Штамм вируса лихорадки долины Сырдарьи для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1991 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к вирусологии.

Штамм вируса лихорадки долины Сырдарьи № Каз-4909 км хранится в лаборатории трансмиссивных вирусных инфекций НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава Казахской ССР и в государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР под номером 810.

Цель изобретения - повышение антигенной и иммуногенной активности для диагностических препаратов для лабораторной диагностики лихорадки долины Сырдарьи у людей.

При идентификации штамма № Каз - 4909 км по реакции связывания комплемента с набором иммунных асцитных жидкостей к вирусам, относящимся к различным группам, установлена его антигенная связь со штаммом вируса лихорадки долины Сырдарьи LEIV - Каз-3 Бол (табл. 1).

Предлагаемый штамм вируса лихорадки долины Сырдарьи № Каз-4909 км имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику.

Морфологические признаки. При фильтрации вируссодержащей суспензии через миллипоровые фильтры размером 100 и 500 нм снижения инфекционного титра не наблюдается. Обработка вируссодержащей мозговой суспензии дезоксихолалатом натрия и хлороформом не приводит к снижению титра вируса.

На основании морфологических, мор- фогенетических и антигенных признаков изолированный штамм вируса относят к семейству Plcornavlrldae, антигенной группе энцефаломиокардита,-штамму вируса лихорадки долины Сырдарьи.

Культуральные свойства. При заражении перевиваемых культур клеток Vero, СПЭВ, ВНК-21 штаммов Мг Каз-4909 км ци- топатологического действия не наступает, но титр вируса в культуральной жидкости достигает 4,0-5,0 Ig LDso/0,02 мл.

Адаптационные свойства. Исходный штамм вируса лихорадки долины Сырдарьи № Каз-4909 км выделен от комаров Anopheles maculipennls, адаптирован к организму 1-2-дневных белых мышей,прошел 6 пассажей. Инкубационный период составляет 8 дн при первичном заражении и сокращается до 3-4 дн в последующих пассажах. Инфекционный титр составляет 8,51 Ig LD/0,02 мл. При заражении взрослых мышей в мозг гибель животных наступает на 4-5 день, а под кожу на 6-7 день с титром 7,5 Ig LD/0,03 мл.

Антигенные свойства. Штамм не обладает гемагглютинирующей способностью. Сахароацетоновый антиген штамма не вызывает агглютинацию эритроцитов гуся, барана, морских свинок и бельгх мышей. При серологической идентификации в РСК штамм № Каз-4909 км показывает антигенное родство со штаммом вируса лихорадки долины Сырдарьи, но отличается более высокой антигенной и иммуногенной активностью.

При иммунизации лабораторных животных штамм № Каз-4909 км вызывает образование комплементсвяэывающих и вирусонейтрализующих антител.

У больных людей с остролихорадочными заболеваниями в, сыворотках крови также выявляет комплементсвязывающие, преципитирующие и вируснейтрализующие антитела к штамму № Каз-4909 км.

Патогенные свойства штамма для животных. Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных и взрослых белых мышей при заражении в мозг и под кожу, с инфекционным титром 8,5 Ig LD/0,02 мл и 7,51 lgLD/0,03 мл соответственно.

Патогенные свойства штамма вируса лихорадки долины Сырдарьи.

Штамм является патогенным и для

человека. При обследовании остролихорадочных больных роль его в инфекционной патологии установлена в 5 случаях. Данные подтверждены лабораторными исследованиями с применением диагностикумов, приготовленных из этого штамма.

Как показывают результаты в РСК и РДПА с антигеном штамма № Каз-4909 км специфические антитела в сыворотках крови людей выявляются в 2 и 2,5 раза соответственно чаще по сравнению с антигеном из штамма вируса лихорадки долины Сырдарьи LEIV - Каз-3 Бол и в более высоких титрах.

Диагностический препарат антиген из

штамма № Каз-4909 км получают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, взятых на высоте клинических проявлений заболеваний, готовят антиген путем сахарозо-ацетоновой экстракции.

Диагностическую иммунную асцитную жидкость готовят по известному методу.

Изобретение иллюстрируется следующим примером.

Пример 1. Лабораторная диагностика заболеваний человека, вызванных вирусом лихорадки долины Сырдарьи, с использованием диагностикумов, приготовленных из

штамма вируса № Каз-4909 км.

Материал для исследования - сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и реконвалесценции. Проводят постановку серологических реакций - РСК, РДПА с использованием сахарозо-ацетонового антигена, приготовленного из штамма вируса лихорадки долины Сырдарьи № Каз-4909 км.

Реакцию ставят по общепринятому способу - микрометодом на аппарате Такачи.

Результаты исследования сыворотки крови больного приведены в табл. 2.

5 Таким образом, использование предлагаемого штамма для приготовления диаг- ностикума способствует повышению диагностической эффективности лабораторных исследований больных лихорадкой долины Сырдарьи.

Пример 2. Идентификация вируса лихорадки долины Сырдарьи в биологических объектах.

Материал для исследования - 10%-ная суспензия из клещей и комаров, собранных в природных очагах арбовирусных инфекций. Проводят постановку РИГА с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе иммунной асцитной жидкости из предлагаемого штамма вируса ЛДСД № Каз-4909 км и известного штамма LEIV-Каз-З Бол. РИГА ставится по известной методике (табл. 3).

0

Как показывают результаты исследования, препараты, приготовленные из предлагаемого штамма № Каз-4909 км, позволяет в короткий срок и с максимальной достоверностью провести идентификацию вируса лихорадки долины Сырдарьи в биологических объектах.

Формула изобретения

Штамм вируса лихорадки долины Сырдарьи ГКВ № 870 для приготовления диагностических препаратов.

Таблица

Изобретение относится к вирусологии. Целью изобретения является повышение оптической и иммуногенной активности диагностических препаратов для лабораторной диагностики лихорадки долины Сырдарьи у людей. Оригинальный штамм вируса лихорадки долины Сырдарьи № Каз- 4909 км (ГКВ № 810) изолирован от комаров Anopheles macullpennls. Штамм прошел 6 пассажей, инкубационный период составляет 3-4 дня на новорожденных белых мышах. Инфекционный титр достигает 8,1 Ig LDso/0,02 мл. Взаимодействие штамма с культурами клеток СПЭВ, ВНК-21, Vero ци- топатологического действия не вызывает, но титр вируса в культуральной жидкости достигает 4,0-5,0 Ig LDso/0,02 мл, Штамм не обладает гемагглютинирующей способностью. Штамм не чувствителен к де- зоксихолату натрия и хлороформу. Штамм № Каз-4909 км показал антигенное родство с вирусом лихорадки долины Сырдарьи штаммом LEIV - Каз-3 Бол, но отличается высокой антигенной и иммуногенной активностью. Штамм используется для приготовления специфических препаратов (антигена, иммунной асцитной жидкости), которые употребляются при идентификации вновь выявленных штаммов вируса лихорадки долины Сырдарьи, повышения диагностической эффективности лабораторных исследований больных лихорадкой долины Сырдарьи и изучения иммунологической структуры населения, домашних и диких животных. 3 табл. Ј О СА) 4 ч| Ю

Примечание. Числитель - обратная величина титра антител,

знаменатель - обратная величина титра антигена.

Таблица2

ТаблицаЗ