ПРОИЗВОДНЫЕ 4,5-ДИГИДРОПИРРОЛО[1,2,3-Е,D]ПТЕРИДИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Советский патент 1996 года по МПК C07D487/16 A61K31/505 

Изобретение относится к производным новой гетероциклической системы пирроло[1,2,3-e, d]птеридина 4,5-дигидропирроло[1,2,3-e,d]птеридина, которые обладают противоопухолевой активностью и могут найти применение в медицине.

Цель изобретения поиск веществ с противоопухолевой активностью в ряду производных 4,5-дигидропирроло[1,2,3-e,d]птеридина и способ их получения.

П р и м е р 1. Получение 6-метил-4,5-дигидропирроло[1,2,3-е,d]птеридина (1а).

А. Получение исходного соединения-4-этоксипирроло[3,2-d]пиримидина.

К раствору 2,3 г (0,1 г-ат) металлического натрия в 25 мл абсолютного этанола добавляют 5,0 г (0,03 моль) 4-хлорпирроло[3,2-d]пиримидина и кипятят реакционную смесь при 80-85^оС в течение 20 ч. Этанол отгоняют, маслянистый остаток обрабатывают 50 мл воды, охлаждают до 0^оС, выпавший осадок отфильтровывают, промывают 15 мл воды, перекристаллизовывают из 200 мл воды.

Получают 3,2 г (60%) продукта в виде кристаллов белого цвета, хорошо растворимых в низших спиртах, этилацетате, плохо растворимых в воде, нерастворимых в гексане, гептане, т.пл. 148-149^оС.

ИК-спектр, см^-1: 3100 (NH).

Масс-спектр: М⁺ 163.

Найдено, C 58,93; H 5,71; N 26,13.

C₈H₉N₃O
Вычислено, C 58,88; H 5,56; N 25,75.

Б. Получение 4-этокси-5-( β-диметиламиноэтилпирроло[3,2-d]пиримидина дигидрохлорида.

Смесь 4,0 г (0,025 моль) 4-этоксипирроло[3,2-d]пиримидина (II), 4,5 г (0,031 моль) β-диметиламиноэтилхлорида гидрохлорида, 0,7 г (0,003 моль) триэтилбензиламмонийхлорида и 40 мл 40%-ного водного раствора едкого натра нагревают при 40-45^оС в течение 5 ч. К полученной реакционной массе добавляют 40 мл этилацетата, перемешивают при 20-25^оС в течение 10 мин. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют этилацетатом (3х40 мл). Экстракт сушат безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, этилацетат отгоняют. Полученный остаток растворяют в 30 мл абсолютного этанола, добавляют 9% -ный спиртовой раствор хлористого водорода до рН 1,0. Смесь охлаждают до 0^оС, выпавший осадок отфильтровывают, промывают 20 мл этилацетата и перекристаллизовывают из 60 мл этанола.

Получают 6,3 г (79%) продукта в виде кристаллов белого цвета, растворимых в воде, низших спиртах, нерастворимых в гексане, гептане, т.пл. 149-151^оС.

ПМР-спектр, δ, в D-ДМСО, м.д. 1,53 (3Н т СН₃СН₂О); 2,81 [6H c N(CH₃)₂] 3,59 [2H т СН₂N)CH₃)₂] 4,78 (2Н кв СН₃СН₂О); 4,93 (2Н т СН₂-N); 6,80 (Н д С₆Н); 8,27 (Н д С₇Н); 8,99 (Н с С₂Н).

Масс-спектр: М⁺ 234.

Найдено, C 44,41; H 6,87; N 17,40; Cl 21,83.

C₁₂H₁₈N₄O·2HCl ·H₂O
Вычислено, С 44,32; H 6,81; N 17,23; Cl 21,80.

В. Получение 4-оксо-5-( β-диметиламиноэтил)-3,4-дигидропирроло[3,2-d] пирими- дина дигидрохлорида.

Раствор 2,4 г (0,007 моль) 4-этокси-5-(β-диметиламиноэтилпирроло[3,2-d] пиримиди- на в 10 мл концентрированной соляной кислоты кипятят в течение 3 ч. Затем раствор упаривают досуха, к остатку добавляют 35 мл этанола, охлаждают до 0^оС, выпавший осадок отфильтровывают, промывают 15 мл этанола и из него (100 мл) перекристаллизовывают.

Получают 1,8 г 87% продукта в виде кристаллов белого цвета, растворимых в воде, слабо растворимых в низших спиртах, нерастворимых в гексане, гептане, устойчивых на воздухе, т.пл. 245-247^оС.

ИК-спектр, см^-1: 3100 (NH); 1700 (C-O).

Масс-спектр: М⁺ 206.

Найдено, C 43,01; H 5,49; N 20,02; Cl 26,09.

C₁₀H₁₄N₄O ·2HCl
Вычислено, C 43,03; H 5,78; N 20,07; Cl 25,40.

