Изобретение относится к новому химическому соединению -3-бензоилфенилметилтио-1,2,4-триазино[5,6-в] индолу, обладающему способностью повышать устойчивость организма к гипоксии, которое может найти применение в медицине.
Из ближайших аналогов известны 3-тио-и 3-алкилтио-1,2,4-триазино[5,6-в] индолы [1]
Сведения о биологической активности этих соединений в литературе отсутствуют.
Известны производные 3-амино-1,2,4-триазино[5,6-в]-индолов, обладающие антивирусной активностью [2-4]
Среди веществ, являющихся антигипоксантами, известен гутимин [5]
Целью изобретения является расширение арсенала средств, повышающих резистентность к различным видам гипоксии.
Указанная цель достигается описываемым 5-бензолилфенилметилтио-1,2,4-триазино(5,6-в) индолом формулы
обладающим противогипоксической активностью.
Вещество представляет собой кристаллический порошок желтовато-розового цвета, т. пл. 219oС, после многократной перекристаллизации из бутилового спирта 221oС. Не растворяется в воде, трудно растворяется в ацетоне, спирте и эфире, растворяется в диметилсульфоксиде, устойчиво при хранении, не гигроскопично.
Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии. Для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.
Условия тонкослойной хроматографии. Адсорбент-окись алюминия II степени активности, растворитель для нанесения ацетон, подвижный растворитель - гексан-спирт 4:1,Rf=0,24.
Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, а также ИК и УФ-спектров.
УФ-спектр, λмакс, нм, (lg E): 265 (4,71), 346(4,18). УФ-спектр измерен для 3,64•10-5 М раствора в спирте, содержащем 0,16% диметилсульфоксида по объему на приборе СФ-20. Спектр сходен со спектром 3-метилтио-1,2,4-триазино[5,6-в] -индола, положение полос поглощения характерно для производных триазиноиндола с ароматическим строением триазинового ядра.
ИК-спектр, ν см-1: 430 (сл), 452 (сл.), 505 (оч.сл) 520/ (оч. сл), 555(сл), 588(сл), 641,670 (сл), 693/сл), 700 (оч.с.) 740 (с), 760 (с.), 780, 810 (сл.), 840 (оч. сл), 863 (оч. сл), 932 (оч.сл), 946 (оч. сл), 978 (сл.), 1000, 1010, 1020 (сл.), 1030 (оч.сл) 1092 (оч. с) 1125 (сл), 1176 (оч. с) 1227, 1272 (с), 1341 (оч. с.), 1402 (сл.), 1420, 1452, 1541 (сл.), 1579 (оч. с.). 1599 (оч. с.), 1630 (сл.), 1680 (оч. с.) 3090 (шир.), 3165, 3180, 3210.
ИК-спектр снят в таблетке КВг на приборе UR-20. В спектре содержится полоса карбонильной группы при 1680 см-1 Названное соединение получают обычным методом- при обработке 3-меркапто-1,2,4-триазино[5,6-в] индола бромистым дезилом
Реакцию проводят путем нагревания эквимолекулярных количеств исходных веществ в спирте. Выделяющуюся бромистоводородную кислоту нейтрализуют водным аммиаком. Выход продукта реакции 60-65%
Найдено, С 69, 88; 70, 12; Н 4,22; 4,08; N 14,43; 14,56; S 8,19; 8,08; С23H16N4OS. Вычислено, С 69,68; Н 4,07; N 14,13, S 8,09.
Пример. Смешивают 4,04 г 3-меркапто-1,2,4-триазино(5,6-в)-индола 6,2 г бромистого дезила и 100 мл безводного спирта и при перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 6 ч. Охлаждают до 20oС и нейтрализуют 22% -ным водным аммиаком (приблизительно равным1,7 мл). При этом окраска раствора изменяется от красной до коричневой, а окраска осадка от желтой до желтовато-розовой. Фильтруют, осадок промывают спиртом (2х5 мл), эфиром(2х15 мл) и сушат под вакуумом при 80oС над фосфорным ангидридом. Выход продукта реакции 5,0 г (63% от теор.), т. пл. 219oС. После перекристаллизации из бутилового спирта (около 30 мл на 1 г) мелкие желтовато-розовые кристаллы, т. пл. 221oС.
