Способ получения средства,селективно тормозящего размножение нормальных и лейкемических клеток Советский патент 1986 года по МПК A61K35/28 

I

Изобретение относится к медицине, а именно к производству средств, которые могут быть использованы как лекарственные, и касается получения средства, обладающего фармакологической активностью из сырья животного происхождения.

Целью изобретения является повышение частоты и активности целевого продукта.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. Получение фракции G1-3 из селезенки теленка.

1000 г очищенной и измельченной селезенки теленка смешивают с охлажденным до ацетоном до получения общего объема 4 л, смесь гомогенизируют при этой температуре, в течение 60 мин инкубируют и затем центрифугируют. Отделенное твердое вещество промывают ацетоном и высушивают в вакууме при 20°С.

Сухое твердое вещество экстрагируют 2 л хлороформа в течение 30 мин, затем твердое вещество отделяют, высушивают при комнатной температуре 16 ч, перемешивают 3 л дважды дистиллированной воды и затем центрифугируют с 20000 г. Отделенную жидкость лиофилизируют, лиофилизат растворяют в 0,05 М буферном растворе кислого карбоната аммония (рН-7,9) и подвергают гель-хроматографии на колонке Сефадекс (-15. Фракцию, осажденную между Yg/Yg 1,3 и 2,5, отделяют и лиофилизируют. Таким образом, получают 3,54 г концентрата эффективного вещества 01-3 в виде белого порошка.

Пример 2. Получение чистого эффективного вещества GP.

12287762

300 мг концентрата эффективного вещества G1-3, полученного по примеру 1, наносят на хроматографичес- кую бумагу ватман ЗММ, исходньй пункт

5 расположен в середине листа, и общее количество нанесенного образца распределяется по длине 30 см. Электрофорез проводят в буферной смеси из пиридина, уксусной кислоты и воды в

to объемном соотношении 90:4:900 (рН- 6,5) Б аппарате для электрофореза с горизонтальным расположением, градиентом напряжения 50 В/см и продолжительностью 2 ч. Положение кисло15 го положительно реагирующего на хлор и отрицательно на нингидрин компонента определяют по окраске хлоргидри- ном. Полученньй таким образом активный компонент элюируют с бумаги бу20 ферной смесью из уксусной, муравьиной кислот и воды в обьемном соотношении 8:2:90 (рН 1,9) ив такой же буферной смеси подвергают дополнительному электрофорезу с градиентом

25 напряжения 80 В/см и продолжительностью 90 мин. Положение активного компонента, не показывающего при этом значения рН заряда, определяют с помощью реакции хлортолидина. Этот

30 активный компонент элюируют такой же буферной смесью (рН-1,91) и элюат лиофилизируют. Таким образом, получают 8 мг чистого эффективного вещества GP в виде белого порошка.

35

40

Селективное действие 100 мг/мл GP на введение Н-тимидина в кислотой ерастворимую дезоксирибонуклеино- вую кислоту в культурах костного мозга и ThyiDus показано в табл. 1, действие G1-3 и СтР-6-в табл. 2.

Селективное действие 100 мг/мл GP на введение Н-тимидина в кислотой ерастворимую дезоксирибонуклеино- вую кислоту в культурах костного мозга и ThyiDus показано в табл. 1, действие G1-3 и СтР-6-в табл. 2.

Таблица 1

Введение Н-тими- дина в суспензионную культуру костного мозга (3-4 ч)

,

Образование колоний в капиллярах геля агара (7 дн.)

МЭК - минимальная эффективна Все значения измерены.

Все значения подсчитаны.

Полученное в соответствии с изобретением вещество GP можно применять в качестве биологически активного вещества для торможения размно

Составитель Л. Шилина Редактор И. Рыбченко Техред И.Верес

Заказ 2301/62 Тираж 660Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, Д

Таблица 2

430

2.5

7,8

90

0.2

1,6

25

женин нормальных и лейкемических вяных клеток или клеток костного га in vitro в концентрациях 0,2- 10,0 пмоль/мл.

Корректор ; С. Черни