ГИДРОХЛОРИД 4,5-ДИФЕНИЛ-2-ЭТИЛТИОИМИДАЗОЛА, ОБЛАДАЮЩИЙ СТРЕСС-ПРОТЕКТИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ПОВЫШАЮЩИЙ УСТОЙЧИВОСТЬ ОРГАНИЗМА К ГИПОКСИИ Советский патент 1996 года по МПК C07D233/84 A61K31/415 

Изобретение относится к органической химии, а именно к гидрохлориду 4,5-дифенил-2-этилтиоимидазола формулы I

обладающему стресс-протективной активностью и повышающему устойчивость организма к гипоксии.

Целью изобретения является повышение стресс-протективной активности и поиск новых соединений в ряду 2-алкилтиоимидазолов, обладающих наряду со стресс-протективной активностью способностью повышать устойчивость организма к гипоксии.

П р и м е р. Смешивают 5 г (19,8 ммоль) тщательно измельченного 4,5-дифенил-2-меркаптоимидазола, 40 мл спирта и 26 мл 1н водного раствора едкого натра (26 ммоль) и продолжают перемешивать до полного растворения. Прибавляют раствор 1,8 мл иодистого этила (22,3 ммоль) в 16 мл спирта и перемешивают. Через 2-3 мин образуется густая кашица белых кристаллов. Реакционную массу оставляют на ночь при комнатной температуре, выдерживают 2 ч в холодильнике, фильтруют, осадок промывают охлажденным до 0^o C водным спиртом (1: 1), (3х5 мл) и водой (3х10 мл) и сушат при 90^o C. Получают основание 4,5-дифенил-2-этилмеркаптоимидазола, выход 4,24 г (76,3%) - блестящие бледно-желтые кристаллы, т.пл 191-192^o C (с разложением).

Для превращения в гидрохлорид основание (13,4 ммоль) растирают в порошок, смешивают с 21 мл эфира и постепенно прибавляют при перемешивании 1,5 мл концентрированной соляной кислоты (16,4 ммоль). Первоначально образуется желтовато-белое масло, которое при растирании кристаллизуется. Фильтруют, осадок промывают эфиром (3х10 мл) и сушат при 110^o С. Получают гидрохлорид 4,5-дифенил-2-этилтиоимидазола, выход 4,52 г (94%), бледно-желтые кристаллы. Вещество очищают перекристаллизацией из 25 мл 0,1н соляной кислоты. Вещество очищают перекристаллизацией из 25 мл 0,1 н соляной кислоты с добавлением 0,1 г активированного угля. Соединение кристаллизуется в виде пучков длинных белых игл с чуть желтоватым оттенком. Фильтруют, осадок промывают 0,1н соляной кислотой и сушат при 90^o C. Получают 4,06 г гидрохлорида 4,5-дифенил-2-этилтиоимидазола, белые кристаллы, т.пл. 213-214^o C. Полученное соединение устойчиво при хранении, не гидроскопично, не растворяется в воде при кипячении, легко растворяется при кипячении в этиловом спирте, не растворяется на холоду и легко растворяется при кипячении в изопропиловом спирте и 0,1н соляной кислоте.

Соединение 1 однородно согласно данным тонкослойной хроматографии (адсорбент силуфол, растворитель для нанесения этиловый спирт, подвижный растворитель хлороформбензол концентрированный водный аммиак, 70:40:1). R_f 0,19, пятно с яркой силой флуоресценции в УФ-свете.

УФ-спектр в спирте, λ_макс(lgε): 221 (4,297), 269 (4,227). Строение вещества подтверждается также данными спектра ПМР потенциометрического титрования щелочью в водном спирте и данными элементного анализа.

Спектр-ПМР в ДМСО-d⁶, концентрация 12% 60 MF_ц, τ, м.д. Ar-H 2,39-2,85 (м, 10 Н), 6,33-6,69 (м. 2Н, СH₂), 8,59, 8,70, 8,83 (т, 3Н, СH₃).

Найдено: ЭЗ17 (потенциометрическое титрование в 70%-ном водном спирте). Вычислено: ЭЗ20.

Найдено, C 64,04, 64,15; H 5,66, 5,65; Cl 10,95, 11,06; N 8,51, 8,64.

C₁₇H₁₇ClN₂S.

Вычислено, C 64,44; H 5,41; Cl 11,19; N 8,84; S 10,12.

Исследование стресс-протективной активности гидрохлорида 4,5-дифенил-2-этилтиоимидазола.

В качестве модели дозированного стресса используют методику лишения мышей сна, пищи и воды в медленно вращающемся барабане (0,2 км в 1 ч). Опыты выполняют на 50 мышах-самцах. Одновременно исследуют две группы животных. После суточного пребывания в барабане животным предоставляют суточный отдых, пищу и воду, после чего они снова помещаются в барабан. Указанную последовательность событий сохраняют до гибели большинства животных контрольной группы. Исследуемый препарат вводят на протяжении всего эксперимента два раза в сутки подкожно в дозе 10 мг/кг. Контрольные животные получают в те же сроки физиологический раствор. Влияние препарата на выживаемость животных в условиях длительного стресса приведено в табл. 1.

