Штамм бактерий @ @ =22=продуцент целлюлолитических ферментов @ и @ ,используемый для силосования соломы Советский патент 1986 года по МПК C12N9/42 C12N15/00 C12N9/42 C12R1/01 

Изобретение относится к микробиологической промьпиленности и представляет собой новый штамм бактерий, используемый в кормоприготовлении для биодеградации целлюлозы с целью повышения питательности грубых кормов, в частности для силосования соломы.

Цель изобретения - получение штамма бактерий Cellulomonas flavigena, продуцирующего целлюлолитические ферменты С, и С, при культивировании на целлюлозосодержащем сырье, в том числе на соломе как в аэробных, так и в анаэробных условиях при высокой концентрации ионов водорода.

Сущность изобретения заключается в том, что отобранньй штамм целлюло- литических бактерий - факультативный анаэроб, способен активно развиваться при использовании целлюлозы в качестве единственного источника углерода, устойчивого к кисльщ значениям рН среды.

Указанным требованиям отвечает штамм бактерий Cellulomonas flavi- gena-22.

Полученный штамм бактерий .Cellulomonas flavigena-22 имеет следую- ш;ие морфологическую и физиологичес- кую характеристики.

Штамм обладает выраженным полиморфизмом. Представляет собой неправильные палочки с закругленными концами. Длина единичных клеток 0,7-2,0 мкм и более, ширина - 0,5 мкм, с возрастом они приобретают кокковидную форму. Подвижные неспороносные грамположительные клетки легко обесцвечиваются и часто наблюдается смесь грамположительных и грамотрицательных клеток. Морфология клеток зависит от состава питательной среды, возраста культуры, температуры выращивания. На мясопептонном агаре колонии бежевого цвета, выпуклые , s-формы. Факультативньй ана- эроб. Растет при 30-35°С. Желатину разжижает , крахмал гидролизует. Раз- клетчатку. Сбраживает глюкозу.

ксилозу, арабинозу,

мальтозу, глицерин, раффинозу, сахарозу. Восстанавливает нитраты. Дает положительную реакцию йа каталазу. Штамм синтезирует целлюлолитич еские ферменты С - 2 ед/мл. С, -бед/мл. Способ определения активности С - 2 ед/мл - расщепление фильтровальной

лагает

о

Не сбраживает

см супернатант- при 50 С в

размером 1 х 6 ной жидкостью за 24 ч 0,1 М ацетатном буфере, С актив- ност и - расщепление Na -КМЦ (растворимой целлюлозы) в 0,1 М ацетатном

0

5

0

5

0

1.,0 мл

буфере при 50 С за 30 мин, супернатантной жидкости.

Культуру выращивают и хранят на столбиках 0,7%-ного соломенного агара в холодильнике при 5 С Пересевается через 20 дней. Для размножения штамма используют следующие среды: крахмальньй агар (КН2Р04 1,0j CaCl 0,1; MgS04 0,3; NaCl 0,1; 5 FeCl, 0,01; NaNO 2,5 г/л диет, воды), 0,2%-ный растворимый крахмал, 0,7%- ный агар-агар и соломенный агар (KH2PO- 0,1; СаС 0,1; MgSO 0,3; NaCl 0,1-, FeClj 0,01; NaNG, 2,5, солома 25 г/л дис.воды, 0,7%-ньй агар-агар). Температура выращивания в течение А сут.

Для получения такого штамма изучены бактерии рода Celluloraonas с конструктивным синтезом целлюлаз, выделенные из различных источников природы.

Штамм вьщелен на специальных питательных средах, содержащих в качестве единственного источника углерода целлюлозу, методом разводок. Способен развиваться в анаэробных условиях при значениях рН среды, характерных для силоса хорошего качества (рН 4,0-4,5).

Пример 1. Закладывают силос из пшеничной соломы.

Нарезанную пшеничную солому (34% целлюлозы, 0,5% крахмала) пропитьша- ют водой (на 1 кг соломы 1,5 кг воды) и смешивают с суспензией целлюлоли- тических бактерий (10 микробных клеток в 1 мл) из расчета 10 мл сус- )пензии на 0,7 кг соломы. Массу тщательно уплотняют и герметически закрьшают. Силосные ямь: вскрывают через 30 дней после закладки.

Органолептические и биохомические показатели силоса из пшеничной соломы, полученного с помощью целлюлоли- тических бактерий Cellulomonas flavigena, даны в таблице.

Силос обладал высокими органо- лептическими показателями поедае- 5 мости (70%).

Силос из пшеничной соломы, при- готовленньй без дополнительных питательных добавок с помощью целлюлоли5

0

31221240 4

тических бактерий бьш введен в рацион ственного вида корма. При кормлении

2000 голов скота в течение 30 дней были получены привесы в среднем 350 г на одну голову.

крупного рогатого скота головейской породы как в сочетании с другими видами кормов, так и в качестве единОбщая кислотность (в 50 мл силосной вытяжки)

Свободные кислоты , %

ственного вида корма. При кормлении

2000 голов скота в течение 30 дней были получены привесы в среднем 350 г на одну голову.

12,5

11,5

11,5 12,5

Штамм бактерий Cellulomonas flavigena-22 (коллекция Центрального музея промьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекци- онньй номер ЦМПН В-2559) - продуцент целлюлолитических ферментов С и С, используемый для силосования соломы.