3-ЭТИЛТИО-5(2-ДИЭТИЛАМИНО)-ЭТИЛ-1,2,4-ТРИАЗИНО[5,6-B] ИНДОЛА ДИГИДРОХЛОРИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬОЛЮ И ПОВЫШАЮЩИЙ УСТОЙЧИВОСТЬ ОРГАНИЗМА К ГИПОКСИИ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/04 A61K31/33 

Изобретение относится к новому соединению, конкретно к 3-этилтио-5(2-диэтиламино)-этил-1,2,4-триазино[5,6-b]индола дигидрохлориду формулы I

3-этилтио-5(2-диэтиламино)-этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола дигидрохлорид является биологически активным соединением и может быть использован в качестве противовоспалительного или противогипоксического средства.

Среди нестероидных противовоспалительных средств индольного ряда широкое применение в медицинской практике получил индометацин (1-п-хлорбензоил-п-метокси-3-индолилуксусная кислота) [1]
Индометацин является активным противовоспалительным препаратом, он оказывает также анальгезирующее и жаропонижающее действие. Однако при применении индометацина возможны побочные явления: головная боль, головокружение, сонливость, зудящие сыпи, бронхоспазм, кровоточивость, гастралгии, тошнота, рвота. Препарат может оказывать ульцерогенное действие, вызывать изъявления желудка и кишечника, кровотечение из желудочно-кишечного тракта. Препарат следует применять с осторожностью у больных с психическими расстройствами. Индометацин применяется в виде капсул и драже, а также в виде свечей, так как он нерастворим в воде.

Пероральное введение индометацина с целью определения острой токсичности показало, что индометацин в дозе 1000 мг/кг не вызывал гибели животных через 24 ч. Однако при более длительном наблюдении над животными оказалось, что даже значительно меньшие дозы являются токсическими.

DL₅₀ для крыс при однонедельном пероральном введении составляет 7,5 мг/кг [2] Отмечался перитонит, вызванный утончением или перфорацией тонкой кишки у крыс, погибших от доз 4-8 мг/кг [3]
Известно также соединение (гутимин), повышающее устойчивость организма к гипоксии [4] Однако он проявляет активность лишь в высоких дозах (100 мг/кг) и защищает от гипоксической гипоксии только 40-50% животных. При других видах гипоксии гемической и гистотоксической гутимин менее активен. Вопрос о лекарственной профилактике и терапии гипоксических состояний является актуальным. В связи с широким использованием антигипоксантов в медицине (заболевания сердца стенокардия, инфаркт миокарда, острый отек легких, длительные перегрузки и т.д.) необходимо изыскание новых антигипоксантов.

Наиболее близким по строению и свойствам к соединению формулы I является гидрохлорид 3(2-диэтиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино[6,5-b]индола, формулы II

проявляющий противовоспалительную активность, повышающий физическую выносливость и устойчивость организма к гипоксии [5]
Целью настоящего изобретения является изыскание нового соединения, расширяющего арсенал средств воздействия на живой организм.

Настоящая цель достигается свойствами нового соединения формулы I, обладающего противовоспалительной активностью и повышающего устойчивость организма к гипоксии.

Синтез соединения формулы I основан на известной реакции взаимодействия солей производных индола с диэтиламиноэтилхлоридом [6] и заключается во взаимодействии натриевой соли 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b]индола с 2-диэтиламиноэтилхлоридом с последующим переводом полученного основания в гидрохлорид действием хлористого водорода.

Вещество формулы I представляет собой желтый кристаллический порошок, т. пл. 198^oC. Очень легко растворяется в воде (растворимость в воде 47,3±1%), легко растворяется в метиловом спирте, в изопропиловом и бутиловом спиртах трудно растворяется на холоде, легко при нагревании. Вещество устойчиво при хранении, не гигроскопично.

Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии, для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.

