Настоящее изобретение относится к новому производному 1,2,4-триазино [5,6-в] индола, повышающему устойчивость организма к гипоксии и которое может найти применение в качестве антигипоксического средства.
Известно применение гутимина в качестве средства, повышающего устойчивость организма к гипоксии [1]
Цель изобретения новое производное 1,2,4-триазино[5,6-в] индола, обладающее более высокой антигипоксической активностью;
Поставленная цель достигается гидрохлоридом 3-[2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино [5,6,-в] индола
повышающим устойчивость организма к гипоксии.
Способ получения соединения по изобретению аналогичен известному [2] и включает аминоалкилирование 3-меркапто-1,2,4-триазино [5,6-в] индола гидрохлоридом 2-диэтиламиноэтилхлорида в воде в присутствии щелочи и переводом полученного основания в гидрохлорид действием хлористого водорода.
Нижеследующие примеры иллюстрируют получение соединения по изобретению и его противогипоксическую активность и токсичность.
Пример. К раствору 5,12 г /25,3 ммоль/ 3-меркапто-1,2,4-триазино [5,6-в] индола в 62 мл 1 н. раствора едкого натра постепенно прибавляют при перемешивании раствор 4,8 г /28,2 ммоль/ гидрохлорид 2-диэтиламиноэтилхлорида в 12 мл воды. По окончании добавления выпадает желтый осадок. Суспензию выдерживают при комнатной температуре в течение 3,5 часов, фильтруют, осадок промывают ледяной водой /2х6 мл/ и сушат в вакууме над хлоридом кальция.
Получают сырое основание 3-/2-диэтиламиноэтилтио/-1,2,4-триазино [5,6-в] индола в виде светло-коричневых комков, выход 7,1 г /93%/. Основание очищают перекристаллизацией из 110 мл спирта. Осадок фильтруют, промывают спиртом /2х8 мл/, эфиром /2х2,5 мл/ и сушат. Получают основание в виде зеленовато-желтого порошка, мас. 4,28 г, т. пл. 221o.
Выход при перекристаллизации 60,3%
Раствор основания в 52 мл пропилового спирта при кипячении с обратным холодильником и перемешивании насыщают газообразным безводным хлористым водородом. Полученную студнеобразную массу растирают в ступке с 160 мл безводного эфира, осадок фильтруют, отжимают и сушат при 100oС. Основание превращается в гидрохлорид почти количественно.
Таким образом, общий выход сырого гидрохлорида, составляет 56% После перекристаллизации из спирта /около 9,8 мл на 1 г/ получают гидрохлорид в виде желтых кристаллов, т. пл. 242oС. Выход при перекристаллизации 87%
Трудно растворяется в воде, в спирте на холоду растворяется умеренно, при нагревании легко. Вещество устойчиво при хранении, негигроскопично.
Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии. Для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.
Условия тонкослойной хроматографии: Адсорбент окись алюминия 11 степени активности, растворитель для нанесения метиловый спирт, подвижный растворитель бензол-спирт, 10:1, Rf 0,48.
Вещество как в видимом, так и в УФ- свете не содержит примесей, в том числе исходных веществ.
Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования щелочью, а также ПМР и УФ- спектров.
Найдено, С 53,16; 53,02. Н 5,70; 5,90. Сl 10,76; 10,81. N 20,57; 20,45; S 9,30; 9,21. М 334 /потенциометрическое титрование водного раствора водного раствора щелочью/.
С15H20ClN5S.
Вычислено С 53,32, Н 5,97, Сl 10,49, N 20,73, S 9,49, M 338.
Спектр ПМР в Д2О r м.д. ArН 2,67 3,30/м. 4Н/, СН2N, CH2S 6,71-6,94/м. 8Н/, CH3 8,60,8,69, 8,80 /т, 6Н/. Спектр снят на приборе Брукер-90.