Противогипоксическая активность. Специфическая противогипоксическая активность изучалась на 3 моделях гипоксии: гипоксической без гиперкапнии, гемической и тканевой (гистотоксической).
Гипоксическая гипоксия создавалась подъемом животных в барокамере с непрерывной приточно-вытяжной вентиляцией на высоту 11000 м. Схема подъема: за первую минуту 5000 м, каждые последующие 1000 м в 1 мин до необходимой высоты. Наблюдение за животными велось в течение 45 мин с момента достижения заданной высоты.
Гемическая гипоксия моделировалась внутрибрюшинным введением 2%-ного раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг веса тела.
Гистотоксическая или тканевая гипоксия воспроизводилась введением животным цианистого калия внутрибрюшинно в дозе 18 мг/кг.
Все опыты проводились на белых мышах-самках, весом 18-22 г. Препарат вводился внутрибрюшинно в дозе 10, 25, 50 и 1000 мг/кг за 60 мин до моделируемой гироксии в виде тонкой суспензии на твине-80. Контрольным животным вводился такой же объем физиологического раствора на твине -80. Регистрировали выживаемости в опыте и контроле. На модели гипоксической гипоксии в барокамере использовали гутимин (прототип), который вводили за час до подъема в дозе 50 мг/кг.
Результаты исследований показали, что часть контрольных мышей погибает в первые 3-4 мин т. е. в момент подъема на 9,5-10 км (10-15%) Большая часть животных достигает 11 км и погибает в течение 3-5 мин пребывания на заданной высоте. И совсем незначительная часть контрольных животных жила на этой высоте более 10 мин. Животные опытной группы достигали высоты 11 км, однако у 10% животных наступала гибель в сроки одинаковые с контролем, т.е. в первые 3-5 мин пребывания на высоте 11000 м. Предварительное введение препарата в дозе 50 и 100 мг/кг позволило поддержать жизнь животным в течение 45 мин у 90% мышей, в то время как гутимин повысил устойчивость в гипоксии лишь у 45 животных.
Результаты исследования противогипоксической активности препарата на модели с нитритом натрия показали, что профилактическое введение препарата защищает 60% испытуемых животных. Следует отметить, что после введения нитрита натрия контрольным животным наступила гибель в течение 60 мин, причем 20% погибло в первые 30 мин наблюдения, а 80% контрольных животных к 60-й мин.
В опытной группе животных зарегистрировано 40% погибших животных к 60-й мин. Остальные 60% продолжали жить и на следующие сутки.
При изучении антигипоксической активности препарата на модели гистотоксической гипоксии обнаружено, что при профилактическом введении препарата судороги развивались значительно позже, чем у контрольных животных. Так, после введения цианистого калия в течение первых 4 мин погибло 40% контрольных животных, а в последующие 25 мин погибли все оставшиеся животные. В опытной группе животных судороги начинались на 20-22 мин и за 2,5 ч наблюдения погибло 40 животных, остальные 60 опытных мышей выживали на следующий день.
Определение токсичности.
Острая токсичность вещества определялась на мышах. Препарат вводился внутрибрюшинно в виде тонкой суспензии в твине 80.
Статистическая обработка полученных данных производилась по методу Беренса. Обнаружено, что LD50 равно 1450 мг/кг, т.е. оптимальная доза составляет 1/145 от LD50.
Результаты приведены в таблице.
Таким образом, установлено, что 3-бензоилфенилметилтио-1,2,4-триазино[5,6-в]-индол обладает высокой биологической активностью и повышает устойчивость к различным видам гипоксии. Вещество является малотоксичным, обладает достаточной фармакологической широтой.
3-Бензоилфенилметилтио-1,2,4-триазино[5,6-в]индол формулы
повышающий устойчивость организма к гипоксии.
3-Бензоилфенилметилтио-1,2,4-триазино(5,6-b)индол формулы
повышающий устойчивость организма к гипоксии.