Условия тонкослойной хроматографии. Адсорбент окись алюминия, растворитель для нанесения метиловый спирт, подвижный растворитель - хлороформ-метиловый спирт, 24: 1. Rf 0,93. Адсорбент силуфол, растворитель для нанесения метиловый спирт, подвижный растворитель бензол-ацетон-эфир 18% водный аммиак 15:3:6:1:0,3 (отфильтрованный нижний слой); Rf 0,60 метиловый спирт 3 н. водный аммиак, 10:1, Rf 0,72. Вещество обнаруживают на окиси алюминия в УФ-свете, а на силуфоле, кроме того, возможно обнаружение парами иода или реактивом Драгендорфа (розовато-оранжевое пятно). Вещество как в видимом, так и в УФ-свете не содержит примесей, в том числе исходных веществ.

Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, потенциометрического титрования щелочью в водном растворе и хлорной кислотой в безводной уксусной кислоте в присутствии ацетата ртути (II), а также УФ и ПМР-спектрами.

Пример. К суспензии 16 г (69,5 ммоль) 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b]индола в 40 мл безводного спирта прибавляют при перемешивании раствор этилата натрия, приготовленный растворением 1,7 г натрия (73,9 мг-атом) в 62 мл безводного спирта. При этом вещество почти полностью растворяется. Фильтруют, раствор выпаривают досуха под вакуумом при нагревании не выше 50^oC, остаток сушат в вакуум-эксикаторе над щелочью. Получают с почти количественным выходом натриевую соль 3-этилтио-1,2,4-триазино[5,6-b] индола в виде ярко-желтых кристаллов. 13,5 г (53,5 ммоль) указанной соли смешивают с 24 мл безводного диметилформамида и 9 мл (74,5 ммоль) свежеперегнанного 2-диэтиламиноэтилхлорида и оставляют на 1 ч. При этом раствор темнеет и выпадает осадок хлорида натрия. Фильтруют, фильтрат выпаривают под вакуумом при нагревании не выше 45^oC и получают смолообразный остаток, вес 22 г. Вещество смешивают с 150 мл безводного эфира, фильтруют и насыщают фильтрат безводным хлористым водородом. Газ пропускают до полного обесцвечивания эфира. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром и ацетоном и сушат под вакуумом над фосфорным ангидридом. Получают дигидрохлорид 3-этилтио-5(2-диэтиламино)-этил-1,2,4-триазино[5,6-b] индола в виде порошка грязно-желтого цвета, выход 17 г (80,5% по отношению к исходной натриевой соли). После выкристаллизации из бутилового спирта (29,3 мл/г, выход при перекристаллизации 78% ); желтые кристаллы; т.пл. 198^oC.

Найдено, C 50,43; 50,30; H 6,32; 6,34; Cl 17,47; 17,52, N 17,29; 17,26; S 8,02; 8,12; M 406. C₁₇H₂₅Cl₁₂N₅S.

Вычислено, C 50,74; H 6,26; Cl 17,62; N 17,41; S 7,97; M 402, 4.

Биологическая активность.

Острая токсичность.

Определение острой токсичности проводилось на белых мышах массой 18-20 г при внутрибрюшинном введении препарата в виде 1% водного раствора. В данных условиях DL₅₀ для препарата составляет 156±7,7 мг/кг.

Внутрибрюшинное введение препарата в дозе 15 мг/кг в течение 6 дней не показало каких-либо видимых токсических реакций со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъязвления слизистой желудка и кишечника отмечено не было.

Напротив того, у животных, получавших индометацин наблюдались диспепсические расстройства и изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта. Животные, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг, погибли на 3-сутки.

Противовоспалительная активность.

Противовоспалительное действие препарата изучалось на белых крысах массой 180-220 г на модели асептического воспаления по методу "ватная гранулема" и белых мышах 18-20 г на модели "адреналинового" стекла легких.

Данные, полученные при введении препарата, сравнивались с данными контрольной группы и с результатами экспериментов при введении индометацина, на фиг. 1-3 даны графики влияния на экссудацию, пролиферацию и адреналиновый отек легких.

