Способ определения хлоксила в биологических объектах Советский патент 1986 года по МПК G01N33/15 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине в частности к способам определения антигельминтика хлоксила в биологических тканях и жидкостях.

Цель изобретения - повьпиение чувствительности способа за счет использования в качестве растворителя н-гексана, -проведения хромато- графического разделения на silufol UV-254 и элюции хлоксила смесью вода/ 10%-ньй раствор н-бутанола в гек сане при определенном соотношении компонентов.

Пример 1.

Хомякам вводят хлоксил или его лекарственную форму перорально в 2%-ном крахмальном клейстере в дозе 0,5 г/кг. Содержание препарата определяют в крови Через 1, 2, 4, 6, 8, 24 и 48 ч после его введения. Определение проводят не менее чем трехкратно.

1-2 мл крови (точный об ьем) собирают во флаконы с притертой пробкой добавляют 0,1 мл 15%-ного раствора лимоннокислого натрия и экстрагируют н-гексаном в соотношении 1:5 в течение 1 мин. Экстракты собирают ппеткой в круглодонные колбы вместимостью 50 мл и выпаривают досуха на роторном испарителе. Остаток смывают с колбы сначала 0,2 мл ацетона а затем повторно 0,1 мл ацетона. Полученные растворы постепенно наносят на хроматографическую пластинку в виде одной линии длиной около 1-2 см. Пластинку помещают в камеру содержащую н-гексан, и хроматогра- фируют восходящим способом. Когда фронт растворителя пройдет не менее 3/4 пластинки, ее вынимают и сушат на воздухе 10 мин и помещают в сушильный шкаф при на 1 мин. Положение пятен на xpoMaTorpaMi-ie определяют при облучении УФ-светом с длиной волны около 250 нм по тушени флуоресценции пластинки (Rf хлоксила около О,75). Пятна смачивают с помощью капилляра 50%-ным раствором этанола и akKypaTHo соскабливают с пластинки, помещая в пробирку с притертой пробкой вместимостью 10 м Затем добавляют 1 мл дистиллированной, воды и 4 мл 10%-но о раствора н-бутанола в н-гексане. Экстрагирую

однократно в течение 3 мин. Верхний слой гексана/отделяют после йтстаи- вания в течение 2-3 мин и спектро- фотометрируют при длине волны

238+2 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм, относительно 10%-ного раствора н-бутанола в н-гексане предварительно насьпценно- го водой. Расчет содержания препарата проводят по калибровочному графику.

С целью доказательства полноты зкстрагируемости хлоксила из биологического объекта при введении его

хомякам перорально, в виде взвеси в крахмальном клейстере, в дозе 0,5 г/кг, проводили его повторную экстракцию н-гексаном. В табл. 1 приведены данные, полученные при определении хлоксила через 4 ч после его введения. Предел обнаружения пятен хлоксила на хроматограмме 1 мкг. Чувствительность обнаружения хлоксила в пробе 2,5 мкг по способупрототипу - 15 мкг).

Выбор оптимальных условий обнаружения пятен хлоксила на хромато- ррамме показан в табл. 2.

Из данных, приведенньк в табл. 2, i

видно, что оптимальные условия де- текции хлоксила достигаются при

нагревании пластинки 1-2 мин при .

35

Формула изобретения

Способ определения хлоксила в биологических объектах путем экстрак- ции органическим растворителем, очистки экстракта с последующей спектрофотометрией, отличающийся .тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в ка

честве экстрагента используют н-гексан, .очистку проводят хроматографи- ческим разделением на silufol UV-254 в системе, содержащей н-гексан, после чего хроматограмму высушивают 1-2 мин при , выявляют зону расположения хлоксила с последующими элюцией хлоксила смесью вода - 10%-ньй раствор н-бутанола в гекса- не при соотношении 1:4 и спектрофог тометрией верхнего слоя элюата.

Таблица 1

Изобретение относится к способам определения хлоксила в биологических объектах. Цель изобретения повышение чувствительности способа. Хомякам вводят хлоксил. Содержание препарата определяют в крови многократно. Производят экстрагирование н-гексаном. В системе, содержащей н-гексан очистку проводят хромато- графическим разделением на silufol UV-254. Хроматограмму высушивают 1-2 мин при ЮО с. Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении ультрафиолетовым светом. Затем проводят элюцию хлоксила смесЫо вода - 10%-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4. Верхний слой элюата подвергают спектро- фотометрии. Расчет содержания препа- рата проводят по калибровочному гра фику. Табл. 2.