Г. Получение целевого продукта 1а.

Смесь 1,8 г (0,06 моль) 4-оксо-5-(β-диметиламиноэтил)-3,4-дигидропирроло[3,2- d] пиримидина дигидрохлорида и 100 мл хлорокиси фосфора кипятят в течение 4 ч. Раствор упаривают досуха, остаток выливают в смесь льда с 25% -ным водным раствором аммиака. Полученный раствор (рН 8,0) экстрагируют бензолом (3х40 мл). Экстракт сушат прокаленным карбонатом калия, осушитель отфильтровывают, бензол отгоняют, осадок перекристаллизовывают из 20 мл бензола.

Получают 0,7 г (62% ) продукта 1а в виде кристаллов светло-бежевого цвета, растворимых в воде, низших спиртах, бензоле, нерастворимых в гексане, гептане, устойчивых на воздухе, т.пл. 166-168^оС.

Масс-спектр: М⁺ 174.

УФ-пектр (в С₂Н₅ОН), λ_макс (lg ε), нм: 210 (4,24), 245 (3,97), 290 (4,03).

ПМР-спектр, δ, в D-ДМСО, м. д. 3,11 (3Н с N-CH₃); 3,69 и 4,29 (2Н т СН₂-СН₂); 6,36 (Н д С₂Н); 7,45 (Н д С₁Н); 8,21 (Н с С₈Н).

Найдено, C 62,15; H 5,71; N 32,45.

С₉Н₁₀N₄
Вычислено, C 62,05; H 5,79; N 32,16.

П р и м е р 2. Получение 5,6-диметил-4,5-дигидропирроло[1,2,3-e,d]птеридина (1б).

А. Получение 4-этокси-5-(β -метил- β -диметиламиноэтил пирроло[3,2-d] пиримидина дигидрохлорида.

Смесь 1,6 г (0,01 моль) 4-этоксипирроло[3,2-d]пиримидина (II), полученного в условиях примера 1а, 2,1 г (0,013 моль) β метил- β -диметиламиноэтилхлорида гидрохлорида, 0,3 г (0,001 моль) триэтилбензиламмонийхлорида и 16 мл 40%-ного водного раствора едкого натра нагревают при 40-45^оС в течение 5 ч. К реакционной смеси добавляют 20 мл воды и 20 мл бензола, перемешивают при 20-25^оС в течение 10 мин. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют бензолом (3х20 мл). Экстракт сушат прокаленным хлористым кальцием. Осушитель отфильтровывают, бензол отгоняют, остаток растворяют в 20 мл абсолютного этанола. К раствору добавляют 9%-ный спиртовой раствор хлористого водорода до рН 1,0. Охлаждают до 0^оС, выпавший осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из 40 мл этанола.

Получают 1,9 г (59%) продукта в виде кристаллов белого цвета, растворимых в воде, низших спиртах, нерастворимых в гексане, гептане, устойчивых на воздухе, т.пл. 175-177^оС.

ПМР-спектр, δ, в D-ДМСО, м.д. 1,15 (3H д -СН-); 1,51 (3Н т CН₂О); 2,79 [6H c N(CH₃)₂] 4,66-4,80 (Н м -СН₂-); 6,79 (Н д С₆Н); 8,15 (Н д С₇Н); 8,88 (Н д С₂Н).

Масс-спектр: М⁺ 248.

Найдено, C 48,70; H 6,82; N 17,36; Cl 21,96
C₁₃H₂₀N₄O ·2HCl
Вычислено, C 48,61; H 6,90; N 17,44; Cl 22,07.

Б. Получение 4-оксо-5-(β -метил-β -диметиламиноэтил)-3,4-дигидропирроло[3,2-d]пиримидина дигидрохлорида.

Раствор 1,0 г (0,003 моль) 4-этокси-5-(β метил- β -диметиламиноэтилпирроло[3,2-d] пиримидина дигидрохлорида в 10 мл концентрированной соляной кислоты кипятят в течение 1 ч. Затем раствор упаривают досуха, остаток обрабатывают 15 мл этанола, охлаждают до 0^оС. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 5 мл этанола, перекристаллизовывают из него (20 мл).

Получают 0,6 г (68%) продукта в виде кристаллов белого цвета, растворимых в воде, слабо растворимых в низших спиртах, нерастворимых в гексане, гептане, устойчивых на воздухе, т.пл. 233-236^оС.

ИК-спектр, см^-1: 3100 (NH); 1700 (С=О).

Масс-спектр: M⁺ 220.

Найдено, С 45,03; Н 6,40; N 18-50; Cl 24,17.

C₁₁H₁₆N₄O ·2HCl
Вычислено, C 45,03; H 6,18; N 19,10; Cl 24,16.

В. Получение целевого продукта (1б).