УФ-спектр, λмакс.нм /lgE/: 265 /4,473/, 342/4,073/. УФ- спектр снят для раствора в воде на приборе СФ-20. Положение полос поглощения характерно для 3-S-алкильных производных 1,2,4-триазино /5,6-в/ индола.
Изучение противогипоксической активности препарата.
Оценка и изучение противогипоксической активности препарата проводились на трех моделях гипоксии: гипоксической, гемической и гистотоксической /тканевой/.
Гипоксическая гипоксия воспроизводилась "подъемом" животных в барокамере с использованием приточно-вытяжной вентиляции на высоту 11000 м. Подъем на высоту совершался по схеме: 5000 м за первую минуту и каждые последующие 1000 м в 1 минуту до необходимой высоты.
Гемическая гипоксия моделировалась внутрибрюшинным введением 2% раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг веса.
Гистотоксическая гипоксия моделировалась введением животным внутрибрюшинно цианистого калия в дозе 18 мг/кг веса.
Все опыты проводились на белых мышах самцах, весом 18 22 г. Препарат вводился внутрибрюшинно в дозе 10,50 и 100 мг/кг за 1 час до моделируемой гипоксии в виде тонкой суспензии на твине 80. Контрольным животным вводился такой же объем физиологического раствора на твине. Регистрировался процент выживших животных в опыте и в контроле. В условиях опыта на модели гипоксической гипоксии без гиперкапнии использовался и гутимин, который вводился также внутрибрюшинно и за 1 час до подъема в барокамере в дозе 50 мг/кг. Наблюдение в барокамере велось в течение 45 мин с момента подъема на заданную высоту.
Результаты экспериментов показали, что часть контрольных животных погибает в 3-4 минуты, т.е. на высоте 9-10 км /10-15/ Большинство животных достигает 11 км и продолжает жить 3-5 минут на заданной высоте. Совсем незначительная часть животных живет на этой высоте в течение 10 мин. Опытная группа животных достигает 11 000 м, однако у 5-10 животных развиваются судороги и в течение 10 мин пребывания на высоте животные погибают. В последующие 5 минут погибает еще 10 мышей и в результате выживаемость на высоте 1100 м за 45 мин наблюдения составляет 80 Важно отметить, что защитный эффект обнаруживается и при использовании малых доз препарата 10 мг/кг/.
В условиях этих опытов гутимин, вводимый в дозе 50 мг/кг, защищает лишь 40% подопытных животных.
При изучении антигипоксической активности препарата на модели с нитритом натрия обнаружено, что малые дозы оказывают не менее выраженный эффект. Так, контрольные животные погибали в течение 30 минут, а опытные /60/ в течение 55 мин, причем 10 из них погибли одновременно с контрольными животными. Через сутки осталось в живых 28 опытных животных.
Профилактическое введение препарата животных с гипоксией, вызванной цианистым калием, также ослабляет судороги у мышей и увеличивает длительность их жизни. Контрольные животные погибали в течение 15 мин, а в опытной группе животных, которым предварительно вводился препарат, погибших не обнаружено. К 60-й мин наблюдения зарегистрировано 30% погибших животных, остальные 70% выжили на вторые сутки.
Определение острой токсичности.
Острая токсичность препарата определялась на мышах. Препарат вводился внутрибрюшинно в виде тонкой суспензии в твине 70. Статистическая обработка полученных данных производилась по методу Беренса. Найдено, что LD50 равно 250 мг/кг, т.е. оптимальная доза составляет 1/25 от LD50.
Таким образом, гидрохлорид 3-/2-диэтиламиноэтилтио/-1,2,4-триазино [5,6-в] индола обладает выраженным противогипоксическим действием и превосходит по активности известный препарат гутимин.
Вещество обладает низкой токсичностью и достаточной фармакологической широтой и может найти применение в качестве противогипоксического средства.
Гидрохлорид 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-в]индола
повышающий устойчивость организма к гипоксии.
Гидрохлорид 3-(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-b]индола
повышающий устойчивость организма к гипоксии.
