Штамм @ @ СН-1-продуцент @ -валина Советский патент 1986 года по МПК C12P13/08 C12P13/08 C12R1/15 

t1

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой нсвый штамм Corynebacte- riura .glutamicum СН-1 , обладающий свойством продуцировать L-валин, находящий применение в медицине для приготовления аминокислотных смесей для парентерального введения, в химикофармацевтической промышленности Для синтеза гормонов белковой природы ;(ийсулина, гормона роста и т.д. а также в микробиологии и биохимии для исследовательских целей.

Цель изобретения - получение штамма Corynebacterium glutamicum CH-i, продуцирующего L-валин с большей активностью, расширяющего коллекцию штаммов - Продуцентов валина, позволяющего упростить процесс получения валина в промьпйленных масштабах вследствие значительного уменьшения количества ко1 шонентов ферментационной среды.

Схема получения штамма СогупеЬас- .terium glutamicum СН-1, C.glutamicura

АТСС 13032 (исходный штамм). (биотин7 тиамин)

отбор ауксотрофных мутантов

после обработки Ы-метил-К -нит Г ро -нитрозогуанидином (химический мутаген), уксотрофные мутанты

i отбор на продуктивность по L-валину С .glutamicum- 78 (биотин , тиамин, аргинин , 8-10 г/л L-валина)

Г отбор мутантов, устойчивых к о -аминомасляной кислоте.

1

Мутанты, устойчивые кotтаминомас ляной кислоте

I отбор на продуктивность по L-вапину

С. glutamicum АН-10 (биотин, тиамин, аргинин, устойчив к oi-аминомасляной кислоте 14-15 г/лL-валина)

отбор мутантов, устойчивых к S-2-аминоэтилцистеину. Мутанты, устойчивые к S-2-амино- э тилцистеину

на продуктивность по

1-.-валину

С. glutamicum СН-1 (биотин, тиамин, аргинин, устойчив к oi--аминомасляной кислоте

4

I

И S-2-аминоэтилцистеину, 20-22 r/j L-валина).

Штамм имеет следующие морфо-куль- туральные признаки. Клетки овальные, короткие палочки размеров 0,6 - 1,2 мк, бесспоровые, грамположитель- ные, неподвижные. На мясопептонном агаре на 3-й сутки роста образует колонии диаметром 2,0-3,0 мм, круглые с ровными краями, непрозрачные, блестящие, кремового цвета. Рост штриха на 2 сут умеренный, поверхность гладкая, цвет кремовый. На мясо-пептонном бульоне поверхностной пленки не наблюдается, образует осадок.

Физиологические свойства. Аэроб, хорошо растет при 29 - 30°С, рН 6,8 - 7,8. Использует нитраты, мочевину, соли аммония. Ассимилирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, галактозу, манноэу, ацетат натрия, слабо использует этиловый спирт, не сбраживает лактозу.

Штамм ауксотрофен по аргинину, биотину, тиамину, у сточив к о -ами- номасляной кислоте и S-2-аминоэтил- цистеину, на питательной среде, содержащей мелассу и гидролизат БВК, синтезирует 20- 22 г/л L-валина.

Пример 1. Культуру Corynebacterium glutamicum СН-1 выращивают в пробирках со скошенным агаром (1,2% мясо-пептонный агар) при 28 -- в течение 18 - 24 ч. 5% посевного материала, полученного смывом стерильной водой с агаровых косяков, вносят в 250 мл колбы, со- дер сащие 10 мл ферментационной среды следующего состава мас.%: меласса 20; БВК 15; СаСО 2, рН 7,2-7,4. Колбы помещают на круговую качалку (скорость вращения 180 об/мин) и проводят ферментацию в течение 72 ч при 28 - 30°С. Содержание L-валина в культуральной жидкости 20 г/л.

Пример 2. Процесс проводят аналогично примеру 1, только смыв культуры со скошенных агаров переносят в колбы емкостью 750 мл, содержащие 30 мл посевной среды следующего состава, мас.%: меласса 4, ББК 4,8, рН среды 7,2 - 7,4. Колбы помещают на круговую качалку со скоростью вращения 180 об/мин и выращивают в течение 16 - 18 ч лри 2а-30 С. 5% приготовленного таким образом посевного материала засевают в ферментационные

312326814

колбы (250 мл), содержащие 10 мл ральной жидкости составляет 22 г/л, ферментационной питательной среды, что на 8-12% вьппе по сравнению со и далее процесс проводят как в приме- способом, осу1цествляе1« 1М с актив- ре 1. Содержание L-валика в культу- ностью известного штамма.

Штамм Corynebacterixjm glutami- cum CH-l (коллекция музея промьшшен- ных микроорганизмов Института ВНИИге- нетика, коллекционный номер ЦМПМ-В- -3139) - продуцентL-валика. (Л с к ее ю О5 оо