Способ определения гликозаминогликанов сыворотки крови Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицинско химии, а именно к способам анализа гликозаминогликанов сыворотки методом электрофореза, и может быть использовано в диагностических целях в клиник-е и в других областях народного хозяйства, где применяется аналитический электрофорез.

Цель изобретения - повышение разрешающей способности споьоба и сокращение времени определения.

,

. Пример. Берут 0,5 мл сыворотки, к которой прибавляют 4,5 мл физраствора и 2 мл 1,8 М хлорной кислоты, через 10 мин центрифугируют. К ползгценному элюату прибавляют 1 мл 5%-ной фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 н. соляной кислоты, через 10 мин центрифугируют, полученный осадок растворяют в 0,2 мл фосфатного буфера рН 7,0 при добавлении 0,1 мл 0,1 н. NaOH. Затем к раствору прибавляют 5 мл 96%-ного этанола, центрифугирзлот, осадок высушивают. Полученньй осадок растворяют 0,1 мл трис-глицинового буфера рН 8,3, вносят 0,05 мл раствора в одну трубку с 10%-ным разделяющим полиакриламидным гелем, вместо концентрирующего геля используют сефадекс G-200. Затем проводят дйскэлектроЛорез в, трис-глициновом буфере рН 8,3 пр-и силе тока 2 мА на одну трубку в течение 1 ч. После .извлечения гелей из трубок их фиксируют 10 мин в смеси метанол:вода: ;уксусная кислота 10:10:1, далее проводят окрашивание в 1%-ном растворе алцианового синего в 7%-ной уксусной кислоте в течение 30 мин. Затем проводят электрофоретическое обесцвечивание в 7%-ной уксусной кислоте 20-30 мин (положительный электрод со стороны целлофана), после чего в гелях выявляют 5-7 фракций окрашенных в синий цвет, которые бьти идентифицированы с помощью стандартных веществ (хондро-4 сульфат, гиалуроновая кислота). Первая фракция соответствует кондроитинсульфатам, седьмая - гиалуроновой кислоте.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ СЬШОРОТКИ КРОВИ путем обработки сыворотки фосфорно-вольфрамовой кислотой, выделения гликозаминогликанов, электрофореза и окрашивания алциановым синим, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешающей способности способа и сокращения времени определения, проводят диск-электрофорез в 9-10%-ном полиакриломидном геле при рН 7,8-9,0 и силе тока 2 мА на одну трубку.