ГИДРОХЛОРИД 3-(2-МОРФОЛИНОЭТИЛТИО)-1,2,4-ТРИАЗИНО (6,5-B) ИНДОЛА, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/04 A61K31/40 A61K31/53 A61K31/535 

Изобретение относится к новому биологически активному соединению, а именно гидрохлориду 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино(6,50-b)индола формулы I:

проявляющему противогипоксическую и противовоспалительную активность.

Указанное устройство позволяет предполагать возможность применения этого соединения в медицине.

Известна гуанилтиомочевина (гутимин), обладающая противогипоксической активностью [1]
Широкое применение в медицине в качестве противовоспалительного средства находит также 1-(n-хлорбензоил)-5-метокси-2-метилиндол-3-уксусная кислота (индометацин) формулы III (2):

Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Поставленная цель достигается новым гидрохлоридом 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4,-триазино(6,5-b)индола формулы I в качестве вещества, обладающего противогипоксической и противовоспалительной активностью.

Соединение формулы I получают взаимодействием 2,3-дигидро-1,2,4-триазино(6,5-b)индола с эквимолекулярным количеством гидробромида 2-морфолиноэтилбромида в присутствии избытка щелочи с последующим переводом свободного основания в гидрохлорид обработкой хлористым водородом.

Аминоалкилирование проводят при комнатной температуре. Выход целевого продукта 73%
Схема процесса:

Соединение формулы I представляет собой лимонно-желтый кристаллический порошок, т. пл. 246^oC. Легко растворимо в воде (растворимость 35%), трудно растворяется в ацетонитриле, метиловом, изопропиловом и бутиловом спиртах, умеренно в пропиловом спирте, при кипении не растворяется в ацетонитриле. Вещество устойчиво при хранении, не гигроскопично.

Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии, для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.

Условия тонкослойной хроматографии: адсорбент окись алюминия, растворитель для нанесения метиловый спирт, подвижный растворитель - бензол-спирт, 7,5:1, R_f 0,39.

УФ-спектр в воде, λ_макс; нм (lgε): 213,5 (4,383), 266 (4,459), 302 (3,793), 336 (3,943), 414 (3,220).

Спектр ПМР в D₂O, 100 МГц, t м.д.

Ar H 2,88-3,42 (м. 4Н),
CH₂S, CH₂N, CH₂O 5,90-7,81 (м. 12Н).

Найдено, С 50,97, 50,77; Н 5,52, 5,48; Cl 10,03, 10,10; N 19,76, 19,66; S 9,36, 9,34; C₁₅H₁₈ClN₅OS. Вычислено, С 51,21; H 5,16; Cl 10,08; N 19,91; S 9,11.

П р и м е р. К раствору 2,19 г (10,84 ммоль) 2,3-дигидро-1,2,4-триазино(6,5-b) индолтиона-3 в 50 мл 1 н. раствора едкого натра прибавляют раствор 2,98 г (10,84 ммоль) гидробромида 2-морфолиноэтилбромида в 7 мл воды и оставляют на сутки при комнатной температуре. Прибавляют 18 г хлорида натрия, перемешивают до его растворения и извлекают хлороформом (3х17 мл). Вытяжку сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют раствоpитель под вакуумом при нагревании на водяной бане. Сырой продукт реакции получают в виде коричневой смолы, выход 3,06 г (77%). Полученное основание растворяют при кипении в 80 мл безводного спирта и, продолжая нагревание, насыщают раствор безводным хлористым водородом. При этом выпадает мелкий оранжевый осадок гидрохлорида. Суспензию охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, осадок промывают безводным спиртом (2 мл), безводным эфиром (2х4 мл) и сушат под вакуумом над фосфорным ангидридом. Получают 3,18 г гидрохлорида в виде ярко-оранжевого кристаллического порошка. Вещество очищают перекристаллизацией из смеси изопропилового спирта с водой, 8,33:1 (31,1 мл/л) и получают в виде лимонно-желтых кристаллов, т.пл. 246^oС (выход при перекристаллизации 78%).

Противогипоксическая активность.

Изучение противогипоксической активности препарата проводят на 3 моделях гипоксии: гипоксической, гемической и гистотоксической.