При изучении влияния препарата на экссудативные и пролиферативные компоненты асептического воспаления по методу "ватная гранулема" препарат вводили в дозе 5 и 15 мг/кг с лечебной целью в виде 1%-ного водного раствора в течение 3 дней после операций. В конце опыта животных забивали, гранулемы взвешивали в свежеотсепарированном и в высушенном до постоянной массы состоянии. Изучение активности препарата проводилось в сравнении с контрольной группой животных, куда входили животные, получавшие физиологический раствор и группа животных, которым вводился индометацин в дозе 1 и 20 мг/кг. Установлено, что препарат в дозе 5 и 15 мг/кг снижает образование жидкости и разрастание грануляционной ткани, причем он наиболее активен в дозе 15 мг/кг. Выделение экссудата во влажной гранулеме, при введении препарата в дозе 15 мг/кг, снизилось в 2,4 раза в сравнении с контрольной группой и в 1,9 раза в сравнении с группой животных, которым вводился индометацин (фиг. 1). Разрастание грануляционной ткани соответственно снизилось в 2,4 раза в сравнении с контрольной группой и в 1,7 раза с индометацином (фиг. 2).

При введении препарата в дозе 10 мг/кг в течение 6 дней не отмечено видимого токсического действия, в том числе на желудочно-кишечный тракт. Отек легких вызывался подкожным введением 0,05% раствора адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг. О развитии воспалительного процесса делали заключение по величине "коэффициента отека легких", который представляет собой отношение массы легких в граммах к 100 г массы животного.

Препарат вводился однократно, с профилактической целью за час до введения адреналина гидрохлорида, в виде 0,5% водного раствора внутрибрюшинно. Препарат в дозе 15 мг/кг увеличивает легочный коэффициент на 31,2% в сравнении с исходным, а индометацин в дозе 20 мг/кг на 63,5% (фиг. 3).

Таким образом, препарат обладает выраженным противовоспалительным действием, не уступающим и даже превосходящим по активности широко применяемый индометацин.

При более длительном введении препарата, в отличие от индометацина, не наблюдается никакого видимого токсического действия, в том числе отрицательного действия на желудочно-кишечный тракт.

Изучение противовоспалительной активности соединения I проводилось также в сравнении с противовоспалительной активностью соединения II. В результате проведенных исследований установлено, что при 6-ти дневном введении с лечебно-профилактической целью на модели "ватная гранулема" в дозах 5 мг/кг вещество II несколько уступает по активности веществу I (см. табл. 1).

Однако на другой модели воспаления (гистаминовый отек, вызванный введением 0,1%-ного раствора гистамина в плантарную поверхность задней конечности крыс) установлено, что соединения в равных дозах 15 мг/кг проявляют противовоспалительный эффект, причем соединение I данной модели превосходит по активности соединение II (см. табл. 2).

Объем конечности до введения гистамина принимали за 100% Таким образом, в результате дополнительных опытов установлено, что соединение (I) не уступает по противовоспалительной активности и даже превосходит в этом отношении известное соединение (II).

Противогипоксическая активность.

Исследование противогипоксической активности препарата проводилось на 3 видах гипоксии: гипоксической, гемической и гистотоксической или тканевой.

Гипоксическая гипоксия создавалась в барокамере "подъемом" животных на высоту 11 000 м, причем подъем осуществлялся с разной скоростью: в первую минуту 5000 м, остальные 6000 м "набирали" со скоростью 1000 м/мин. Наблюдение за животными вели в течение 45 мин с момента достижения высоты 11 000 м.

Гемическая гипоксия моделировалась внутрибрюшинным введением нитрата натрия в дозе 200 мг/кг.

Гистотоксическая гипоксия воспроизводилась внутрибрюшинным введением цианистого калия в дозе 18 мг/кг.

