Штамм вируса Алма-Арасан N каз-1380 кл,используемый для получения диагностических препаратов Советский патент 1985 года по МПК C12N7/00 A61K39/42 

(Л

с

итамм Алма-Арасан № Каз-1380 кл, ГКВ № 675 (Государственная коллекция вирусов Института вирусологии им, Д.И.Ивановского), используемый для получения диагностических препаратов.

00

ND

О

ч1 1 Изобретение относится к вирусологии, в частности к производству вакционно-сывороточных препаратов. Целью изобретения является получе ние нового штамма неизвестного ранее арбовируса, пригодного для производства специфических диагностических препаратов. . , Морфологические признаки. При фильтрации вирусосодержащей суспензии через миллипоровые фильтры размером 100 и 50 нм снижения инфекцион ного титра не наблюдалось. Обработка вирусосодержащей мозговой суспензии .дезоксихолатом натрия приводит с сни жению титра вируса на 4,8 lg,3To свидетельствует о том, что вирус имеет размеры в пределах до 50 нм и содержит липосодержащую оболочку. При обработке БУДРом титр вируса не снижался, что является косвенным доказательством о принадлежности его к РНК-содержащим вирусам. На основании морфологических, мор фогенетических и антигенных признаков изолированный вирус отнесен к с мейству Тогавириде, роду Флавивирус антигенной группе В. Культуральные свойства. Размножа ется в культуре клеток СПЭВ без цит патического действия. Титр вируса в культуральной жидкости при титровании на мышах равен 4,2 1р, LD 50/0,02 мл. Адаптационные свойства. Исходный вирус вьщелен от клещей Ixodes persulcatus и адаптирован к организму 1-2-дневных белых мышей, прошел 7 пасажей. Инкубационный период составил 7 дней при первичном вьщелени и сократился до 3-4 дней в последующих пасслжах. Инфекционный титр ви руса для новорожденных белых мьш1ей при мозговом заражении достигает 8,0 Ig LD 50/0,02 мл. Антигенные свойства. Серологичес кая идентификация штамма № Каз-1380 с использованием иммуных асцитных жидкостей к 11 арбовирусам 27 антигенных групп не выявила антигенно связи с известными арбовирусами за исключением односторонней связи с вирусом Повассан. В РСК антиген вируса Повассан взаимодействовал с иммуной асцитной жидкостью (ИАЖ) к штамму Каз-1380 кл, в то же время антиген штамма Каз-1380 кл не реаги ровал с ИАЖ к вирусу Повассан. Антигенное различие штамма Каз-1380 к 7 от вирусов Повассан и клещевого энцефллита выявлено и в реакции торможения гемагглютинации. Серологическая идентификация штамма Каз-1380 кл в РСК и РТГА согласуется с данными реакции биологической нейтрализации. Так, штамм Каз-1380 кл не нейтрализовался ИАЖ к вирусу Повассан, а индекс нейтрализации вируса Повассан с ИАЖ к штамму Каз-1380 кл составил всего 2,5 Ig, при индексе нейтрализации 5,0 Ig изучаемого штамма с гомологической ИАЖ. Штамм № Каз-1380 кл при иммунизации лабораторных животных вызывает образование комплементсвязывающих, преципитирующих и вируснейтрализующих антител. У больных людей с остролихорадочными заболеваниями, вызываемыми вирусом Алма-Арасан, также в сыворотках крови выявляются комплементсвязывающие, преципитирующие и вируснейтрализующие антитела. Патогенные свойства вируса для животных.Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных и взрослых белых мьш1ей при внутримозговом заражении. Инфекционный титр вируса в мозгу достигает 8,0 Ig LD 50/0,02 мл. Патогенные свойства вируса АлмаАрасан для людей,Вирус Алма-Арасан является патогенным и для человека. При обследовании остролихорадочнык больных роль этого вируса в инфекционной патологии установлена в 27 случаях. У этих больных наблюдались явления серозного менингита. Для получения диагностических препаратов штамм № Каз-1380 кл размножают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, взятых на высоте клинических проявлений заболевания, готовят диагностический антиген путем сахаро-ацетоновой экстракции. Пример. Приготовление имммунной асцитной жидкости. Лабораторные животные - взрослые белые мыши,, самки. Проводят пятикратную иммунизацию с интервалом в 7 дней, способ введения - внутрибрюшинный. Объем вводимой вирусосодержащей суспензии при 1 и 2 -и иммунизации 0,2 мл, при 3,4,5 - и - 0,25 мл. Суспензию перед введением смешивают с равным объемом полного адьюван3

та Фрейнда.Через 1 сут, после 5-й имунизации внутрибрюшиино вводят асцит - sarcoma 180 ТС. Спустя 13-14 -дней после введения асцита получают асцитную жидкость, содержащую комплемент-связывающие антитела. Иммуная асцитная жидкость не теряет активности и специфичности после лиофилизации, что доказано повторной проверкой активности препарата по реакции связывания комплемента. Титр иммуной асцитной жидкости предлагаемого препарата с гомологичным антигеном составил 1:256, с гетерологичным антигеном вирусов антигенной группы В реакция была отрицательной.

Для лабораторной диагностики . заболевания человека, вызванного вирусом Алма-Арасан, взят материал для исследования - сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и

820774

реконвалесценции. Проводят постановку серологических реакций - РСК, РТГА с использованием сахаро-ацетонового антигена, приготовленного из 5 вируса Алма-Арасан штамм № Каз-1380 кл. Реакции ставятся по общепринятому способу - микрометодом на аппарате Такачи.

У больной Т. была взята сыворотка крови в 1-й день заболевания 27.05.83. В РСК и РТГА результаты с антигеном штамма Каз-1380 кл были отрицательными. В сыворотке крови, взятой 30.05.83, обнаружены антитела к указанному штамму соответственно 1:64 и 1:10, а в сыворотке, взятой 8.06.83, титр был 1:128 и 1:40, в то время как в тех же реакциях антитела к другим арбовирусам (ЗН, Карши, Узун-Агач и др.) не вьтавились. Таким образом, приготовленный из предлагаемого штамма вируса антиген позволил лабораторно установить этиологию заболевания.