Способ фракционирования антибиотика спирамицина на его составляющие. Советский патент 1958 года по МПК A61K31/7036 

Предлагается несколько способов выделения кристаллических антибиотиков.

Первый способ заключается в использовании метода распределения противотоком, например, в аппарате Крейга.

Второй способ заключается в проведении сепарации путем хроматографии на окиси алюминия. Для отделения спирамицина I от спирамицинов II и III целесообразно применять хороший растворитель спирамнцина, например бензол или эфирДля отделения спирамицина II от спирамицина III используют слабый растворитель спирамицинов, например смесь циклогексана и бензола или циклогексана и эфира.

Третий способ (дающий наилучшие результаты) заключается в проведении грубого разделения оснований с последующей очисткой противоточной экстракцией или хроматографированием на окиси алюминия.

Пример. 20 г спирамицина в-виде необработанного основания фракционируют в аппарате Крейга, состоящем из 60 камер, емкостью 200 см каждая. В качестве растворителя применяют обе сепарированные фазы следующей смеси:

бензол1 объем

буферный раствор: рН 6,47 (РО-.Н2К-6, 3.5 г PO--.HNa2. 12Н2О--7, 14 г; воды qs - 1л).

В каждую камеру аппарата Крейга, помещенного в (Среду с постоянной температурой 24°, загружают 100 см водной фазы и растворяют спирамицин в 200 см бензола. Затем производят фракционированное

разделение по общепринятой технологии. В первую камеру вводят 100 см раствора спирамицина в бензольной среде, встряхивают, осветляют и переводят бензольную фазу из второй камеры в третью, а из первой камеры во вторую. Фракционирование продолжают, вводя после каждого осветления в первую камеру 100 см бензольной фазы.

После проведения 59 последовательных перемещений разделение можно считать законченным.

Компоненты встречаются в чистом виде в растворах соответственно следующих камер:

Спирамицин I - камеры 5-15

Спирамиции II - 21-28

Спирамицин III - 35-45

Бензольные растворы, содержащие одинаковые компоненты в чистом виде, собирают, растворитель удаляют посредством дистилляции под пониженным давлением, а осадок после дистилляции высушивают в вакууме. В результате получают спирамицина I - 7,8 г, спирамицина II - 2,7 г, спирамицина III - 3,4 г с константами, приведенны.ми в таблице.

ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА СПИРАМИЦИНОВ I, II и III

Пример 2. 100 г- спирамицина в виде необработанного основания растворяют при температуре кипения в 120 см бензола, раствор охлаждают до 10° и в течение 15 час. подвергают медленному встряхиванию; полученные кристаллы центрифугируют, промывают 30 см бензола и просушивают, в результате чего получают первую фракцию кристаллов.

Маточники, к которым добавляют фильтрат после промывки, упаривают в вакууме до 60 см, и полученный раствор подвергают кристаллизации, как было указано, в результате чего получают вторую фракцию кристаллов.

Третья фракция получает,ся путем выпаривания досуха маточных вод. 50 г первой фракции перекристаллизовывают из 100 см бензола, как было указано, полученные кристаллы промывают 20 см. бензола и высушивают. Получают 29 г кристаллического продукта.

Третья перекристаллизация описанното продукта из 40 см бензола позволяет получить 14 г кристаллов, содержащих только смесь спирамицинов II и III, с содержанием спирамицина II 56Vo (по весу).

25 г основания, обогащенного спирамицином I и содержащегося во фракции 1, растворяют в 125 см эфира и раствор хроматографируют на колонке с окисью алюминия (вес окиси алюминия 500 г, диаметр ко.гюнки 28 мм). После пропускания эфирного раствора хроматограмму проявляют в эфире с тем, чтобы удалить спирамицины II и III, затем элюируют спирамицин I пропусканием через колонку эфирноанетоновон смеси (с объемным соотношением 1:1).

В результате получают спирамицин I с константами, приведеаньши в таблице примера 1.

20 г спирамицина II и 1П, полученного тремя последовательными кристаллизациями и имеющего следующий состав: 56Vo по весу спирамицина II, 44% по весу спирамицина III, фракционируют в аппарате Крейга по методике, описанной в примере 1.

Оба компонента содержатся в чистом виде в растворах, взятых из следующих камер:

спирамицин П - из камер от 6 до 15 спирамицин III от 21 до 31

Бензольные растворы, соответствующие этим двум группам камер, высушивают и полученные основания крнста.ллизуют из бензола так же, как в примере 1.

Получают 7,2 г спирамицина II и 5,1 г спирамицина 1И в кристаллическом виде с константами, приведенными в таблице примера 1.

Пример 3. 50 г кристаллизованной смеси спирамицинов II и III, приготовленной как в примере 2, со следующим составом:

56 вес. % спирамицина II, 44 вес. % спирамицина III растворякзт в 450 сл{3 смеси циклогексан-эфира (2:1 по объему) и хроматографяруют на колонке с окисью алюмяния (вес окиси алюминия 600 г, диаметр колонки 35 мм). Хроматограмму проявляют сначала той же смесью циклогексап-эфир, затем последовательно эфиром и смесью эфирацетон (1:1 по объему).

Фракцию, полученную при проявлении смесью циклогексан-эфир, упаривают под пониженным давлением и осадок высушивают, а затем кристаллизуют из 12 см бензола, как указано в примере 1. При этом получают 4 г спирамицина III в виде кристаллического основания.

Обработка таким же способом фракции, полученной при проявлении смесью эфир-ацетон, с последующей кристаллизацией по указанному в примере 1 способу дает 5,8 г спирамицина II в виде кристаллического основания.

Константы обоих соединений соответствуют приведенным в таблице примера 1.

Пример 4. 50 г спирамицина в виде необработанного основания растворяют в 500 см бензола и раствор хроматографируют на колонке, содержащей 750 е окиси алюминия (диаметр колонки 40 мм. После .пропускания бензольного раствора, хроматограмму проявляют в бензо- 3 -№ 118401

№ 118401- 4 -

ле, в результате чего спирамицины II и 1П полностью элюируются. Затем для проявления используют смесь бензол-ацетои (1:3 по объему), в результате чете элюируется опирамицин L Он имеет константы, приведенные в таблице примера 1.

При пО|Следующей хроматографии смеси оснований фракций 1 и 2 по методу, приведенному в примере 3, можно получить основаимя спирамицинов II и III в кристаллическом виде.

Предмет изобретения

2.Видоизменение способа по п. 1, отличающееся тем, что, первую стадию фракционирования спирамицина проводят методом хроматограф ического разделения на гидроокиси алюминия, с последующим экстрагированием и другой обработкой по п. 13.Видоизменение способа по п. 1, отличающееся тем, что фракционирование спирамицина проводят путем последовательных перекристаллизапий в органических растворителях.