- деканоилокси-2-пропоксиметил)гуанин.

К 50 мг 9(1,3 Диокси-2-пропокси- метил)гуанина в 5 мл М,М-диметилфор- мамида добавляют 290 мг дициклогекси- карбодиимида и 300 мг п-гексадеканой- ной кислоты. Полученный раствор перемешивают при 50°С в течение 50 ч. Соединение осаждают в ледяной воде. Воду три раза экстрагируют метилен- хлоридом. Собранные метиленхлоридные экстракты концентрируют и очищают на препаративных силикагалевых пластинках, проявленных в смеси метанола и метиленхлорида (1:9). Полуиают 1 АО мг (97%) ,3-ДИ-п-гексадеканоилокси- 2-пропоксиметил)гуанина, т.пл. 150- .

Пример А. Двукратный стехио- метрический избыток 3%-ного хлористого водорода в метаноле добавляют к раствору 1,0 г 9(1,З-Ди-п-октаноилокси-2-про- поксиметил)гуанина в 20 мл метанола. Затем добавляют диэтиловый эфир со завершения осаждения. Получение пгг дукт фильтруют, промывают ДИОТИЛОР эфиром, высушивают на воздухе и перс кристаллизовывают с получением гидрохлорида 9-0 ,З-ДИ-п-октаиоилокси-2- пропоксиметил)гуанина.

Аналогично, все предлагаемые соединения, имеющиеся в виде свободного основания, можно превращать в соответствующие соли с кислотами путем обработки соответствующей кислотой,

„

например, хлористоводородной, бро- мистоводородной, серной, фосфорной, уксусной,пропионовой, гликолевой, пи- ровиноградной, щавелевой, малоновой, янтарной, яблочной, малеиновой, фу- маровой, винной, лимонной, бензойной, коричной, миндальной, метансуьфоно- вой, этансульфоновой, p-ic yorcyrr,- фоновой и др.

0

71

5

5

п

U 5

0

5

384

Пример 5. 1,0 г гидрохлори- да ,3 Ди-п-октаноилокси-2-про- поксиметил)гуанина, взвешенного в 50 мл диэтиловового эфира, перемешивают с двукратным стехиометрическим избытком разбавленного водного раствора карбоната калия до полного растворения соли. Затем отделяют органический слой, промывают его два раза водой, высушивают его сульфатом магния и выпаривают.

Получают 9(1 ,3-Ди- токтаноилокси- -2-пропоксимотил) гуонич- 1 з виде свободного основания.

Пример 6. Предназначенный для заражения штамм G вируса Herpes simplex 2 выращивали в клеточных культурах НЕр-2. Вирус в течение 1 ч адсорбировали, а на клетки помещали свежую среду. Клетки инкубировали при 35 С до заражения всех клеток. Клеточную взвесь замораживали при -70 С, а затем ее оттаивали и центрировали для удаления клеточных остатков. Жидкость над клетками распределяли по порциям и хранили ее в замороженном при -70°С состоянии до ее употребления. РазбавлениемЮ этой жидкости получали 50%-ную инфекцис - ную дозу клеточной культуры (СС1П60) с НЕр-2; разбавлением при тесте на иммунитет у мышей получали 50%-ную летальность (LCSo).

Мышам-самкам Swiss webster (20 мышей в группе) весом 15-17 г вводили внутрибрюшинным путем 0,2 мл ЕМЕМ, содержащего вирусы в количестве 10ЪС50/мышь. Мыши, зараженные виру- -ами в количестве LCgo, служат контролем вирулентности.

Испытуемые соединения вводили через 6 ч после заражения мышей. Мышам вводили соединения в солевом растворе (подкожно) в количестве 20 мг/кг. 20 мышам из одной группы, служащей контролем, вводили только солевой раствор (подкожно). Введение препаратов повторяли через 2, 8, 72 и 96 ч после заражения мышей.

В указанном испытании предлагаемые соединения проявляли противовирусное действие.

Результаты приведены в табл.1.

Противовирусное действие-орально введенных препаратов у мышей, зараженных вирусом HSV-2, приведено в табл.1.

515

Пример 7. Испытание на острую токсичность у мышей.

