Штамм вируса клещевого энцефалита для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1991 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к вирусологии.

Штамм вируса клещевого энцефалита Ne Каз-20 пт хранится в лаборатории трансмиссивных вирусных инфекций НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава Казахской ССР и в государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР под номером 871.

Цель изобретения - оригинальный штамм вируса клещевого энцефалита, обладающий повышенной антигенной и иммуногенной активностью.

При идентификации штамма № Каз-20 пт по реакции связывания комплемента и по реакции торможения гемагглютинации с набором иммунных асцитных жидкостей к вирусам, относящимся к различным группам,

установлена его антигенная связь со штаммом вируса клещевого энцефалита Софьин (табл. 1 и 2),

Выделенный штамм вируса клещевого энцефалита № Каз-20 пт имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику.

Морфологические признаки. При фильтрации вирусосодержащей суспензии через миллипоровые фильтры размером 100 и 50 нм снижения инфекционного титра не наблюдается, Обработка вирусодержащей суспензии дезоксихолатом натрия и хлороформом приводит к снижению титра вируса на 4lg. Это свидетельствует о том, что штамм вируса имеет размеры в пределах до 50 нм и содержит липопротеиновую оболочку. При обработке БУДРом титр вируса, не снижается, что является доказательством принадлежности его к-РНК-содержащим вирусам.

На основании морфологических, мор- фогенетически и антигенных признаков изолированный штамм вируса относят к семейству Тогавириде, роду Флявивирус, антигенной группе В, штамму вируса клещевого энцефалита.

Культуральные свойства. Взаимодействие штамма вируса клещевого энцефалита № Каз-20 пт с культурой клеток СПЭВ происходит в форме острой инфекции, сопровождается дегенерацией клеток, титр равен 7,2 Ig ТЦД 50/мл, с куриными и человеческими фибробластами - в латентной форме, без ЦПД.

Адаптационные свойства. Исходный штамм вируса клещевого энцефалита № Каз-20 пт выделен от птииы галки в предгорьях Заилийского Алатау и адаптирован к организму 1-2-дневных белых мышей, прошел 6 пассажей. Инкубационный период составляет 9 при первичном заражении и сокращается до 3-4 дней в последующих пассажах. Инфекционный титр штамма вируса для новорожденных белых мышей при мозговом заражении достигает 7,5 Ig LD 50/0,02 мл.

Антигенные свойства. Штамм обладает гемагглютинирующей способностью. Эритроциты гуся агглютинируют в широкой зоне рН - от 6,0 до 7,0 при оптимальном рН 6,2. Титр гемагглютионов колеблется от 1:2560 до 1:5120. При серологической идентификации в РСК и РТГА штамм - Каз-20 пт показывает антигенное родство со штаммом вируса клещевого энцефалита Софьин, но отличается высокой антигенной и иммуно- генной активностью.

Штамм № Каз-20 пт при иммунизации лабораторных животных вызывает образование комплементосвязывающих, антиге- магглютинирующих, преципитирующих и вируснейтрализующих антител.

У больных людей с остролихорадочными заболеваниями в сыворотках крови также выявляются комплементосвязывающие, антигемагглютинирующие, преципитирую- щие и вируснейтрализующие антитела к штамму № Каз-20 пт.

0 Патогенные свойства штамма для животных. Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных и взрослых белых мышей при е.нутримозговом заражении. Инфекционные титры достигают 7,5 Ig LD 50/0,02 мл

5 и 6,8 Ig LD 50/0,03 соответственно.

Патогенные свойства штамма вируса клещевого энцефалита N; Каз-20 пт для людей. Штамм является патогенным и для человека.Приобследовании

0 остролихорадочных больных роль его в инфекционной патологии установлена в 13 случаях. Данные подтверждены лабораторными исследованиями с применением диаг- ностикумов, приготовленных из штамма №

5 Каз-20 пт.

Как показывают результаты в РСК и РТГА с антигеном штамма Каз-20 пт, специфические антитела в сыворотках крови больных выявляются в 2,7 и 1,4 раза соот0 ветственно чаще по сравнению с антигеном из эталонного штамма клещевого энцефалита Софьин и в более высоких титрах.

Диагностический препарат антиген из штамма № Каз-20 пт получают путем внут5 римозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, взятых на высоте клинических проявлений заболевания, готовят антиген путем сахарозо-ацето- новой экстракции.

0 Диагностическую иммунную асцитную жидкость готовят по известному методу С.Я.Гайдамович.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

5 П р и м е р 1. Материал для исследования - сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и реконвалесценции, Проводят постановку

0 серологических реакций - РСК и РТГА с использованием сахарозо-ацетонового антигена, приготовленного из штамма вируса клещевого энцефалита № Каз-20 пт. Реакцию оставляют по общепринятому спо5 собу - микрометодом на аппарате Такачи.

Результаты исследования сыворотки больного приведены в табл. 3.

Таким образом, использование предлагаемого штамма для приготовления диагностических препаратов способствовало

повышению диагностической эффективности лабораторных исследований больных клещевым энцефалитом.

Пример 2. Материал для исследования - 10%-ные суспензии из клещей, собранных в природных очагах клещевого энцефалита. Проводят постановку РИГА с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе иммунной асцитной жидкости из предлагаемого штамма вируса Каз-20 пти эталонного Софьин. РИГА ставят по общепринятой методике (табл. 4).

0

Как показывают результаты исследования, препараты, приготовленные из предлагаемого штамма Каз-20 пт, позволяют в короткий срок и с максимальной достоверностью провести идентификацию вируса клещевого энцефалита в клещах по сравнению с препаратами из эталонного штамма Софьин.

Формула изобретени.

Штамм вируса клещевого энцефалита ГКВ № 871 для приготовления диагностических препаратов.

Таблица

Изобретение относится к вирусологии. Целью изобретения является оригинальный штамм вируса клещевого энцефалита, обладающий повышенной антигенной и иммуно- генной активностью. Штамм вируса клещевого энцефалита № Каэ-20 пт (ГКВ

Примечание, числитель - обратная величина титра антител, знаменатель - обратная величина титра антигена.

Примечание. Обратная величина титра антител.

15

Та бл и ца2

ТаблицаЗ