Способ электрофоретического определения гликозаминогликанов Советский патент 1976 года по МПК G01N33/16 

(54) СПОСЮБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛМКОЗАМИ 1()ГЛИКЛНОВ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа гликозаминогликанов мочи для гфоведения дифференциал.ьной диагностики.

Известен способ анализа гликозаминогли- канов путем электрофоретического разделе-

НИИ в столбиках -. 6%-ного полиакриламйдкого геля с использованием в качестве ге- пеобразующего и электродного буферов фосфатно-формиатных буферов с последующим . окрашиванием фракций гликозаминогликанов толуидиновым синим. Этот способ позволяет удовлетворительно расфракциониронать и идекн тифицировать только чистые препараты гликоэаминогликанов (ГАГ). Однако таким способом нельзя с большой точностью расфракционировать и идентифицировать гликозаминогликаны например нативной мочи, без предварительно

.го выделения их в чистом ви,де, .

С це.7тью анализа гликозаминогликанов без предварительного выделения их чистом

:,виде, используют 5%-ный полиакриламидный гель, в качестве гелеобразующего и электродного буферов используют концентрированный трис-coлянoкиcj ьIЙ и три с-глициновый

буферы, а для окрашивания ф шкций - 1%ный раствор альцианового синего в 3%-ной уксусной кислоте.

Анализ ГАГ мочи проводят с помощью метода электрофореза столбиках полиакриамидного геля.

Состав гелевого раствора, мл;

Мономер (акриламид - 28 rj метиленбисакриламид-0,735 г в ЮОмл

дистиллированной воды

1,0

Трис-соляный буфйрнь Й раство|1 (48 мл соляной кислоты 1Н + трис 36,6 г в 1ОО мл дистиллированной воды)

0.2 2,8

Вода дистиллированная Персульфат аммония (0,14%)

2,0

o.ooi

Темед

Высота гелевого столба

Полимеризацию геля проводят в термостате при 32-34°С в течение 20-25 мин.

Исследуемый образец в количестве О,3 мл : .(5-1О гамм гликозаг.ппюгликанов)

нансхзят на поверхность столбика геля, а сверху наслаивается трио-гл шнновый буферный раствор с Hozffloft силой 0, 8,3, Этот же буферный раствор используют для заливки электродных кювет.

Электрофорез проводят при силе тока 0,5 мА на трубку в течение 3 час, за-; тем 2 час при токе 2 мА на трубку. /

По окончании процесса электрофореза столбики геля извлекают из трубочек и окрашивают 1)ным раствором альцианового синего в 3%-ной уксусной кислоте в течение ЗО мин.

Отмывку геля от избытка красителя производят погружением столбика в 3%-ный раствор уксусной кислоты и периодической сменой итого раствора.

При применении такогоспособа сокращается время электро фореза благодаря использованию геля, обладающего крупнопористой структурой; анализу подвергается нативная мочаги имеющиеся в ней низкомолекулярные вешества не мешеют делению на фракции, так как они отдиализовываются в геле; хорошая разрешающая способность и воспроизводимост

метода обеспечиваются обоснованным выбором процентного содержания и состава гелевого раствора} одновременный анализ нескольких проб обеспечивается тем, что . каждый столб геля находится в идентичных условиях и дает совершенно точный результат, так как влияние на него, .искажающее результат, исключается.

изобретения

Предмет

Спбсоб электрофоретического определения гликозамнногликанов путем электрофоретического разделения их в столбиках полиакриламидного геля с использованием гелеобразуюшего и электродного буферов и . окращивания фракций, отличаюшийс я тем, что, с целью анализа гликозам ногликанов без предварительного выделения их в чистом виде, разделение ведут 5%-ным полиакриламидным гелем с использованием концентрированного трис-солянокислого и трис-глицинового буферов, а окрашивают фракции раствором альци- анового синего в 3%-ной уксусной кислоте.