Все опыты проводились на белых мышах весом 18-24 г. Препарат вводили профилактически в виде тонкой суспензии в физиологическом растворе в дозах 15,2, 25, 50 и 100 мг/кг за 60 мин до подъема или затравки. Контрольным животным вводили внутрибрюшинно такой же объем физиологического раствора. Регистрировали выживаемости животных в опыте и контроле, а также длительность жизни животных. Результаты сравнивали с гутимином, который вводили внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг за 1 ч до моделируемого вида гипоксии.

В результате исследования противогипоксической активности на модели гипоксической гипоксии в барокамере обнаружено, что 15% контрольных животных не достигает высоты 11 000 м и погибает на 8-10 км, 85% животных достигает заданной высоты, но в течение 5-8 ч пребывания на ней погибают (70-75%). Около 10% выдерживает полный срок экспозиции. В опытной группе животных установлено, что препарат позволяет пережить срок экспозиции в 45 мин. 70% животных, причем защитный эффект 50-60% зарегистрирован и в малых дозах (табл. 1). Гутимин при внутрибрюшинном введении в дозе 100 мг/кг за 1 ч. до "подъема" защищает лишь 50% животных.

На модели гемической гипоксии с нитритом натрия установлено, что профилактическое введение препарата I в дозах 12,5; 25 и 50 мг/кг увеличивает продолжительность жизни. В контроле она составила 21,0±3,7 мин, в то время как после введения препарата в дозе 12,5 мг/кг 40 мин, 25 мг/кг 48±1,4 мин, 50 мг/кг 31,2 + 3,7 мин. На следующие сутки выживает от 20 до 40% животных, против 0 в контроле. Гутимин несколько удлиняет продолжительность жизни до 28,6±4,8 мин против 21,0±3,7 в контроле.

Результаты на модели гистотоксической гипоксии. Установлено, что профилактическое введение препарата задерживает гибель мышей от цианистого калия (табл. 3). Так, у контрольных животных внутрибрюшинное введение цианистого калия в дозе 18 мг/кг вызывает гибель за 13,4±2,2 мин. В опытной группе длительность жизни увеличилась более, чем в 3 раза: до 29±3,3 мин, при введении препарата в дозе 12,5 мг/кг, до 34±1,5 мин 25 мг/кг, до 43,1±1,9 мин 50 мг/кг. Из опытных животных выжило 30% на вторые сутки. Гутимин же увеличивает продолжительность жизни в 1,5-2 раза, сдвигая и время наступления судорог к 10-й минуте против 3- 5 мин. в контроле. Эффективная доза препарата не превышает 1/1, от ДЛ₅₀.

Противогипоксическая активность соединения I по сравнению c cоединением II исследована на других более "жестких" моделях гипоксии. При "подъеме" белых крыс в барокамере на высоту 12 км выживаемость в контроле составила 0% т. е. отсутствовала. При внутрибрюшинном введении вещества I в дозе 50 мг/кг выживаемость в этих условиях составила 60% а для известного соединения II - 40% Различия достоверны при Р 0,1 по критерию Пирсона "хи" квадрат. При затравке белых мышей окисью углерода 15 мг/л в воздухе в течение 20 мин выживаемость в контроле составила 12,5% При введении вещества I выживаемость равна 25% а известного соединения II 0% Различия достоверны при Р 0,05 по критерию Пирсона.

Таким образом вещество I несколько более активно при гипоксической гипоксии и значительно более активно при гемической гипоксии, чем известное соединение II.

3-Этилтио-5(2-диэтиламино)-этил-1,2,4- триазино[5,6-в] индола дигидрохлорид формулы

обладающий противовоспалительной активностью и повышающий устойчивость организма к гипоксии.

3-Этилтио-5(2-диэтиламино)-этил-1,2,4- триазино[5,6-в]индола дигидрохлорид формулы

обладающий противовоспалительной активностью и повышающий устойчивость организма к гипоксии.