Мышам-самцам swiss-Webster (simou- sen) весом 25 г (по 5 особей в группе подкожно вводили соединения, приве- денные в табл.2. Испытуемое вещество, как указано в таблице, вводили лишь на первый день опыта. Затем в течение 21 сут мышей проверяли на смертность,

Пример 8. Растворимость предлагаемых соединений. Мышей самцов весом г помещали со свободным доступом к корму и воде в клетки.

Накануне дачи медикамента и в течение 3 ч после введения препарата животных не кормили.

Испытуемую единичную дозу каждо- го соединения вводили орально. Все оральные дозы взвешивали в носителе, состоящем из,натрийкарбоксиметилцел- люлозы (0,5%), хлористого натрия (0,9$). Tween 80 (0,%), бензилового спирта (0,3%) и воды (97,3%). Каждое соединение вводят в объеме дозы, эквивалентной 30 мг/кг предлагаемого соединения.

Плазменная концентрация каждого соединения в пересчете на предлагаемое соединение в качестве эталона приведена в табл.3.

Проведенные испытания показали, что соединения, получаемые предлагаемым способом обладают более высокой активностью против вируса HSV-2

О HN

HT.N N

386

(штамм G) при внутрибрюшинном введении, при этом растворимость в плазме предлагаемых производных (R - ал- кил С,-С4.) выше, чем растворимость известного соединения сравнения. Соединения могут быть отнесены к категории практически нетоксичных.

Формула изобретения

Способ получения производных пуринов общей формулы

о

HN

-W

HT.N N

$

N N

О CH2OCR

сн2оснс;-1госп о

где R - С -С6 алкил, адамантил, их солей, отличающийс тем, что азотсодержащее гетероцческие производные формулы

N СН2ОН СН2ОСНСН2ОН

подвергают ацилированию ангидридом соответствующей карбоновой кислоты или соответствующей карбоновой кислоты в смеси с дициклогексилкарбодии- мидом и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли.

Таблица 1

О

CH-2.0CR

Изобретение касается пуринов, в частности способов получения производных пуринов формулы C(O)-NH-C(NH₂)=N - C=C - N = CH- N - CH₂-O-CH[CH₂-O-C(O)R]₂, где R-C₁-C₆-алкил, адамантил, или их солей, обладающих биологической активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и более растворимых в плазме веществ указанного класса. Синтез ведут ацилированием 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина ангидридом соответствыующей карбоновой кислоты или соответствующей карбоновой кислоты в смеси с дициклогексилкарбодиимидом. Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые соединения обладают более высокой активностью против вируса HSV-2 [штамм G], чем известное соединение, и лучшей растворимостью в плазме соединений, где R-C₁-C₆-алкил, при токсичности ЛД₅₀*983320-4544 мг/кг. 3 табл.

Диацетилокси20

Дипропаноилокси20

Дибутаноилокси20

Дигексаноилокси20

CH2OCHCH2OCR 6

i1,0

+1,0

t1,0

i1,0

11,7 ± 2,8

12,1 ± 1,5 13,6 i M

13,b i 5,6

Введение осуществляли ежедневно в течение k сут (первый раз через 2k ч после заражения).

Увеличение выживаемости по сравнению с контрольными мышами обработанными только SSV, во всех случаях оказалось статистически показательным; Заражение вирусами HSV-2 (штамма G) путем внутрибрюшного введения.

Средство, содействующее суспендированию (SSV). Известное соединение.

Таблица 2

О хт

йй

о

HN H-jN CH-2.0CR

CHiOCHCH-iOCR

о

Контроль Ди-2,2-димети пропа ноилокси То же

-Н-ц

Ди-1-адамант- илкарбонилокс То же

и

Ди-п-деканоил окси

То же

и

-II

15371388

Продолжение табл. 1

о

CR

Подкожно О

То же

-И

н

ч

н н н н

-ц -ц -||- -ц

О О

о о

о о о о

о о о о

3320

3976

Г

C/0/RРастворимость

Водород1

Диацетил1,23

Дипропионил1,8

Дибутирил1 15

1537138Ю

Таблица 3

Г