Способ определения серотонина и гистамина в биологических объектах Советский патент 1987 года по МПК G01N33/52 G01N33/48 

Изобретение относится к клинической медицине и может быть использовано в клинических биохимических лабораториях.

Цель изобретения - повышение чувствительности и упрощение способа за счет использования цветореагента ал- локсана.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску исследуемого биологического материала гомогенизируют, центри- .фугируют, супернатант и стандартные растворы серотонина и гистамина наносят на пластину с силуфолом и проводят хроматографию в системе растворителей этанол:уксусная кислотагвода 5:3 : 2. После этого пластины высушивают, проявляют 3-5%-ным раствором аллоксана в диметилформамиде, нагревают 3-5 мин при 100-105 С, элюиру- ют проявленные участки диметилформа- мидом, спектрофотометрируют и рассчитывают содержание сероТонина и гистамина .

Пример 1. Навеску ткани 50 мг тщательно гомогенизируют в 1 мл дважды дистиллированной воды. Гомогенат

о

центрифугируют в течение 30 мин при

3000 об/мин. На линию старта пластины 30 Д-0,000363

Содержание гистамина ,

силуфола УФ 254 наносят 5 пятен надо- садочной жидкости (0,03 мл) и Два , пятна 0,1% стандартных растворов серотонина - креатинин сульфата и гистамина дигидрохлорида. Хроматограммы помещают в систему растворителей этанол - уксусная кислота - вода (5:3:2). После прохождения раствори-, телам 10-11 см пластины вынимают, высушивают и проявляют раствором п

35

Дс

где Д - оптическая плотность анали зируемых растворовj оптическая плотность стандартных растворов. Получили результаты . 0,333. Д сер. 0,204. . 0,469. Д гист. 0,046.

0,204-0,000261 - д .-6 . Содержание серотонина 1;)У,оУ-Ш мкг/г.

Содержание гистамина

П р им е р 2. Количественное определение серотонина и гистамина в ;крови. Из пальца набирают 0,1 мл крови и переносят в пробирку с 0,2 мл (0,4 н.НСЮ . Пробу центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об/мин. На линию старта пластины силуфола наносят 0,04 мл надосадочной жидкости и два пятна стандартных растворов серотонина и гистамина. Дальнейшие операции те же, что в примере 1, за исключением того, что используют 5%- ный раствор аллоксана в ДМФА, нагревают 5 мин при . Параллельно

0,046- 0,000363 ПС . 1п-е / 57469

наносят на пластины силу .0,04 мл стандартных раст тонина и гистамина.

Расчет количественно СП серотонина и гистамина в дят по формулам

;: Д Содержание серотонина

Содержание гистамина 55 Получали результаты . 0,140. Д сер. 0,273 ДрГист. 0,197. Д гист. О,193.

аллоксана в диметилформамиде (ДМФА) с последующим нагреванием в сушильном шкафу при 100°С в течение 3 мин.- Окрашенные пятна соскабливают, переносят в отдельные пробирки и в каждую из них добавляют 3 мл ДМФА. Содержимое {1робирок нагревают в кипящей водяной бане в течение 3 мин, охлаждают и переносят в кюветы толщиной слоя 1 см для спектрофотомет- рирования. Параллельно наносят на пластины силуфола по 0,03 мл стандартных растворов серотонина и гистамина и проводят те же манипуляции.

Для спектрофотометрирования контролем является опыт с соскобом сорбента. Измерение оптической плотности анализируемых проб и стандартных растворов -проводят на фоне контроля

при помощи спектрофотометра при 470 им для серотонина и 465 нм-для гистамина. «.

-Расчет количественного содержания серотонина и гистамина в гомогенате

ткани (в мкг/г ткани) проводят по формулам .

„ .000261 Содержание серотонина ;;1

о

Содержание гистамина ,

Дс

где Д - оптическая плотность анализируемых растворовj оптическая плотность стандартных растворов. Получили результаты . 0,333. Д сер. 0,204. . 0,469. Д гист. 0,046.

наносят на пластины силуфола по .0,04 мл стандартных растворов серотонина и гистамина.

Расчет количественного содержания П серотонина и гистамина в крови проводят по формулам

;: Д 0,00003913 Содержание серотонина .

Содержание гистамина 5 Получали результаты . 0,140. Д сер. 0,273 ДрГист. 0,197. Д гист. О,193.

Дс

00005 445

Д„

0,,,00003913 ,, . .-б , Содержание серотонина /Ь,3 10 мкг/мл.

О,193-0,00005445 ., ,, .„- , Содержание гистамина 7о7 53,34-10 мкг/мл.

и I .7 /

П р и. м е р 3. Количественное определение серотонина и гистамина в гомогенате ткани проводят так же, как в примере 1, но с использованием 4%- ного раствора аллоксана в ДМФЛ и вре мени нагревания 4 мин при .

серотонина

гистамина

Oj 202;:g ogg26i

0,330

2A2 5 0ipoo363

0,468

Формула изобретения

Способ определения серотонина и гистамина в биологических объектах путем обработки биологической пробы химическим реагентом и разделения серотонина и гистамина с последующим спектрофотометрированием, отлича- 2

ющийся тем, что, с делью упро щения и повышения чувствительности

Редактор А. Ревин

Составитель Н.Гуляева

Техред Л. Сердюков а Корректор С.Шекмар

Заказ 7893/39Тираж 798Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

10

Получали результаты . 0,330. Д сер. 0,202. . 0,468.. Д гист. 0,045.

159,76

10 мкг/г.

0ipoo363

0,468

35,1210 мкг/г.

способа, пробу наносят на пластину с силуфолом, проводят разделение серо- 20 тонина и гистамина тонкослойной хроматографией, пластины обрабатывают 3-5%-ным раствором аллоксана в диме- тилформамиде, затем выдерживают 3-5 мин при 100-105 С, а проявленные 25 участки хроматограмм элюируют диме- тилформамидом.

Изобретение относится к клинической биохимии. С целью повьшения чувствительности и упрощения определения серотонина и гистамина навеску биологического материала гомогенизируют, центрифугируют. Супернатант и контрольные раствЬры серотонина, гистамина наносят на пластину с силуфолом и хроматографиругот в системе этанол - уксусная кислота - вода (5:3:2). Пластины сушат, проявляют 3-5%-ным раствором аллоксана в диметилформамиде, нагревают 3-5 мин при 100-105°С. Участки хроматограмм элюируют диметил- формамидом и спектрофотометрируют. Кд со о: