Способ стимуляции полиморфоядерных лейкоцитов Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано в клинической практике для определения состояния функциональной активности полш4орфоядерных лейкоцитов (далее ПЛ) у больных с легочной патологией.

Цель изобретения - повьшение функциональной активности лейкоцитов и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

У пациентов из пальца берут каплю крови в гепаринизированные стандарт- ные стеклянные капилляры. Герметично закрытые капилляры с кровью центрифугируют 3 мин при 1500 об/мин. При «этом на границе плазмы - эритроциты образуется слой ПЛ (полиморфоядерных лейкоци ов). Осторожно отрезают капилляр до уровня расположения лейкоцитов.. Отверстие, противоположное лейкоцитарному столбику, герметизируют расплавленным сургучом. Для постановки методики необходимы опытная и контрольная агарозные среды. Растворяют агарозу в деионизированной воде до концентрации 25 мг/мл, прогревают при 100°С в течение 20 мин, охлаждают до 50°С и добавляют прогретый до 50 с равный объем двукратной среды Игла MEM с 20%-ной телячьей сывороткой в контрольные и пластиковые чашки, разливают по 5 мл приготовленной агарозы. Затем согласно предлагаемому способу в опытные чашки разливают агарозу, предварительно добавив в нее раствор иммуностимулятора в определенной концентрации, например 0,06%-ный раствор аскорбиновой кислоты (АК) из расчета 7-12 мг конечной ее концентрации в агарозе. После застывания агарозы с помощью шприца и иглы, диаметр которой равен диаметру капилляра, делают лунки, в которые вставляют капилляры е ПЛ. Чашки инкубируют 2,5-3 ч при 37 G во влажной атмосфере 5% COg и 95% воздуха. МиграциЕО клеток до и после взаимодействия с АК оценивают с помощью окуляр-микрометра. 1 змеряют дистанцию продвижения ПЛ в трех противоположных направлениях и определяют среднюю величину как в стимулированных, так и в нестимуллированных АК ПЛ. Для определения индекса стимуляции миграции (далее ИСМ) вычисляют соотношение

952452

между средней дистанцией стимуллированных и нестимуллированных ПЛ. ИСМ позволяет определять способность Ш1 воспринимать стимулирующее : влияние

5 иммуномодуляторов, в ча|СТности АК. Методика позволяет произвести под-бор иммуномодуляторов, которые наиболее эффективно влияют на функциональную активность ПЛ, что является

10 важным критерием в подборе лекарственных веществ при лечении больных с заболеваниями легких, в патогенезе которых доминирующим является фагоцитоз.

15 Пример 1. Донор крови Качалов Д.А., 25 лет, поступил на донорский пункт. Донору было проведено клиническое обследование. Заключение терапевта: донор умеренного

20 питания, нормального телосложения, кожные покровы чистые, тургор кожи хороший, слизистые влажные розовые. Лимфоузлы во всех группах не пальпируются. Печень - у края реберной

25 дуги. Живот на всем протяжении мягкий, безболезненный. Пульс - 78 уд/мин хорошего наполнения и напряжения. В сердце тоны ясные, чистые. На всем протяжении легочных полей перкуторный звук не изменен, дыхание везикулярное. Общий анализ крови: Э - 5 млн; Гемоглобин 140 г/л; Лейкоциты 6-10 л; Э - 1,П-3; С-64; Л-30; М-6; СОЭ - 2 мм/ч. Общий анализ мочи без патологии. Исходя из результатов клинического обследования следует, что донор, взятый для проведения иммунологического обследо. вания, практи ески здоров. В дальнейшей работе по обследованию больных с легочной патологией данные показатели считать нормой.

Иммунологическое исследование крови выполнено согласно предлагаемому способу: определение миграции ПЛ до взаимодействия крови с АК при инл убации 3ч при 37°С; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия с АК также при инкубации

3 ч при 37С; определение миграции ПЛ крови до взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при , Таким образом, постановка реакции определения миграции ПЛ до взаимодействия с АК равнялась 6,7 усл.ед., а

СПОСОБ СТШУЛЯЦИИ ПОЛИМОР.ФОЯДЕРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ путем постановки реакции миграции полиморфоядерных лейкоцитов в агарозе в присутствии стимулятора с последующим учетом полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения функциональной активности лейкоцитов и ускорения способа, в качестве стимулятора используют аскорбиновую кислоту в конечной концентрации ее в агарозе 7-12 мг.% при этом аскорбиновую кислоту добавляют непосредственно в агарозу и реакцию ставят в Течение 2,5-3 ч. с S