Гипоксическая гипоксия осуществляется "подъемом" животных в барокамере с непрерывной приточно-вытяжной вентиляцией на высоту 11000 м. Схема подъема: 5000 м за одну минуту и затем со скоростью 1000 м/мин. Наблюдение за животными ведут в течение 45 мин с момента достижения высоты. Регистрируют процент выживаемости животных на высоте за фиксированный интервал времени.

Гемическую гипоксию моделируют внутрибрюшинным введением нитрита натрия в дозе 200 мг/кг.

Гистотоксическая или тканевая гипоксия воспроизводится введением животным внутрибрюшинно цианистого калия в дозе 10 мг/кг.

Все опыты проводят на белых мышах-самцах весом 18-24 г. Соединение формулы I вводят профилактически внутрибоюшинно в виде 2%-ного водного раствора в дозе 12,5; 25,50 и 100 мг/кг за 1 ч до "подъема" ил затравки. Контрольным животным вводят такой же объем физиологического раствора внутрибрюшинно. Регистрируют процент выживаемости и длительность жизни в опытной группе и контроле. Результаты сравнивают с гутимином, который также вводят внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг за 1 ч до моделируемого вида гипоксии.

В результате исследования противогипоксической активности на модели гипоксической гипоксии обнаружено, что часть контрольных мышей погибает на 8-10 км (15%), большая же часть животных достигает высоты 11000 м и погибает в течение 5 мин (70-75% ). Остальные животные (до 10%) выживают. Опытная группа животных за редким исключением достигает заданной высоты, а гибель начинается в первые 3-8 мин пребывания на высоте (20-25%). В результате наблюдения над животными опытной группы оказалось, что соединение формулы I в дозе 100 мг/кг "защищает" от гипоксии до 80% животных в дозах 12,5; 25 и 50 мг/кг в среднем до 60%
В группе животных, которым вводят гутимин в дозе 100 мг/кг, зарегистрируют лишь 50% выживших животных.

Результаты определения противогипоксической активности соединения формулы I на модели с нитритом натрия показали, что профилактическое введение препарата в дозе 12,5; 25 и 50 мг/кг защищает от гибели в течение 1 ч 60% а через сутки до 40% животных, в то время как в контроле к концу 1-го ч остается в живых лишь 10% (таблица). Гутимин в дозе 50 мг/кг дал лишь 20% выживаемости в течение 60 мин наблюдения. Средняя продолжительность жизни животных в контроле составила 21,0±3,7 мин, тогда как в опыте увеличилась почти в 2 раза, а 40% животных выжило на следующие сутки.

Исследование антигипоксической активности на модели гистотоксической гипоксии показало, что профилактическое введение соединения формулы I предотвращает гибель мышей от цианистого калия (таблица). Внутрибрюшинное введение цианистого калия в дозе 18 мг/кг вызывает гибель животных за 10,8±3,2 мин. В опытной группе при профилактическом введении препарата в дозе 12,5; 25 и 50 мг/кг длительность жизни увеличивается почти в 4,7 раза, и судороги наступают значительно позднее, чем в контроле. На следующие сутки выжило 30% наблюдаемых животных. При профилактическом введении гутимина зарегистрировали начало судорог на 10-ой минуте после введения цианистого калия, а продолжительность жизни увеличилась почти в 2 раза.

Эффективная доза препарата не превышала 1/25 от ДЛ₅₀.

Острая токсичность.

Определение острой токсичности проводили на белых мышах массой 18-20 г при внутрибрюшинном введении препарата в виде 1%-ного водного раствора. В условиях опыта ДЛ₅₀ для препарата составляет 235 мг/кг±21,6.

Внутрибрюшинное введение соединения формулы I в дозе 15 мг/кг в течение 6 дн не показало каких-либо видимых токсических реакций со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъязвления слизистой желудка и кишечника отмечено не было.

Напротив того, у животных, получавших индометацин, наблюдались диспепсические расстройства и изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта. Животные, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг, погибли на 3-4 сут.

