Штамм вируса Каскелен для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к вирусологии.

Штамм вируса Каскелен № Каз-4751 кл хранится в лаборатории трансмиссивных вирусных инфекций НИИэпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава Казахской ССР и в государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д. И. Ивановского АМН СССР под номером 902.

Цель изобретения - штамм неизвестного ранее арбовируса, обладающий специфической иммуногенной активностью, позволяющей использовать его для приготовления специфических диагностических препаратов.

Морфологические признаки. Фильтрующийся вирус в размере 50 нм. Обработка виру coco держа щей мозовой суспензии дезоксихолатам натрия, эфиром приводит к снижению титра вируса на 3-4 Ig LD 50/0,02 мл, что свидетельствует о наличии липосо- держащей оболочки.

При обработке БУДРом титр вируса не снижался, что является косвенным доказательством его принадлежности к РНК-со- держащим вирусам.

При электронно-микроскопическом исследовании мозга мышей-сосунков, зара- женных- вирусом Каскелен, в цитоплазме клеток наблюдались структуры, типичные для размножения Орбивирусов: мелкогранулярные матриксы с формирующимися кольцевидными частицами диаметром 50 нм и отдельные трубчатые структуры диаметром 40 нм. Формирующиеся вирусные частицы имеют электронно-плотную сердцевину и образуют в матриксах кристалло- подобные скопления.

На основании электронномикроскопи- ческих и антигенных признаков изолированный вирус отнесен к семейству Реовириде, роду Орбивирус.

Культуральные свойства. Взаимодейст- вне штамма № Каз-4751 кл с культурой клеток Vero сопровождается дегенерацией клеток. Титр вируса равен 6,0 Eg ТЦД 50/мл. Культуры клеток СПЭВ, ВНК, ФЭК к вирусу не чувствительны.

Адаптационные свойства. Исходный вирус выделен из клещей Ixodes persulcatus и адаптирован к организму 1-2 дневных белых мышей. Прошел 7 пассажей. Инкубационный период составил 9 дн при первичном выделении и сократился до 3-4 дн в последующих пассажах. Инфекционный титр вируса для новорожденных белых мышей при мозговом заражении достигает 7,0 g LD 50/0,02 мл.

Антигенные свойства. Серологическая идентификация штамма № Каз-4751 кл вируса Каскелен с использованием иммунных асцитных жидкостей к 80 арбовирусам 25 антигенных групп не выявила антигенной связи его с известными арбовирусами, Штамм при иммунизации лабораторных животных вызывает образование компле- ментсвязывающих, нейтрализующих и преципитирующих антител.

Патогенные свойства вируса Каскелен для животных. Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных белых мышей при внутримозговом заражении. Инфекционный титр в мозгу достигает 7,0 Ig LD 50/0,02 мл. Для взрослых белых мышей и морских свинок при внутримозговом заражении вирус Каскелен слабопатогенен.

Патогенные свойства вируса Каскелен для людей. В сыворотках крови здорового

населения, собранных в предгорных и полупустынных рафонах Казахстана, антитела к вирусу Каскелен в РСК выявлены в 1,75- 3,2% случаев.

Диагностический препарат, антиген из штамма № Каз-4751 кл вируса Каскелен, получают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, -взятых на высоте клинических проявлений заболевания, готовят антиген путем сахарозо-ацетоновой экстракции.

Диагностическую иммунную асцитную жидкость готовят по известному методу С.Я.Гайдамович с соавторами.

Изобретение аллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Материал для исследования - сыворотки крови населения из эндемичных по арбовирусным инфекциям районов Казахстана. Проводят постановку серологических реакций - РСК с использованием сахарозо-ацетонового антигена, приготовленного из штамма вируса Каскелен Ms Каз-4751 кл. Реакцию ставят по общепринятому способу - микрометодом на аппарате Такачи.

Результаты исследования сывороток людей приведены в табл. 1.

Таким образом, использование предлагаемого штамма вируса Каскелен для приго- товления диагностического антигена способствовало расширению набора диагностических препаратов с целью изучения иммуноструктуры населения.

Пример 2. Материал для исследования - 10% суспензии из клещей и комаров, собранных в природных очагах арбовирус- ных инфекций. Проводят постановку РИГА с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе иммунной асцит- ной жидкости их предлагаемого шта мма № Каз-4751 вируса Каскелен. РИГА ставят по общепринятой методике.

Результаты исследования суспензий из членистоногих приведены в таблице 2.

Следовательно с помощью эритроци- тарных диагностикумов, приготовленных на основе иммунной асцитной жидкости к штамму № Каз-4751 вируса Каскелен, устанавливается наличие антигена вируса в биологических объектах.

Предлагаемый штамм нового арбовиру- са и приготовленные на его основе диагностические препараты найдут применение в диагностических лабораториях вирусологического профиля.

Формула изобретения

Штамм вируса Каскелен ГКВ 902 для приготовления диагностических препаратов.

Таблица 1

Использование: вирусология, диагностика, иммунология. Сущность изобретения: штамм нового вируса Каскелен № Каз-4751 кл изолирован из клещей Ixodes persubcatus. Штамм прошел 7 пассажей, инкубационный период на новорожденных белых мышах составляет 3-4 дня. Инфекционный титр равен 7,01 Ig ЛД50/0.02 мл. Взаимодействие штамма вируса Каскелен с культурой клеток Vero сопровождается дегенерацией клеток, титр вируса равен 6,0 Ig ТЦД 50/мл. Культуры клеток СПЭВ, ВНК, ФЭК к вирусу не чувствительны. Вирус высокочувствителен к эфиру и дезоксихолату натрия, титр при обработке снижается на 3-4 Ig ЛД 50/0,02 мл. При обработке БУД- Ром титр вируса не снижается. При серологической идентификации с использованием иммунных сывороток к представителям 25 антигенных групп арбовирусов антиген из штамма вируса Каскелен № Каз-4751 кл ни с одним из них не реагировал. Электронной- микроскопические данные позволили установить размеры вируса, равные 50-55 нм, и отнести его к семейству Reovlrldal, роду Orbivlrus. Штамм используется для приготовления диагностических препаратов (антигена, иммунной асцитной жидкости), которые употребляются при идентификации вновь выделенных штаммов арбовирусов из семейства реовиридае. лабораторной диагностике арбовирусных болезней, изучении иммунитета населения и животных и выявлении антигена а биологических объектах окружающей среды. 2 табл. (Л С S О 00

Таблица 2