В качестве сравниваемого соединения используют 4,5-дифенил-2-пропилмеркаптоимидазол (соединение II). Статистическую обработку результатов проводят методами непараметрической статистики по точному критерию Фишера. Полученные данные свидетельствуют, что профилактическое применение препарата в условиях длительного стресса более чем в два раза увеличивает выживаемость животных в этих условиях (P≅0,05) и превосходит по силе действия известное соединение II).

Исследование влияния препарата на показатели функциональной активности центральной нервной системы (ЦНС) было проведено с помощью методики "открытого поля", по совокупности всех поведенческих проявлений (горизонтальной и вертикальной двигательной активности, норкового рефлекса и груминга). В результате установлено, что введение препарата в стресс-протективной дозе 10 мг/кг подкожно не оказывает достоверного влияния на исследованный показатель, характеризующий функциональную активность ЦНС. Влияние препарата на общую поведенческую активность животных в обычных условиях приведено в табл. 2.

Таким образом, соединение 1 обладает выраженным стресс-протективным действием без депримирующего влияния на показатели функциональной активности ЦНС при профилактическом приеме.

Изучение противогипоксической активности.

Оценку и изучение противогипоксической активности исследуемого соединения проводят на двух моделях гипоксии: гипоксической и гемической. Гипоксическую гипоксию воспроизводят "подъемом" животных в барокамере на высоту 11000 м. Подъем осуществляют по схеме: за 1 мин 5000 м, а остальные 6000 м со скоростью 1000 м/мин.

Гемическую гипоксию моделируют внутрибрюшинным введением 2%-ного раствора нитрита натрия в дозе 2000 мг/кг веса тела. Все опыты проводят на белых мышах весом 18-22 г и крысах весом 170-220 г. Препарат вводят внутрибрюшинно в дозе 25,50 и 100 мг/кг в виде суспензии на твине 80 за 1 ч до моделируемой гипоксии. Контрольным животным вводят такой же объем физиологического раствора на твине 80. Регистрируют процент выживаемости животных в опыте и контроле. Наблюдение в барокамере ведут в течение 45 мин с момента подъема и на заданную высоту. Опытная группа (20 животных) достигает заданной высоты, однако в первые 10 мин до 10% исследуемых мышей погибает. В контрольной группе (20 животных) все мыши погибают во время подъема на высоту 11000 м. Наибольшую выживаемость регистpируют при введении животным исследуемого препарата в дозе 100 мг/кг 90% в дозе 50 мг/кг 70% а в дозе 25 мг/кг 60% Сопоставляя эти данные с результатами противогипоксической активности гутимина, который защищает от гипоксии лишь 40-45% животных в дозе 100 мг/кг, можно отметить, что соединение I обладает большей эффективностью.

Опыты на крысах свидетельствуют, что исследуемое соединение I проявляет активность и на более крупных животных. Так, при "подъеме" в барокамере крыс, которым за 1 ч до "подъема" вводят препарат в дозе 25,50 и 100 мг/кг обнаружено, что выживаемость на высоте 11000 м составляет 70% при введении препарата в дозе 100 мг/кг и 60% в дозе 50 и 25 мг/кг (по 20 животным в группе). Гутимин защищает от гибели 60% животных в дозе 100 мг/кг и 40% в дозе 50 мг/кг.

При исследовании антигипоксической активности соединения на модели с нитратом натрия установлено, что контрольные мыши погибают в течение 30 мин, в то время как животные, которым предварительно вводят соединение 1 в дозе 100 мг/кг, выживают. Так, через 1 ч зарегистрировано 80% через сутки 10% выживаемости, в то время как гутимин дает лишь 40% выживаемости через 1 ч и 0% через сутки. В каждой группе исследуют 20 животных. Сравнение и обработку результатов производят с помощью критерия "хи квадрат".

Таким образом, установлено, что предлагаемое соединение обладает выраженным противогипоксическим действием и превосходит известный антигипоксант гутимин.

В результате проведенных исследований установлено также, что ни в одной из доз (25,50 и 100 мг/кг) соединение II не оказывает достоверного влияния на показатели выживаемости животных при всех исследованных формах гипоксий (гемической, гипоксической), животные мыши, крысы.

Острую токсичность соединения I определяют на мышах. Препарат вводят внутрибрюшинно. Статистическую обработку полученных данных проводят по методу Верекса. Найдено, что ЛД₅₀ соединения I равно 1150 мг/кг массы животного (ЛД₅₀ соединения II 1250 мгкг). Эти данные указывают на относительно низкую токсичность изучаемого вещества и достаточную фармакологическую широту.

Таким образом, предлагаемое соединение I обладает выраженной стресс-протективной активностью и повышает устойчивость организма в гипоксии. Кроме того, оно выгодно отличается отсутствием депримирующего влияния на показатели функциональной активности ЦНС.

Гидрохлорид 4,5-дифенил-2-этилтиоимидазола формулы

обладающий стресс-протективной активностью и повышающий устойчивость организма к гипоксии.

Гидрохлорид 4,5-дифенил-2-этилтиоимидазола формулы

обладающий стресс-протективной активностью и повышающий устойчивость организма к гипоксии.