Противовоспалительная активность
Противовоспалительное действие соединения формулы I изучали на белых крысах массой 180-200 г на моделях термического ожога, асептического воспаления по методу "ватной гранулемы" и мышах массой 18-20 г на модели "адреналинового отека легких".

На модели термического ожога о развитии воспаления судили по увеличению объема конечности крыс после погружения ее на одну минуту в воду, нагретую до 51^oC. Объем измеряли онкометрически через 0,5; 1; 2; 4 и 24 ч. Объем конечности до ожога принимали за 100% Препарат вводили внутрибрюшинно за час до ожога в дозе 15 мг/кг. В контрольную группу входили животные, которым вводился физиологический раствор. Для сравнения был поставлен эксперимент на животных, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг. В этой дозе индометацин уже проявляет токсическое действие двигательная активность была значительно угнетена.

Соединение формулы I в дозе 15 мг/кг в виде 10%-ного водного раствора проявляет выраженное противовоспалительное действие. На протяжении 24 ч воспаление развивалось очень медленно. В данной дозе препарат проявляет выраженное действие через 0,5 ч и сохраняет его в течение всего срока наблюдения. Через 0,5 ч соединение формулы I снижает прирост объема конечности в 2,6 раза в сравнении с животными контрольной группы и в 1,4 раза в сравнении с индометацином. Через 1 ч прирост объема конечности у крыс у контрольной группы был в 3,4 раза больше, чем у животных, которым вводили препарат. Через 2 ч в 2,8 раза, через 4 ч в 2,9 раза, через 24 ч в 3 раза соединение формулы I активнее индометацина. Препарат в дозе 15 мг/кг обладает более выраженным противовоспалительным действием, чем индометацин в дозе 20 мг/кг и при этом не указывает видимого токсического действия в противоположность индометацину.

При изучении влияния соединения формулы I на экссудативные и пролиферативные компоненты асептического воспаления по методу "ватная гранулема" препарат вводят в дозах 15 и 30 мг/кг в виде 1%-ного водного раствора в течение 3 дн после операции. В конце опыта животных забивали, гранулемы взвешивали в свежеотсепарированном и в высушенном до постоянной массы состоянии. Изучение активности препарата проводят в сравнении с контрольной группой животных, куда вводят животных, получивших физиологический раствор и группой животных, которым вводят индометацин в дозе 1 и 20 мг/кг. Препарат в дозе 15 и 30 мг/кг значительно снижает образование жидкости в влажной гранулеме и разрастании соединительной ткани, причем он наиболее активен в дозе 15 мг/кг.

Выделение экссудата во влажной гранулеме при введении соединения формулы I в дозе 15 мг/кг снижается в 2,7 раза в сравнении с контрольной группой и в 1,8 раза в сравнении с группой животных, которым вводится индометацин. Разрастание грануляционной ткани соответственно снизилось в 3,5 раза в сравнении с контрольной группой и в 2,5 раза с индометацином. При введении соединения формулы I в дозе 15 мг/кг в течение 6 дней не отмечено видимого токсического действия, в том числе на желудочно-кишечный тракт. Отек легких вызывают подкожным введением 0,05%-ного раствора адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг. О развитии воспалительного процесса делают заключение по величине "коэффициента отека легких", который представляет собой отношение массы легких в граммах к 100 г массы животного. Соединение формулы I вводят однократно, с профилактической целью за час до введения адреналина гидрохлорида, в виде 0,5%-ного водного раствора внутрибрюшинно. Препарат в дозе 50 мг/кг увеличивает легочной коэффициент лишь на 2,5% в сравнении с исходным, а индометацин, введенный в тех же условиях в той же дозе, 66,3%
Таким образом, соединение формулы I обладает выражением противовоспалительным действием, превосходящим по активности широко применяемый индометацин. При более длительном введении препарата, в отличие от индометацина, не наблюдается никакого видимого токсического действия, в том числе отрицательного действия на желудочно-кишечный тракт.

Гидрохлорид 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино(6,5-6)индола формулы:

обладающий противогипоксической и противовоспалительной активностью.

Гидрохлорид 3-(2-морфолиноэтилтио)-1,2,4-триазино(6,5-6)индола формулы:

обладающий противогипоксической и противовоспалительной активностью.