Способ получения цитохрома С Советский патент 1986 года по МПК C12P1/06 C12P1/06 C12R1/05 

Изобретение относится к микробиологической промьгашенности и касается получения цитохрома С из микроорганизмов .

Цель изобретения - повышение выхода целевопо продукта.

Пример . Биомассу A calige nes entrophus, полученную на полу- промьппленной установке, сепарируют до концентрации сухого вещества 80 г/л и вьодерживают при 20-40 С в течение 6-24 ч при постоянном niepe- мешивании. Полученную суспензию центрифугируют. К экстракту при энергичном перемешивании постепенно добавляют сульфат аммония до 75%-ного насыщения. Осадок отделяют центрифугированием и отбрасывают. К жидкой фазе, которая содержит цитохром С, добавляют сульфат аммония до полного насыщения. Осадок, полученный в результате центрифугирования, суспендируют в 6 мл 0,005 М фосфатного буфера рН 7,5, содержащего 0,1 М NaC,, и наносят на колонку с сефадексом G 50 . (3X100 см), предварительно уравновешенную тем же буфером. При гель- фильтрации элюат выходит пятью пиками. Цитохром С находится во фракциях второго пика,которые собирают, диализируют против 0,005 М фос- фатного буфера рН 7,5 и наносят на колонку с ДЭАЗ-целлюлозой ( 2,5 х X 30 см), уравновешенную тем же буфером. Цитохром С не сорбируется н ДЭАЗ-деллюлозе и выходит с фронтом растворителя. Фракции, содержащие цитохром С, собирают и. наносят на колонку с КМ-целлюлозой (2,5x30 см

Редактор В.Цетраш Заказ 3668/26

Составитель Г.Смирнова Техред О.Сопко

Корректор

Тираж 490Подписное

БНИШШ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Лроизводственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул. Проектная,4

уравновешенную тем же буфером. Цитохром С адсорбируется на целлюлозе. Колонку промывают 500 мл 0,005 М фосфатного буфера рН 7,5. Сорбировавшиеся белки элюируют градиентом NaCl от О до 0,02 М в том же буфере. Цитохром С элюируется при содержании NaCt 0,07-0,1 М.

Фракции, содержащие цитохром С,

диализуют против буфера, не содержащего , и концентрируют рехро- матографией на колонке (2х20см ) с КМ-целлюлозой. Элюируют цитохром С минимальным объемом 0,005 М фосфатного буфера рН 7,5, содержащего О, М NaCl. Элюат диализуют и лиофильно сушат. Выход 300 мг из 1 кг биомассы (на сухой вес),

Ц р и М е р 2, Биомассу Alcatigenes entrophus Zl, лиофильно высушенную, диспергируют в воде до концентрации 50 г/л, добавляют толуол (0 02-1%) и выдерживают 24 ч при постоянном перемешивании. Осадок отделяют центрифугированием и суперна- тант фракционируют сульфатом аммония, как в примере К

Пример 3. Биомассу tigenes entrophus Z-1 , лиофильно выт- сушенную, диспергируют в воде до концентрации 100 г/л и далее осуществляют способ по примеру 1.

Выход целевого продукта 250-350 мг из I кг биомассы (на сухой вес).

Чистота получаемого продукта 92-98%.

По сравнению с известным способом увеличивается выход цитохрома С с 3% от суммарного содержания в исходном Материале до 27%.

Корректор Е.Сирохман