Смесь 2,0 г (0,006 моль) 4-оксо-5-(β -метил- β -диметиламиноэтил)-3,4-дигидропирроло[3,2-d] пиримидина дигидрохлорида и 120 мл хлорокиси фосфора кипятят в течение 6 ч. Раствор упаривают досуха, остаток выливают в смесь льда с 25%-ным водным раствором аммиака. Полученный раствор (рН 8,0) экстрагируют хлористым метиленом (3х15 мл). Экстракт сушат безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывают, хлористый метилен отгоняют. Осадок перекристаллизовывают из 30 мл бензола.

Получают 0,8 г (61% ) продукта 1б в виде кристаллов светло-бежевого цвета, растворимых в воде, низших спиртах, бензоле, нерастворимых в гексане, гептане, устойчивых на воздухе, т.пл. 102-105^оС.

ПМР-спектр, δ, в D-ДМСО, м.д. 1,22 (3Н д -CH-); 3,10 (3H c N-CH₃); 4,02-4,24 (Hм -СН₂-); 6,36 (Н д С₂Н); 7,42 (Н д С₁Н); 8,22 (Н д С₈Н).

Масс-спектр: М⁺ 188.

УФ-спектр (в С₂Н₅ОН), λ _макс (lg ε ), нм: 213 (4,42), 248 (4,20), 292 (4,28).

Найдено, С 63,97; Н 6,30; N 30,11.

C₁₀H₁₂N₄
Вычислено, C 63,81; H 6,43; N 29,76.

Предлагаемые соединения обладают противоопухолевой активностью.

При изучении противоопухолевых и токсических свойств соединений 1а и 1б в опытах in vivo использовано около 300 животных крыс (весом 110-130 г) и мышей (весом 20-24 г) беспородных и линии BDF₁ с перевиваемыми опухолями: саркомой Иенсена крыс, саркомами АК и 37, карциномой 755, меланомой В 16 и раком легкого Льюиса мышей. При многократном (4-8 введений) внутрибрюшинном введении (в/б) указанных соединений в изотоническом растворе натрия хлорида по известной методике оценивали торможение роста опухоли (Т,), т.е. изменение массы опухоли у животных леченой группы по сравнению с контрольной, и величину К_р изменение массы тела подопытных животных в процессе лечения сравнительно с контрольными.

Установлено, что при внутрибрюшинном введении мышам для соединений 1а и 1б однократная токсическая доза, вызывающая их гибель, равна 40 мг/кг (см. таблицу).

Как видно из таблицы, при многократном внутрибрюшинном введении в переносимых дозах соединения по изобретению не вызывают глубокого угнетения прироста массы тела животных, К_р не ниже (-10).

Соединение 1а проявляет противоопухолевую активность в отношении саркомы Иенсена крыс (процент торможения 39-41%) и более выраженную противоопухолевую активность на мышах с карциномой 755 (54-62% торможения), меланомой В 16 (39-77% торможения), а также активно на мышах с саркомой 37 (торможение роста опухоли на 50%), саркомой АК (Т 54%) и раком легкого Льюиса (Т до 62%).

Соединение 1б также проявляет противоопухолевую активность в дозах 40-50 мг/кг, тормозит рост саркомы Иенсена на 35% при введении в максимально переносимых дозах тормозит рост карциномы 755 на 30% а меланомы В 16 на 40%

1. Производные 4,5-дигидропирроло [1,2,3-e,d]птеридина общей формулы

где R - водород или метил, обладающие противоопухолевой активностью.

2. Способ получения производных 4,5-дигидропирроло[1,2,3,- e, d]птеридина общей формулы

где R - водород или метил,
отличающийся тем, что 4-этоксипирроло [3,2-d]пиримидин обрабатывают соединением общей формулы

где R имеет указанные значения,
в присутствии триэтилбензиламмонийхлорида в щелочной среде при 40 - 45^oС, выделенный дигидрохлорид соответствующего N-замещенного пирроло[3,2-d] пиримидина подвергают кислотному гидролизу при кипячении и полученное 4-оксипроизводное пирроло[3,2-d]пиримидина обрабатывают хлорокисью фосфора при кипячении.

1. Производные 4,5-дигидропирроло [1,2,3-e,d]птеридина общей формулы

где R - водород или метил, обладающие противоопухолевой активностью. 2. Способ получения производных 4,5-дигидропирроло[1,2,3,- e, d]птеридина общей формулы

где R - водород или метил,
отличающийся тем, что 4-этоксипирроло [3,2-d] пиримидин обрабатывают соединением общей формулы

где R имеет указанные значения,
в присутствии триэтилбензиламмонийхлорида в щелочной среде при 40 - 45^oС, выделенный дигидрохлорид соответствующего N-замещенного пирроло[3,2-d] пиримидина подвергают кислотному гидролизу при кипячении и полученное 4-оксипроизводное пирроло[3,2-d]пиримидина обрабатывают хлорокисью фосфора при кипячении.