ГИДРОХЛОРИД 3-(2-ДИЭТИЛАМИНОЭТИЛТИО)-9-МЕТИЛ-1,2,4-ТРИАЗИНО/6,5-В/ ИНДОЛА, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/04 A61K31/53 

Данное изобретение относится к новому производному 1,2,4-триазино/6,5-в/индола, а именно к гидрохлориду 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино/6,5-в/индола формулы I
(I)
обладающему противогипоксической активностью.

Стуктурными аналогами соединения I являются производные 1,2,4-триазино/6,5/индола формул II и III [1,2]
(II) и (III)
Наиболее активным среди этих соединений является дигидрохлорид 3-этилтио-5-(2-диэтиламиноэтил)-1,2,4-триазино/6,5-в/индола (III), обладающий противовоспалительной активностью и повышающий устойчивость организма к гипоксии [1]
Целью данного изобретения является увеличение активности в осложненных условиях гипоксической гипоксии и уменьшение токсичности.

Поставленная цель достигается гидрохлоридом 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино/6,5-в/индола формулы I, обладающим противогипоксической активностью, более выраженной по сравнению со структурным аналогом III в осложненных условиях гипоксической гипоксии, и менее токсичным, чем III.

Способ получения соединения 1 основан на известной реакции алкилирования и заключается во взаимодействии 2,3-дигидро-9-метил-1,2,4-триазино/6,5-в/индолтиона-3 с гидрохлоридом 2-диэтиламиноэтилхлорида в присутствии избытка щелочи.

Вещество формулы I представляет собой зеленовато-желтый кристаллический порошок, трудно растворимый в воде (растворимость 3,3%), нерастворимый в метиловом и этиловом спиртах при комнатной температуре, при нагревании легко растворим в этаноле, умеренно в метаноле. Вещество устойчиво при хранении, не гигроскопично.

Вещество 1 однородно по данным тонкослойной хроматографии, для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.

Условия тонкослойной хроматографии. Абсорбент окись алюминия, растворитель для нанесения хлороформ, подвижный растворитель бензол-спирт 7,5:1, R_f 0,78. Вещество как в видимом, так и в УФ-свете не содержит примесей, в том числе исходных веществ.

Строение подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования щелочью в водном растворе, а также УФ-спектра.

Пример. К раствору 4,16 г (19,4 ммоль) 2,3-дигидро-9-метил-1,2,4-триазино/6,5-в/индола в 560 мл 1 н. раствора едкого натра прибавляют раствор 4,4 г /2,75 ммоль/ гидрохлорида 2-диэтиламиноэтилхлорида в 24 мл воды и оставляют на ночь при комнатной температуре. Вскоре после смешивания из раствора выделяются мелкие желтые иглы продукта реакции. Фильтруют, осадок промывают ледяной водой /5х20 мл/ и сушат в вакууме над едким натром. Получают техническое основание 3-/2-диэтиламиноэтилтио/-9-метил-1,2,4-триазино-/6,5-в/индола, выход 5,82 г /96% от теории/, т.пл. 82^oC. По данным ТСХ исходное вещество отсутствует: адсорбент окись алюминия, растворитель для нанесения ацетон, подвижный растворитель бензол-спирт, 10:1, R_f 0,71. 5 г основания растворяют в 80 мл ацетона и при перемешивании насыщают полученный раствор газообразным безводным хлористым водородом. Выпавший осадок отфильтровывают, осадок промывают ацетоном /6x8 мл/ и сушат в вакуум-эксикаторе над хлористым кальцием. Получают соединение I в виде грязно-желтых кристаллов, выход 5,16 г, его очищают перекристаллизацией из метилового спирта /48 мл/г/ и получают в виде ярко-желтых кристаллов, т.пл. 266^oC. Выход при перекристаллизации 78%
Найдено, C 54,15, 54,20; H 6,26; Cl 10,27, 10,42; N 19,79, 19,66; S 9,04, 9,33, M 355 (потенциометрическое титрование щелочью). С₁₅H₂₀ClN₅S. Вычислено, C 54,61; H 6,30; Cl 10,08; N 19,90; S 9,11. M 351,9.

УФ-спектр в воде, λ_макс, нм/lg E/: 217/4,339/, 270/4,552/, 302/ пл. 3,769/, 336/3,994/, 430/3,286/, положение полос поглощения характерно для производных 1,2,4-триазино/6,5-o/индола с ароматическим строением триазинового ядра [2]
Оценку и изучение противогипоксической активности соединения I проводили на двух моделях гипоксии: гипоксической и гемической.

