Способ постановки реакции коагглютинации Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к микробиологии и иммунологии, в частност к клинической микробиологии и имму нологии, и предназначается для диагностики инфекционных болезней выявления специфических антигенов экспериментальных исследованиях. Целью изобрегения является повы шение чувствительности и упрощение способа. Способ осуществляют следующим образом. Используют коммерческую или специально приготовленную кроличью сыворотку, специфическую к исследуемому антигену. Готовят двукратны ее разведения на фосфатно-солевом буфере (ФСБ) рН 7,4 от 1:2 до 1:10000,.0,1 мл каждого разведения сыворотки смешивают с 0,9 мл 10%-н взвеси формалинизированного стафйло (Кокка (0,5% формальдегида, З7с -3ч) прогретого (80 С - 1 ч) штамма Stapho aureus Cowan 1. Смесь сыворотки и стафилококка тщательно перемепмвают в течение 1-2 мин при комнатной температуре и доводя .ФСБ до 1%-ной концентрации. КонечшГге разведения сыворотки в этих диагностикумах составляют от 1:200 до 1:1000000. . . На обезжиренные предметные стек расчерченные карандашом по стеклу, наносят по 1 капле диагностикума и 1 капле тест-антигена, взятого в концентрации 1 мг/мл и далее в десятикратных разведениях от 10 до 10 мг/мл. Смесь осторожно пере мепшвают покачиванием стекол в течение 2-5 мин и учитывают результа Предельное разведение сыворотки при котором полученный на ее основе диагностикум дает отчетливую (на 2 и 3ц.) РКА на стекле, исполь зуют для приготовления диагностику ма для реакции каагглютинации на планшетах. Дпя этого 0,1 мл подобранного разведения сыворотки смешивают с vO,9 мл 10%-ной взвеси стафилококка пёремеайвают и разводят 10,0 мп ФСБ, На полистироловые планшеты с ( -образным Дном лунок помещают по 1 капле диагностикума и по 1 капле исследуемого антигена, взятого в различных разведениях от до 10 мг/мл. Планшеты осторожно встряхивают, инкубируют во влажной камере при 37 С 2 ч, затем оставляют при комнатной температуре во влажной камере на 4-18 ч. Учет результатов реакции осуществляется по 4 -крестной системе: - равномерный зонтик по всему дну лунки, 3 зонтик по всему дну, в центре небольшой осадок стафилококка, 2 небольшой зонтик и осадок стафилококка, 1 - маленький зонтик вокруг значительного осадка стафилококков, отрицательно - отсутствие зонтика при выраженном осадке стафилококков в центре лунки, надосаДочная жидкость прозрачна. Пример. Сравнительное определение чувствительности реакции коагглютинации на стекле и планшетах. А. Определение растворимых антигенов легионелл В реакции коагглютинации на планшетах и на стекле был испытан липополисахарид (ЛПС) L. pneumophiFae 1 серотипа в концентрации 1 мг/мл и последующих десятикратных разведениях до 10 мг/мл. Для приготовления диагностикума для постановки РКА на планшетах использовались кроличья сыворотка против легионелл того же штампа в конечном разведении 1 10000. Результаты постановки РКА на план шетах и стеклах представлены в .таб-.i лице. Установлено, что чувствительность РКА на планшетах значительно, на 3 порядка, вьш1е, чем при постановке ее на стекле. При этом для приготовления диагностикума для РКА на стекле необходимо брать конечные разведения сыворотки не более чем 1:500, для РКА на планшетах 1:10000, т.е. в 20 раз меньшие коли-; чества.

311824004

Определение ЛПС легионелл в реакции коагглютинации

СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ КОАГГЛЮТИНАЦИИ, включающий предварительную сенсибилизацию клеток стафилококка Cowan 1 специфической к исследуемому антигену сывороткой с последующим добавлением к полученному диагностикуму исследуемого антигена, инкубированием и учетом результатов реакции, о т л и ч а ющ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, сенсибилизацию стафилококка проводят сывороткой в разведении, предельном для данной реакции, проводимой на стекле, а реакцию ставят на планшетах с U-образным дном (Л лунок.