Гипоксическую гипоксию воспроизводили подъемом животных в барокамере с использованием приточно-вытяжной вентиляции на высоту 11 000 м. Наблюдение за испытуемыми животными вели в течение 45 мин с момента достижения заданной высоты. Регистрировали выживаемость животных в опыте и контроле (в).

Гемическую гипоксию моделировали внутрибрюшинным введением 2%-ного раствора нитрата натрия в дозе 200 мг/кг.

Кроме того, исследовали противогипоксическую активность соединения в осложненных условиях путем предварительного введения животным подкожно изадрина в дозе 80 мг/кг массы тела.

Все опыты проведены на белых мышах-самцах, весом 18-22 г и крысах весом 180-210 г. Соединение I вводили внутрибрюшинно в дозе 12,5; 25; 50 и 100 мг/кг за 1 ч до моделируемой гипоксии в виде тонкой суспензии на твине-80. Контрольным животным вводили такой же объем физиологического раствора на твине-80. Результаты сравнивали с биологической активностью дигидрохлорида 3-этилтио-5/2-диэтиламиноэтил/-1,2,4-триазино/6,5-в/индола (III).

В результате исследования установлено, что профилактическое введение соединения I в дозе 100,50 и 25 мг/кг защищает от гибели от 45 до 70% животных на высоте 11 000 м. 18-20% исследуемых животных погибает в первые 5-10 мин пребывания на этой высоте. Введение этого соединения в дозе 12,5 мг/кг позволило сохранить жизнь в течение 45 мин 60% исследуемых животных.

Сопоставительный анализ полученных данных позволяет выявить некоторые преимущества соединения I по отношению к известному III. Так, если при гипоксической гипоксии обнаружена "защита" от гибели веществом III 50-45-60 и 70% исследуемых мышей в дозе 12,5, 25,50 и 100 мг/кг, то в тех же дозах вещество I "защищает" 60-70-70 т 80% животных, в то время как в контроле выживает лишь 10% исследуемых животных. Биологические испытания были обнаружено наличие защитного эффекта и на этом виде животных, хотя и менее значительного, чем на мышах. Так, выживаемость на высоте 12 000 м составила 65% в то время как у известного соединения III зарегистрировано 60% выживших крыс /P < 0,01/.

В осложненных условиях исследовали активность не только соединения I, но и соединения III. В этой серии опытов крысам предварительно за 1 сут до подъема в барокамере вводили подкожно изадрин в дозе 80 мг/кг. В результате обнаружено, что животные, которым вводили вещество I, погибают значительно позже. Так, если после введения изадрина животные гибнут на высоте 12 000 м в течение 7,0±1,3 мин, то предварительное введение вещества I удлиняет им жизнь до 24±1,2 мин на той же высоте. Вещество III лишь восстанавливает длительность жизни исследуемых животных до уровня контрольных, т.е. 10 мин.

Результаты определения противогипоксической активности на модели гемической гипоксии с нитритом натрия показали, что профилактическое введение вещества I в дозе 12,5, 25, 50 кг/кг увеличивает продолжительность жизни мышей соответственно до 37,4±3,4; 44,1±5,4; 46,6±4,8 мин.

Соединение III в соответствующих дозах увеличивало длительность жизни до 40±4,6, 48±1,4 и 31,2±3,6 мин. Различия недостоверны при дозах 12,5 и 25 мг/кг, а в дозе 50 мг/кг достоверны при Р 0,05 /по критерию Пирсона "хи-квадрат"/ (табл. 2).

Определение острой токсичности проводили на белых мышах весом 18-22 г при внутрибрюшинном введении вещества в виде тонкой суспензии на твине-80. Установлено, что LD₅₀ для соединения I в данных условиях составила 378,3±7,2 мг/кг. Статистическая обработка полученных данных проводилась по методу Беренса.

LD₅₀ соединение III 156±7,7 мг/кг [1]
Таким образом, вещество I более активно при гипоксической гипоксии и проявляет высокую активность в осложеннных условиях в сравнении с известным соединением III /табл. 1 и 3/ и обладает меньшей, чем соединение III, токсичностью.

Гидрохлорид 2-(2-диэтиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино(6,5-в)индола формулы

обладающий противогипоксической активностью.

Гидрохлорид 2-(2-диэтиламиноэтилтио)-9-метил-1,2,4-триазино(6,5-в)индола формулы

обладающий противогипоксической активностью.